【正文】 /4+法”，是最經(jīng)典的RA誘導法。ng)于胚胎癌細胞（P19）向神經(jīng)元細胞和神經(jīng)膠質(zhì)細胞的誘導, 在2448h內(nèi)有神經(jīng)樣細胞移出。,1982年JonesWilleneuve首次報道將RA運用(y249。 RA進入靶細胞后，由CRABP運送至細胞核，與核受體（RAR和 RXR）結(jié)合。ix237。,ESC誘導分化的常用方法(fāngfǎ): 1. 加入誘導細胞分化的因子或化學物質(zhì)，如VGEF、 bFGF 、DMSO和RA等 2. 將ESC與特定的細胞共培養(yǎng) 3. 將某種分化誘導因子的基因轉(zhuǎn)入ESC內(nèi),第三十頁，共四十五頁。,第二十八頁，共四十五頁。,目前，在體外通過加入一些誘導劑或細胞因子進行誘導分化實驗，還很難模擬體內(nèi)的正常分化過程，任何一個誘導體系都不能保證誘導ESC定向分化為某一類型細胞，只能(zhī n233。 ESC的誘導分化：胚胎干細胞在外界因素的刺激下逐漸發(fā)育為具 有特殊形態(tài)和功能的專一細胞的過程。nɡ)的細胞類群的過程。,ESC的誘導分化： 細胞分化cell differentiation：在個體發(fā)育中，由一種相同(xiānɡ t243。,人胚胎(pēitāi)著床前的發(fā)育過程：,從人囊胚的內(nèi)細胞群中分離(fēnl237。,從小鼠囊胚的內(nèi)細胞群中分離(fēnl237。qǔ)一些優(yōu)良 性狀，利用基因操作成功的ESC進行嵌合體的制備，如果出現(xiàn) 生殖系嵌合，就可以把優(yōu)良性狀遺傳下去。,ESC的鑒定嵌合體制備技術的應用： 目前，嵌合體制備技術已廣泛應用于發(fā)育生物學、神經(jīng)生物學、 遺傳學、腫瘤學、毒理學等眾多研究領域，在當今生物醫(yī)學研 究中發(fā)揮著愈來愈重要的作用。,第一(d236。通過顯微注射法構(gòu)建嵌合體是一項復雜的技術，ESC本身的特性、受體胚胎的品系來源以及顯微注射的熟練程度等都會直接影響嵌合體的獲得。雖然有資料表明，粘附在早期胚胎滋養(yǎng)層外面的ESC，經(jīng)過過夜培養(yǎng)，能有效的與宿主ICM細胞整合，但是在共培養(yǎng)過程中，很難控制發(fā)生整合的ESC的數(shù)目，因此也限制了其使用。實驗過程中，由于消化劑、融合劑的使用，會對胚胎造成不同程度的損傷，所以融合法制備嵌合胚的成功率較低。)的制備方法主要有三種：融合法、顯微注射法和共培養(yǎng)法。)培養(yǎng)ESC,嵌合體動物(d242。 嵌合體的成功制備也是證明ESC具有發(fā)育全能性的一個金指標。ESC能廣泛(guǎngf224。bāo)群中分離培養(yǎng)ESC,第二十二頁，共四十五頁。,ESC特異性表面(biǎomi224。,從小鼠囊胚的內(nèi)細胞群中分離(fēnl237。 集落呈克隆狀生長，與飼養(yǎng)(s236。,第二十頁，共四十五頁。如：抑制骨髓白血病 m1細胞的增殖，誘導其向巨噬細胞方向分化；促進外周膽堿能神經(jīng)分化和功能成熟；刺激破骨細胞增殖；調(diào)節(jié)肝細胞急性期反應蛋白的合成；抑制多能胚胎干細胞的分化等。n)嘗試利用人胚胎成纖維細胞作飼養(yǎng)層進行人 ESC的培養(yǎng)，并已有成功的報道。 隨著對人ESC研究的深入，來源于人ESC的組織器官可望用于 臨床。)培養(yǎng)ESC,原代鼠胚成纖維細胞（primary mouse embryonic fibroblast， PMEF）以其易于取材、分化抑制效果好等特點而被廣泛應用。i)， 在體外培養(yǎng)過程中，必須有飼養(yǎng)層或其它分化抑制劑的支持， 適宜的飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系是ESC體外培養(yǎng)擴增的一個關鍵環(huán)節(jié)。,ESC的分離培養(yǎng)飼養(yǎng)層： ESC體外培養(yǎng)的條件非常嚴格，為了維持ESC的未分化狀態(tài)(zhu224。,從小鼠囊胚的內(nèi)細胞(x236。n)成小的細胞團塊，接種于新的鋪有飼養(yǎng)層細胞的四孔板中。,ESC的分離培養(yǎng)： 待小鼠囊胚貼壁，并從透明帶中孵出后，在顯微操作儀下分離內(nèi)細胞團，吸出內(nèi)細胞團，用胰酶消化，將其離散(l237。,小鼠早期胚胎(pēitāi)的體外培養(yǎng)：,從小鼠囊胚的內(nèi)細胞(x236。,從小鼠囊胚的內(nèi)細胞(x236。 飼養(yǎng)層細胞的處理方法如下： 取P1216的孕鼠，剖腹取胚胎，去除頭、四肢、內(nèi)臟后，Hanks液反復沖洗，剪碎鼠胚組織，胰酶消化成單細胞懸液，接種，即為原代培養(yǎng)鼠胚成纖維細胞。 飼養(yǎng)層細胞經(jīng)絲裂霉素C處理后，雖然失去分裂能力，但仍然保持生存(shēngc)培養(yǎng)ESC,子宮(zǐgōng),第十六頁，共四十五頁。選取發(fā)育良好的囊胚接種在飼養(yǎng)層細胞上。d233。iyǎng)建系 定向誘導分化 在生物醫(yī)學上的應用,第十五頁，共四十五頁。)了小鼠的ESC系 1998年Thomson和Gearhart分別用胚泡內(nèi)細胞團細胞和原始生殖細胞成功地建立了人的ESC系 在全球范圍內(nèi)掀起了ESC的研究熱潮。 1981年Evans等從囊胚的內(nèi)細胞群中成功分離、建立(ji224。)：克隆clone 轉(zhuǎn)基因技術transgenic technology 成體干細胞：神經(jīng)干細胞neural stem cells 肺干細胞pulmonary stem cells 誘導型多能干細胞induced pluripotent stem cell,主 要 內(nèi) 容,第十四頁，共四十五頁。,胚胎干細胞embryonic stem cells 干細胞相關技術(j236。ngy242。就是干細胞的這種潛在的價值引起了各國學者的研究興趣。 zhōnɡ)目的是應用干細胞治療疾病。)的緩慢性 干細胞增殖的自穩(wěn)性,第