dna復(fù)制ppt課件-展示頁
2025-05-21 02:01本頁面
【正文】 N AR N A 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄翻譯復(fù)制復(fù)制Reverse transcription 第一節(jié) DNA的生物合成 一、 DNA的半保留復(fù)制 復(fù)制時(shí)期 1. 半保留復(fù)制的證明 2. DNA生物合成的基本問題 ? 模板 ? 引物 ? dNTP ? DNA聚合酶 ? Mg2＋ ?在 5’3’方向延伸 二、原核細(xì)胞 DNA的復(fù)制合成 DNA聚合酶 5’ 5’ 3’ 3’ 酶 作用 DNA聚合酶 Ⅰ 5‘ － 3’ 聚合酶及外切酶作用， 3‘ － 5’ 外切酶酶作用，可校正 /修復(fù) DNA鏈，還可切除引物 DNA聚合酶 Ⅱ 5‘ － 3’ 聚合酶及 3‘ － 5’ 外切酶酶作用，可校正 /修復(fù)DNA鏈 DNA聚合酶 Ⅲ 與酶 Ⅰ 作用類似，酶活高，是主要的鏈延伸酶（聚合酶 replicase） ? 岡崎片段與半不連續(xù)復(fù)制（ okazaki 1968年） ? 復(fù)制方向： 單起點(diǎn)、雙向或單向復(fù)制 ? 引物（ primer）及引物酶 (primase) ? 引物的切除與連接 5’－ 3’外切酶 切除引物 （ DNA聚合酶 Ⅰ ） DNA連接酶 （大腸桿菌 DNA連接酶 /T4連接酶） ? 復(fù)制的起始 辨識(shí)起點(diǎn)（富含 AT區(qū)） 解旋（拓?fù)洚悩?gòu)酶） 解鏈 單鏈結(jié)合蛋白（ SSB） 三、真核 DNA的復(fù)制合成 真核 DNA的合成的基本過程類似于原核 DNA，不同之處： ? 多復(fù)制起點(diǎn) ? 至少有五種聚合酶 αβγδε ? 端粒的復(fù)制依賴于端粒酶 真核生物 DNA聚合酶 α β γ δ ε 亞基數(shù) 4 4 4 2 5 分子量（ KD) ＞ 250 3638 160300 170 256 細(xì)胞內(nèi)定位 核 核 線粒體 核 核 5′→3′ 聚合活性 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 3′→5′ 外切活性 － － － － － 功能 復(fù)制、引發(fā) 修復(fù) 復(fù)制 復(fù)制 復(fù)制 DNA復(fù)制過程 真核生物 DNA復(fù)制叉結(jié)構(gòu)示意圖 四、反轉(zhuǎn)錄作用（ RNA指導(dǎo)下的 DNA合成） 1970年， Temin和 Baltimore在致癌 RNA病毒中發(fā)現(xiàn)了反轉(zhuǎn)錄酶（ Reverse Transcriptase） 需引物（ tRNA）、 dNTP、模板（ RNA、 DNA）、 5’3’方向聚合 H鍵斷開 常由核糖核苷酶 H（ RNAase H）專一切除 RNA DNA分子中的RNA,全部或部分去除 RNA DNA 合成的 DNA鏈稱負(fù)鏈 ,然后由依賴 DNA的 DNA聚合酶催化下 ,以負(fù)鏈為模板合成一正鏈這樣形成的 DNA稱前病毒 DNA,前病毒DNA可嵌入宿主細(xì)胞 DNA中 (稱整合 )或潛伏于宿主細(xì)胞用其負(fù)鏈 (依賴 DNA的 RNA聚合酶 )出 RNA,合成外殼蛋白 .1 五、 DNA的損傷與修復(fù) 損傷可造成突變或致死 突變（ mutation）： 指一種遺傳狀態(tài)，可以通過復(fù)制而遺傳的 DNA結(jié)構(gòu)的任何永久性改變。 ? 損傷原因 ? 物理（紫外 （見下頁） 、高能射線、電離輻射） ? 化學(xué)（烷基化試劑、亞硝酸鹽、堿基類似物） ? 生物因素（堿基對(duì)置換、堿基的插入 / 缺失造成移碼） ? 當(dāng) DNA受到大劑量紫外線（波長(zhǎng) 260nm附近）照射時(shí)，可引起 DNA鏈上相鄰的兩個(gè)嘧啶堿基共價(jià)聚合，形成二聚體，例如 TT二聚體。 ? 是一種高度專一的修復(fù)形式，只分解由于UV照射而形成的嘧啶二聚體。這是一種比較普遍的修復(fù)機(jī)制。 重組修復(fù)（ rebination repair） ? 又稱復(fù)制后修復(fù)（ postreplication repair） ? 受損傷的 DNA在進(jìn)行復(fù)制時(shí)，跳過損傷部位，在子代 DNA鏈與損傷相對(duì)應(yīng)部位出現(xiàn)缺口。并非完全校正。 3. 基因重組與 DNA克隆（基因工程） ? 限制性內(nèi)切酶 能識(shí)別 DNA特定核苷酸序列的核酸內(nèi)切酶 ? 分布： 主要在微生物中 。 ? 結(jié)果： 產(chǎn)生黏性未端 （ 堿基互補(bǔ)配對(duì) ） 。 ? 一種限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列，并在特定的切割點(diǎn)上將 DNA 分子切斷。 運(yùn)載體種類 ： 質(zhì)粒、噬菌體和動(dòng)植物病毒。 ? DNA重組與克隆 ① 從
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