【正文】 轉(zhuǎn)錄必需的。 結(jié)合位點(diǎn) TTGACA TATAAT 起始位點(diǎn) 10~18b 5~8bp 35序列 10序列 CAPcAMP ?真核生物啟動(dòng)子 ?真核生物三種 RNA聚合酶都有各自的啟動(dòng)子。 ?上游順序： 起始位點(diǎn)上游 50到 150bp之間的順序；是某些 RNA聚合酶的激活蛋白（ CAPcAMP復(fù)合物）的結(jié)合部位，也是拓?fù)洚悩?gòu)酶的結(jié)合部位，這有利于轉(zhuǎn)錄起始的超螺旋狀態(tài)的產(chǎn)生。 ? 10序列：又稱 TATA盒（ Pribnow box），是 RNA聚合酶全酶的緊密結(jié)合位點(diǎn)， 有助于 DNA局部雙鏈的解開(kāi)， 決定著雙鏈解開(kāi)的速度和轉(zhuǎn)錄的方向。 ? 不同啟動(dòng)子對(duì) RNA聚合酶的親和力各不同，對(duì)轉(zhuǎn)錄起始頻率（基因表達(dá)的程度）有重要的調(diào)控作用。 ?類似于噬菌體 RNA聚合酶。 ?噬菌體 RNA聚合酶 ?僅由一條多肽鏈組成； ?合成速度很快，在 37℃ 時(shí)可達(dá)約 200核苷酸 /秒； ?噬菌體 RNA聚合酶只能識(shí)別噬菌體本身所具有的啟動(dòng)子，不能識(shí)別其他啟動(dòng)子。 ? C末端結(jié)構(gòu)域 (CTD)：最大亞基的 C末端具有 7個(gè)氨基酸 （ TyrSerProThrSer ProSer） 的重復(fù)序列（酵母重復(fù) 26次，哺乳類重復(fù) 52次），含有多個(gè)Ser和 Thr磷酸化位點(diǎn)。 130KDa 與 DNA、底物和新生的 RNA結(jié)合。 ? 由 8~14個(gè)亞基組成，分子質(zhì)量為 500KDa。 ?RNA聚合酶 Ⅲ ：負(fù)責(zé)合成 tRNA和核內(nèi)小 RNAs，其活性可被高濃度的 α鵝膏蕈堿所迅速抑制。 ?每個(gè)酶分子有兩個(gè)大亞基，還有 10個(gè)左右小亞基。 ? 核心酶與不同的 ?亞基結(jié)合，識(shí)別不同的啟動(dòng)子。 ? 與 DNA結(jié)合并使之解旋、解鏈，另外還具有重新使 DNA螺旋化作用。 三、 RNA聚合酶 ?RNA聚合酶的特點(diǎn) ?可啟動(dòng) RNA的合成，不需引物； ?只以一條 DNA鏈或其一段 DNA為模板； ?堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則： A與 U， G與 C配對(duì)； ?合成方向： 5’ →3’ ； ?合成是連續(xù)進(jìn)行的； ?無(wú)校讀功能； ?需要 Mg2+或 Mn2+離子 ?可與多種調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄的蛋白因子相互作用。 第二節(jié) 轉(zhuǎn)錄的條件 一、底物 四種脫氧核糖核苷酸，即 ATP， GTP， CTP 和 UTP。 ? 轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)（ startpoint）：與新生 RNA鏈第一個(gè)核苷酸相對(duì)應(yīng)的 DNA鏈上的堿基，此點(diǎn)通常用 +1表示； ? 上游（ upstream）：轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)前面（ 5’末端）的序列，用負(fù)數(shù)表示； ? 下游（ downstream）：轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)后面（ 3’末端）的序列，用正數(shù)表示。 ?終止子 (terminator)：提供轉(zhuǎn)錄停止信號(hào)的 DNA序列，在 DNA模板的特異位點(diǎn)處終止 RNA的合成。 ?轉(zhuǎn)錄的單向性： RNA轉(zhuǎn)錄合成時(shí)，只能向一個(gè)方向進(jìn)行聚合，所依賴的模板 DNA鏈的方向?yàn)?3’→5’ ，而RNA鏈的合成方向?yàn)?5’→3’ 。 ? 單順?lè)醋樱汉铣傻?RNA中只含一個(gè)基因的遺傳信息。 ? 有意鏈與反意鏈并非固定不變。 ? 模板鏈 (template strand)及反（無(wú)）意鏈(antisense strand)：指導(dǎo) RNA合成的 DNA鏈，又稱為 負(fù)鏈（ － 鏈）。 第一節(jié) 轉(zhuǎn)錄的基本特點(diǎn) ? RNA分子只有一條鏈可轉(zhuǎn)錄，模板鏈并不總是在同一單鏈上。 ?RNA前體（ RNA precursor）：轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的初級(jí)轉(zhuǎn)錄本，需經(jīng)加工為成熟的 RNA后才具有生物學(xué)活性與功能。第 一 章 RNA的生物合成 ?轉(zhuǎn)錄的基本特點(diǎn) ?轉(zhuǎn)錄的條件 ?原核生物的轉(zhuǎn)錄 ?真核生物的轉(zhuǎn)錄 ?RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加工 ?RNA的復(fù)制 ?RNA生物合成的兩種方式 ? 轉(zhuǎn)錄： DNA指導(dǎo)的 RNA合成，生物體內(nèi)的主要合成方式。 ? RNA復(fù)制： RNA指導(dǎo)的 RNA合成，常見(jiàn)于病毒。 ?不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄（ asymmetric transcription）： 轉(zhuǎn)錄時(shí)，只以雙鏈 DNA中的一條鏈作為模板進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，將遺傳信息由 DNA傳遞給 RNA的現(xiàn)象 。 ? 每個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄都受到相對(duì)獨(dú)立的調(diào)控。 ? 編碼鏈 (coding strand)及有意鏈 (sense strand)：不作為轉(zhuǎn)錄模板的另一條 DNA鏈，又稱為 正鏈（ + 鏈） 。 ?轉(zhuǎn)錄的連續(xù)性 ? RNA轉(zhuǎn)錄合成時(shí)，以 DNA作為模板，在 RNA聚合酶的催化下，從頭連續(xù)合成一段 RNA鏈（不需要引物），各條 RNA鏈之間無(wú)需再進(jìn)行連接。 ? 多順?lè)醋樱汉铣傻?RNA中含有幾個(gè)基因遺傳信息。 ?轉(zhuǎn)錄不需要引物 ?有特定的起點(diǎn)和終點(diǎn) ?啟動(dòng)子 (promotor) ： RNA聚合酶特異識(shí)別、結(jié)合和開(kāi)始轉(zhuǎn)錄的一段 DNA序列。 ?轉(zhuǎn)錄單位 （ transcript） ： DNA鏈上從啟動(dòng)子到終止子為止的一段 DNA序列。 阻遏 蛋白 Lac I P2 O LacZ LacY LacA P1 RNA聚合酶 阻遏蛋白和 乳糖復(fù)合物 乳糖或 IPTG 轉(zhuǎn)錄 Lac I P2 O LacZ LacY LacA P1 ? 操縱子（ operon）：原核生物基因轉(zhuǎn)錄的功能單位，結(jié)構(gòu)上包括調(diào)節(jié)基因、啟動(dòng)子、操作基因、多順?lè)醋樱ńY(jié)構(gòu)基因區(qū)）和終止子等功能區(qū)。 （ NMP） n + NTP （ NMP） n+1 + PPi 二、模板 轉(zhuǎn)錄反應(yīng)需要 DNA作為模板，且不同的 RNA聚合酶對(duì) DNA兩股鏈以及不同的 DNA段落都有一定的選擇性。 ?大腸桿菌 RNA聚合酶 ? 每個(gè)細(xì)胞中約有 3000個(gè) RNA聚合酶分子； ? 組成：全酶由 2 個(gè) α、 β、 β’、 ?、 σ 5種亞基組成，橢圓球形，可結(jié)合約 60個(gè)核苷酸； 全酶 核心酶（ α2ββ’ ? ） σ因子 ? σ因子與其它部分的結(jié)合不緊密，它易于與 α2β’β ? 分離； ? 核心酶： 沒(méi)有 σ亞基的酶，只催化 RNA鏈的延長(zhǎng)，對(duì)轉(zhuǎn)錄的起始無(wú)作用； ? 各亞基的功能 α： 識(shí)別啟動(dòng)子并與其牢固結(jié)合； β： 聚合作用的催化位點(diǎn)， 催化形成磷酸二酯鍵； β’：全酶或核心 酶與 DNA模板結(jié)合的部位； σ：特異地 識(shí)別啟動(dòng)子，起始轉(zhuǎn)錄； ?：？ ?RNA聚合酶的作用 ? 識(shí)別啟動(dòng)子：依賴于 ?亞基， ?亞基參與轉(zhuǎn)錄的起始，并決定轉(zhuǎn)錄的方向。 ? 催化 RNA聚合反應(yīng)，負(fù)責(zé)三種 RNA合成。 ?真核生物 RNA聚合酶