【正文】 g→ 100ml 水 =%） CCl4 北京化工廠提供 批號(hào)： 080121 臨用前用大豆油制成 %的四氯化碳油溶液。 總蛋白測(cè)定試劑盒 北京北化康泰臨床 試劑有限公司 批號(hào)： 20202028 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 小白鼠 清潔級(jí)昆明種♀♂兼用，體重 24+2g，北京醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，許可證號(hào)： SCXK（京） 20200001 儀器 電子稱： ACSAJJ 交直流電子計(jì)價(jià)秤，中航第一集團(tuán)太原航空儀表有限公司生產(chǎn)。 數(shù)顯恒溫?cái)嚢杷?，蘇州威爾實(shí)驗(yàn)用品有限公司生產(chǎn)。 離心機(jī)（ KDC1044 低速離心機(jī)），科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司生產(chǎn)。l→ 30ml 大豆油）， 第七天灌胃給藥后停食。 稱肝臟、脾 脫臼處死小鼠，剖取肝臟、脾稱重。通過(guò)測(cè)試可反映出血清（漿）、乳汁等細(xì)胞外液、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、培養(yǎng)細(xì)胞以及各種動(dòng)植物的細(xì)胞水平及亞細(xì)胞水平的脂質(zhì)過(guò)氧化物的量。如：醛基（丙二醛 MDA）、酮基、羥基、羰基、氫過(guò)氧基可內(nèi)過(guò)氧基，以及新的氧自由基等。因此，初始的一個(gè)活性氧能導(dǎo)致很多脂類分解產(chǎn)物的形成，這些分解產(chǎn)物中，一些是無(wú)害的，另一些則能引起細(xì)胞代謝及功能障礙，甚至死亡。因而測(cè)試 MDA 的量常?？煞从硻C(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，間接地反映出細(xì)胞損傷的程度。 試劑盒測(cè)試原理： 過(guò)氧化脂質(zhì)降狗解產(chǎn)物中的丙二醛（ MDA）可與硫代巴比妥酸（ TBA）縮合，形成紅色產(chǎn)物，在532nm 處有最大吸收峰。 測(cè)試所需儀器設(shè)備 可見光分光光度計(jì)，可調(diào)到 95℃左右的恒溫水浴箱（或者鋁鍋內(nèi)放幾個(gè)去掉蓋子的易拉罐，將罐壁及底部穿數(shù)十個(gè)孔，以便水的進(jìn)入，用來(lái)代替水浴箱。 100T 試劑盒組成與配制 試劑一：液體 20ml1 瓶，室溫保存。 試劑二：液體 12ml1 瓶，用時(shí)每瓶加 340ml 雙蒸水混勻， 4℃冷藏（注意不要碰到皮膚上）。（冰醋酸自備注） 標(biāo)準(zhǔn)品： 10nmol/ml 四乙氧基丙烷 5ml1 瓶， 4℃冷藏。 [注 ]：冰醋酸又名乙酸，一般的醫(yī)藥公司、化劑公司均有售，要購(gòu) AR 級(jí)即分析純級(jí)的乙酸較好，乙酸含量為 99%以上。（天冷時(shí)會(huì)凝固，每次測(cè)試前適當(dāng)水浴加溫以加速溶解，直至透明方可應(yīng)用）。 試劑三： 粉劑 1 支，用時(shí)將粉劑加入到 90℃ 100℃的熱雙蒸水 30ml 中，（在溶解過(guò)程中可適當(dāng)加熱），充分溶解后用雙蒸水補(bǔ)足至 30ml 再加冰醋酸 30ml，混勻，配好的試劑避光冷藏。測(cè)試盒冷藏至少可保存一年。 規(guī)范操作方法： 操作表： 標(biāo)準(zhǔn)管 標(biāo)準(zhǔn)空白管 測(cè)定管 測(cè)定空白管 10nmol/ml 標(biāo)準(zhǔn)品（ ml） 無(wú)水乙醇（ ml） 測(cè)試樣品（ ml） 3 試劑一（ ml） 混勻（搖動(dòng)幾下試管架） 試劑二（ ml） 3 3 3 3 試劑三（ ml） 1 1 1 50%冰醋酸 1 旋渦混勻器混勻，試管口用保鮮膜扎緊，用針頭刺一小孔， 95℃水浴（或用鍋開蓋煮沸） 40 分鐘，取出后流水冷卻，然后 35004000 轉(zhuǎn) /分，離心 10 分鐘，（ 3000 轉(zhuǎn) /分以下離心時(shí)間需延 長(zhǎng)，目的使沉淀完全）。 參考取樣量：血清（漿）取 。食油取 ,肝組織、心肌、肌肉組織、螺旋藻等，取 5%或 10%勻漿 較好。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 時(shí)，則標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去標(biāo)準(zhǔn)空白管的吸光度為 。 計(jì)算公式： ① 血清（漿）中 MDA 含量計(jì)算公式： 血清（漿）中 MDA 含量 測(cè)定管吸光度 測(cè)定空白管吸光度 （ nmol/ml） = 標(biāo)準(zhǔn)品濃度 樣本測(cè)定前 標(biāo)準(zhǔn)管吸光度 標(biāo)準(zhǔn)空白管吸光度 （ 10nmol/ml） 稀釋倍數(shù) ② 組織中 MDA 含量計(jì)算公式： 測(cè)定管吸光度 測(cè)定空白管吸光度 組織中 MDA 含量 = ——————————————— 標(biāo)準(zhǔn)品濃度 247。l,測(cè)定 MDA含量。 試劑二：液體 10ml1 瓶， 4℃保存 6 個(gè)月。 試劑四：液體 350ul2 支， 4℃保存不可冷凍； 4 號(hào)稀釋液 10ml1 瓶， 4℃保存 6 個(gè)月。配好的試劑四 4℃保存，不可冷凍。 試劑五：粉劑 1 支，用時(shí)加 70℃ 80℃熱雙蒸水 75ml 溶解后備用，若加熱過(guò)程中水分 蒸發(fā)減少，此時(shí)必須用蒸餾水補(bǔ)充至 75ml，配好后試劑避光 4℃冷藏 6 個(gè)月。 顯色劑的配制：按試劑五：試劑六：冰乙酸 =3： 3： 2 的體積比配顯色劑， 4℃ 避光冷藏 3 個(gè)月。 試劑二：液體 5ml1 瓶， 4℃ 10℃保存 6 個(gè)月。 試劑四：液體 350ul1 支， 4℃保存，不可冷凍； 4 號(hào)稀釋液 5ml1 瓶， 4℃保存 6 個(gè)月。配好的試劑四 4℃保存，不可冷凍。 試劑五：粉劑 1 支，用時(shí)加 70℃ 80℃蒸餾水 溶解后備用，若加熱過(guò)程中水分 蒸發(fā)減少，此時(shí)必須用蒸餾水補(bǔ)充至 ，配好后的試劑避光 4℃冷藏保存 6 個(gè)月。 顯色劑的配制：按試劑五：試劑六：冰乙酸 =3： 3： 2 的體積比配顯色劑， 4℃避光冷藏 3 個(gè)月。 計(jì)算： 血清（漿）、心肌灌流液、腎透析液、細(xì)胞培養(yǎng)液等總 SOD 活力計(jì)算： (1)定義：每亳升反應(yīng)液中 SOD 抑制率達(dá) 50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的 SOD 量為一個(gè) SOD 活力單位（ U）。 50% 稀釋倍數(shù) 稀釋倍數(shù) 對(duì)照管吸光度 組織勻漿中總 SOD 活力計(jì)算： (1)定義：每毫克組織蛋白在 1ml 反應(yīng)液中 SOD 抑制率達(dá) 50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的 SOD 量為一個(gè) SOD 活力單位（ U）。 50% 247。l，測(cè)定 SOD的活力； 2結(jié)果 、肝重及脾重 組別 大 號(hào) 編 號(hào) 體重 （ g) 體重 （ g) 體重 （ g) 肝重（ g） 脾重 (g) 空白對(duì)照 1 ♀ 1 25 25 25 2 2 17 18 22 3 3 27 27 31 4 4 24 24 26 5 5 15 17 19 6 6 25 26 26 7 ♂ 1 26 28 29 8 2 23 26 29 9 3 31 32 34 10 4 25 29 33 11 5 28 31 33 吐溫對(duì)照 12 ♀ 1 26 26 29 13 2 25 24 25 14 3 16 18 21 15 4 23 24 24 16 5 16 18 20 17 6 21 23 26 18 7 23 20 19 ♂ 1 31 33 35 20 2 22 26 27 21 3 30 33 36 22 5 29 31 33 23 ♀ 1 25 25 26 24