獸藥特殊毒性試驗(yàn)技術(shù)要求-展示頁(yè)
2025-01-24 01:15本頁(yè)面
【正文】 。二、微核試驗(yàn)動(dòng)物選擇成年健康小鼠（應(yīng)注明品系），將小鼠隨機(jī)分為受試組和對(duì)照組。受試組與陰性對(duì)照組的背景菌苔應(yīng)一致，陰性對(duì)照組的自發(fā)回?cái)?shù)應(yīng)在正常值之內(nèi)?！?，依次加入無(wú)菌小試管中，37℃水浴振蕩培養(yǎng)20分鐘后（也可采用平板摻入法），加入45℃，混勻倒入含底層培養(yǎng)基的平皿上，37℃培養(yǎng)48小時(shí)。37℃水浴振蕩培養(yǎng)，每毫升活菌數(shù)不得少于1～2109。制得的S9需作S9活力測(cè)定。在低溫條件下，無(wú)菌操作取出肝臟，用KCI液淋洗后置勻漿器中制成勻漿。加S9混合液時(shí)要同時(shí)作不加S9混合液的對(duì)照平皿。溶劑一般以水為溶劑，選用其他溶劑需說(shuō)明理由?！?0μl/皿之間選擇，～。劑量分組每次試驗(yàn)要求4～5個(gè)劑量組，每個(gè)劑量做三個(gè)平行平皿。喂養(yǎng)繁殖毒性試驗(yàn)一般只做一代繁殖毒性，一代為陽(yáng)性時(shí)應(yīng)再做第二代繁殖毒性，即：各項(xiàng)試驗(yàn)方法如后：一、艾母氏（Ames）試驗(yàn)方法菌種組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門氏菌TA97a、TA9TA100、TA102四個(gè)標(biāo)準(zhǔn)株。這樣，在致突變?cè)囼?yàn)中必須至少做三項(xiàng)試驗(yàn)。在致突發(fā)試驗(yàn)中，考慮到檢測(cè)終點(diǎn)應(yīng)有原核細(xì)胞和真核細(xì)胞，基因突變和染色體畸變，體內(nèi)和體外試驗(yàn)系統(tǒng)，體細(xì)胞和生殖細(xì)胞之分，確定Ames試驗(yàn)和微核試驗(yàn)為必做試驗(yàn)。新獸藥特殊毒性試驗(yàn)技術(shù)要求 限于國(guó)內(nèi)現(xiàn)有條件，經(jīng)研究確定新獸藥特殊毒性試驗(yàn)（“三致試驗(yàn)”）一般只進(jìn)行致突變?cè)囼?yàn)和致畸試驗(yàn)。精子畸形、睪丸精原細(xì)胞染色體畸變、顯性致死三者可以任選一項(xiàng)，若前二者任一項(xiàng)為陽(yáng)性均必做顯性致死試驗(yàn)。在致畸試驗(yàn)中，對(duì)一般獸藥來(lái)說(shuō)，傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)為必做試驗(yàn)；對(duì)飼料藥物添加劑還應(yīng)增加養(yǎng)致畸試驗(yàn)，喂養(yǎng)繁殖毒性試驗(yàn)。菌種鑒定以上菌種需分別作抗氨芐、抗四環(huán)素、抗紫外、結(jié)晶紫、組氨酸需求、自發(fā)回變數(shù)的鑒定。高劑量以不抑菌為原則。選定后的劑量應(yīng)配制成適當(dāng)濃度，使每皿加入受檢物的體積為100μl或200μl。對(duì)照物每次檢測(cè)要求同時(shí)作陽(yáng)性和陰性對(duì)照；用已知的陽(yáng)性物作陽(yáng)性對(duì)照，用溶劑作陰性對(duì)照。S9制備選體重200克左右成年雄性大鼠，經(jīng)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)后宰殺，處死前12小時(shí)禁食。低溫離心后分裝，保存于液氮或80℃冰箱中。試驗(yàn)步驟將經(jīng)鑒定合格的TA97a、TA9TA100和TA102菌株分別接種于增菌培養(yǎng)液中。受檢物，包括對(duì)照物，按設(shè)計(jì)劑量配制。結(jié)果評(píng)價(jià)在計(jì)數(shù)菌落前應(yīng)先觀察背景菌苔的生長(zhǎng)情況，正常的背景菌苔應(yīng)呈均勻的
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