蛋白組學(xué)二維電泳ppt課件-展示頁
2025-05-16 13:46本頁面
【正文】 存下來。 程序 ? 1. 分析型銀染 （ 堿性銀氨法， 不能用于質(zhì)譜鑒定） (1) 水洗膠 5 min； (2) 40%乙醇， 10%乙酸固定 1 hr； (3) 5%乙醇， 5%乙酸固定過夜； (4) 水洗 20 min兩遍； (5) 5%戊二醛 1 h； (6) 水洗 30 min， 四遍； (7) 250mL新鮮配制的銀氨液 (1mL NaOH 與 5mL 飽和氨水混合再加 10mL 20%AgNO3)/膠 45 min； (8) 水洗 3 min， 三遍； (9) mL 1%檸檬酸、 125μL 37% 甲醛 /膠顯色； (10) 5%乙酸停顯 10min； (11) 水洗 10 min三遍。 （ 2）相對于考染，靈敏度高，可達(dá) 200pg。 堿性銀氨染色法的原理是用氨水來形成銀氨復(fù)合物，銀氨復(fù)合物與膠內(nèi) SDS蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)合，然后在酸性條件下用福爾馬林將銀氨還原成金屬銀。 （二）銀染 ? 原理： 堿性銀氨 （ Ag(NH3)2+）染色法和 酸性硝酸銀 （ AgNO3）染色法。 （ 4）保存：凝膠脫色后水洗掃描備份，用保鮮膜包裹，一個(gè)月內(nèi)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定；長時(shí)間保存需將蛋白點(diǎn)切下，進(jìn)一步脫色后貯于 80 ℃ 。 （ 3）脫色：多次更換脫色液，直至背景脫凈，稍稍提高溫度可加快脫色。 （ 2）染色：凝膠浸泡于染色液中至少 2h。 Coommassie Brilliant Blue G250 考染程序 ? 考染程序至少 600多種，主要變換是將以下程序中的醋酸換成三氯乙酸、磷酸或高氯酸，但三氯乙酸易使谷氨酸羧基側(cè)鏈不可逆酯化，造成肽譜數(shù)據(jù)復(fù)雜化。 ? 考染機(jī)理
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