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章dna的復(fù)制和修復(fù)-展示頁

2025-05-12 08:31本頁面
  

【正文】 ── 切除修復(fù)作用 : ?焦磷酸解作用 : DNApolⅠ 的這種活性可以催化 339。 ?539。對(duì)岡崎片段 539。每次能切除 10個(gè)核苷酸?!?39。脫氧核苷酸?!?39。→339。 方向識(shí)別和切除不配對(duì)的 DNA生長(zhǎng)鏈末端的核苷酸(對(duì)單鏈作用)。 外切酶活性 ── 校對(duì)作用 : 這種酶活性的主要功能是從 339。 ? 339。在引物 DNA或 RNAOH末端,以 dNTP為底物,按模板 DNA上的指令由 DNApolⅠ 逐個(gè)將核苷酸加上去,就是 DNA polⅠ 的聚合作用。→339?!?39。→339。 外切酶活性。 外切酶活性,小片段有 539。 經(jīng)蛋白酶處理后,酶分子分裂成兩個(gè)片段:大片段( Klenow片段)有聚合酶和 339。酶分子空間結(jié)構(gòu)近似球體。 由 DNA聚合酶催化的 DNA合成反應(yīng) A B C D 模板 引物 產(chǎn)物 DNA聚合酶 大腸桿菌共有 5種不同的 DNA聚合酶: DNA聚合酶 Ⅰ , II, III, IV, V。 5180。 3180。 5180。 DNA聚合酶催化的鏈延長(zhǎng)反應(yīng) 3180?!?339。 ?反應(yīng)需要有引物 3‘OH存在 。 +(n1+n2+n3+n4)PPi DNA聚合酶的反應(yīng)特點(diǎn): ?以四種脫氧核苷酸三磷酸 (dNTP)為底物 。 實(shí)驗(yàn)表明 , 它們都在一個(gè)固定的起點(diǎn)開始復(fù)制 , 復(fù)制叉移動(dòng)方向大多是雙向的 , 即形成兩個(gè)復(fù)制叉或生長(zhǎng)點(diǎn) , 分別向兩側(cè)進(jìn)行復(fù)制; ?也有的是單向的 , 只形成一個(gè)復(fù)制叉或生長(zhǎng)點(diǎn) DNA的雙向和單向復(fù)制 復(fù)制叉 起始點(diǎn) 起始點(diǎn) 起始點(diǎn) 復(fù)制叉 復(fù)制叉 未復(fù)制 DNA 單向復(fù)制 雙向復(fù)制 環(huán)狀 DNA復(fù)制時(shí)所形成的 q結(jié)構(gòu) 起始點(diǎn) 復(fù)制叉的推進(jìn) 用遺傳學(xué)和生物化學(xué)的方法可以確定大腸桿菌染色體 DNA的復(fù)制起點(diǎn)在基因圖譜上的位置。 ?復(fù)制叉 : DNA復(fù)制的生長(zhǎng)點(diǎn)形狀如同分叉故稱為復(fù)制叉 (replication fork)。 ?復(fù)制起點(diǎn) : DNA復(fù)制在生物細(xì)胞中要從 DNA分子上特定位置開始。 5 . 在紫外光下可以看到形成的區(qū)帶。 3 . 裂解細(xì)胞。 實(shí)驗(yàn)步驟: 1 . 大腸桿菌放在 15NH4C1培養(yǎng)基中生長(zhǎng) 12代。由于子代 DNA分子中一條 鏈來自親代,另一條鏈?zhǔn)切潞铣傻?,這種復(fù)制方式稱為半保留復(fù)制 (semi conservative replication)。 一、 DNA的半保留復(fù)制 DNA在復(fù)制時(shí),兩條鏈解開分別作為模板,在 DNA聚合酶的催化下按堿基互補(bǔ)的原則合成兩條與模板鏈互補(bǔ)的新鏈,以組成新的 DNA分子。 Crick提出 DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型后 , 1958年 , Crick提出了 “ 中心法則 ” (Central dogma)揭示了遺傳信息的傳遞規(guī)律 。 第 34章 DNA的復(fù)制和修復(fù) ( DNA Replication and Repair) 內(nèi) 容 ?DNA的復(fù)制 ?DNA的損傷和修復(fù) ?DNA的突變 DNA是生物遺傳的主要物質(zhì)基礎(chǔ) , 生物機(jī)體的遺傳信息以密碼的形式編碼在 DNA分子上 , 表現(xiàn)為特定的核苷酸排列順序 , 并通過 DNA的復(fù)制由親代傳遞給子代 。 1953年 Watson amp。 蛋白質(zhì) 逆轉(zhuǎn)錄 翻譯 轉(zhuǎn)錄 復(fù)制 復(fù)制 DNA RNA 第一節(jié) DNA的復(fù)制 DNA的復(fù)制:是指以原來 DNA分子為模板合成 出相同分子的過程。這樣新形成的兩個(gè) DNA分子與親代DNA分子的堿基順序完全一樣。 Parental Strands Strand duplication 1/2 old 1/2 new Strand separation 半保留復(fù)制的實(shí)驗(yàn)證明 1958年 Meselson和 Stahl的實(shí)驗(yàn)首次有力地支持了半保留復(fù)制方式。 2 . 再將細(xì)菌移到只含有 14NH4C1的培養(yǎng)基中 培養(yǎng)。 4 . 將裂解液放在 CsC1溶液中進(jìn)行密度梯度離 心。 二 、 DNA復(fù)制的起點(diǎn)和方式 ?復(fù)制子 : DNA復(fù)制從起點(diǎn)開始直到終點(diǎn)為止,每一個(gè)這樣的 DNA單位稱為復(fù)制子或復(fù)制單元(replicon)。這個(gè)特定的位置就稱為復(fù)制起點(diǎn) (Origin of replication),用 ori表示。 ?原核生物的染色體和質(zhì)粒 , 真核生物的細(xì)胞器 DNA都是環(huán)狀雙鏈分子 。 起點(diǎn) oriC ilv thr 0/180 Lac attl 25 50 75 malA cysC tryA his trp Tre終點(diǎn) 大腸桿菌復(fù)制起點(diǎn)和終點(diǎn)在基因圖譜上的位置 83 min 33 min Evidence points to bidirectional replication Label at both replication forks DNA復(fù)制的不同方式 型雙向 型單向 A. 直線雙向 三、 DNA聚合反應(yīng)有關(guān)的酶 酶 反應(yīng)式 : n1dATP DNA polE dAMP n2dGTP + DNA dGMP n3dCTP Mg2+ dCMP n4dTTP dTMP DNA 1. DNA的聚合反應(yīng)和聚合酶 1956年, Kornberg在大腸桿菌提取液中發(fā)現(xiàn) DNA聚合酶,以后陸續(xù)在不同生物中找到。 ?反應(yīng)需要模板的指導(dǎo) 。 ?DNA鏈的生長(zhǎng)方向是 539。 ?產(chǎn)物 DNA的性質(zhì)與模板相同 。 518
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