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疫共沉淀原理及注意事項-展示頁

2025-05-09 02:36本頁面
  

【正文】 ↓ PA珠子加入蛋白裂解液 (去除非特異性蛋白背景 ) ↓ 離心去 PA珠子,取上清 ↓ 測蛋白濃度 (BCA法 ) ↓ 加一抗反應(yīng) (4℃ 過夜 ) ↓ 加 PA珠子捕捉復(fù)合物 (室溫 1h或 4℃ 過夜 ) ↓ 離心,收集沉淀,預(yù)冷 RIPA Buffer洗 3遍 ↓ 上樣緩沖液懸浮沉淀,加熱游離抗原、抗體、珠子 ↓ ↓ 四 實驗結(jié)果分析 ?SDSPAGE ?Western blotting分析 ?質(zhì)譜分析檢測目的蛋白 SDSPAGE結(jié)果分析 標(biāo)難曲線只對同一塊凝膠上的樣品的分子量測定才具有可靠性。 ProteinA/G的作用及具體原理 ? “捕獲”抗體,形成復(fù)合物, 抗體 目的蛋白 ProteinA/G beads 非共價健結(jié)合 ProteinA/Ggarose beads 共價結(jié)合 ? 加樣緩沖液 煮沸變性 離心 Protein A/G beads↓ ? EP管(抗體 目的蛋白 少量非特異性吸附蛋白)。( xy抗原、 x抗體) proteinA/G有一個很重要的特性就是能與抗體的 Fc段結(jié)合 agarose bead 瓊脂糖珠
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