反芻動(dòng)物源性枯草芽孢桿菌的分離與鑒定畢業(yè)論文-文庫吧資料
2025-07-12 15:39本頁面
【正文】 ]從人工飼養(yǎng)的健康三黃肉雞的盲腸和大腸中分離出的枯草芽孢桿菌。 圖 228 灌服 LB 肉湯的小鼠內(nèi)臟器官對照。通過 分離的菌株 K 進(jìn)行 16S rDNA 的PCR 擴(kuò)增 ，得到特異性條帶，測序結(jié)果和同源性分析表明，該菌鑒定結(jié)果為枯草芽圖 226 灌服菌液的小鼠剖檢后胸腔內(nèi)臟器心臟、肺無異常變化。 13 安全性試驗(yàn)結(jié)果 經(jīng) 14 d 的灌服觀察，小鼠生長狀況良好，無死亡現(xiàn)象將小鼠剖檢后內(nèi)臟組織器官無異常變化（如圖 226， 227， 228），說明枯草芽孢桿菌對小鼠無毒性。 12 注：在“圖 219，圖 220，圖 221，圖 222，圖 223，圖 224，圖 225”中， 1 乳酸環(huán)丙沙星， 2 鹽酸環(huán)丙沙星 ， 3 甲磺酸培氟沙星 ， 4 硫氰酸紅霉素， 5 乙酰甲喹， 6 甲硝唑， 7 氟苯尼考， 8 鹽酸多西環(huán)素， 9 鹽酸林可， 10 克林霉素， 11 延胡索酸泰妙菌素， 12 粘菌素， 13 頭孢他啶， 14 頭孢克肟， 15頭孢噻肟鈉， 16 頭孢曲松鈉， 17 硫酸阿米卡星， 18 硫酸鏈霉素， 19 單硫卡， 20 安普霉素， 21 慶大霉素， 23 硫酸 TMP， ○ 1 克拉霉素，○ 2 鏈霉素， ○ 3 潔霉素， ○ 4 氟苯尼考， ○ 5 青霉素， ○ 6 萬古霉素， ○ 7 新霉素， ○ 8 丁胺卡那霉素， ○ 9 復(fù)方新諾明， ○10桿菌肽， ○11強(qiáng)力霉素， ○12慶大霉素， ○13紅霉素， ○14多粘菌素 B， ○15阿奇霉素， ○16諾氟沙星， ○17麥迪霉素， ○18四環(huán)素， ○19先鋒霉素Ⅳ。 圖 224 ○1 ○1 ○1 ○14對菌 K 有抑制作用， ○10對菌 K 無抑制作用。 圖 222 1 1 2 2 ○ 1 、 ○ 2 對菌 K 均有抑制作用。 圖 220 80 對菌 K 有抑制作用， 10對菌 K 無抑制作用。 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 對菌 K 進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)，得到菌株對 多 種抗生素的藥敏結(jié)果，如圖 219，圖220，圖 221，圖 222，圖 223，圖 224，圖 225， 并判斷菌 K 的耐藥性，如表22。無拉絲現(xiàn)象， 2 1 2 1 3 2 1 10 M 1 2 注： M： DL Marker 20xx； 1：陽性對照； 2：菌 K 將 分離的菌株 K 的 PCR 產(chǎn)物送北京華大生物公司測序， 測序結(jié)果與其他從GenBank 下載的芽孢桿菌屬的相關(guān)序列進(jìn)行同源性比較。 1. 接種菌 K K 對照 圖 215 菌 K 使過氧化氫分解產(chǎn)生氣泡，觸媒試驗(yàn)陽性。 圖 217 接種菌 K 的尿素酶發(fā)酵管呈淺粉紅色，脲酶試驗(yàn) 陽性。 1. 接種菌 K K 對照 圖 212 接種菌 K 的培養(yǎng)液滴加碘液后為淡藍(lán)色，產(chǎn)類淀粉化合物測定試驗(yàn)陽性。 1. 接種菌 K K 對照 圖 213 接種菌 K 的西蒙氏培養(yǎng)基仍為草綠色，檸檬酸鹽試驗(yàn)為陰性。 圖 210 5min 后，革蘭氏碘液消失， 菌 K 淀粉水解試驗(yàn)為陽性。 1. 接種菌 K K 對照 圖 28 枯草芽孢桿菌 VP試驗(yàn)為陰性。 1. 接種菌 K K 對照 圖 26 木糖發(fā)酵試驗(yàn)為陽性。 圖 24 甘醇、葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖發(fā)酵試驗(yàn)陽性，蜜二糖發(fā)酵試驗(yàn)陰性 。 芽孢 6 甘醇 + 淀粉水解 + 脲酶試驗(yàn) + 麥芽糖 + 產(chǎn)類淀粉化合物測定 + TSI 試驗(yàn) A/A +； 蜜二糖 吲哚試驗(yàn) + 木糖 + 檸檬酸鹽試驗(yàn) 注：“ +”表示陽性，“”表示陰性； TSI（三糖 鐵培養(yǎng)基）上反應(yīng)情況： 斜面 /底面 ， A：產(chǎn)酸（黃色）； K：產(chǎn)堿（紅色）； +：陽性； ：陰性。 圖 22 革蘭氏染色 （ 1000）。 生化試驗(yàn)結(jié)果 菌 K 的生化試驗(yàn)結(jié)果見表 21。 2 結(jié)果 形態(tài)學(xué)觀察 觀察 MYP 培養(yǎng)基， 為干燥型菌落， 灰白 色，無光澤，表面粗糙。取菌液濃度約為 1011cfu/mL的 LB 肉湯，對空腹 8 h 的試驗(yàn)小鼠每天一次經(jīng)口灌胃 mL，同時(shí)設(shè)空白營養(yǎng)肉湯對照組。 藥敏試驗(yàn) 按照擴(kuò)散法在 MYP 培養(yǎng)基上進(jìn)行 藥敏試驗(yàn) ，見文獻(xiàn) [13] 。 PCR 產(chǎn)物送北京六合華大基因科技股份有限公司測序。 PCR 反應(yīng)體系： 總體系 25μL ， DNA 模板 2μL，上下游引物各加 1μL， 10 buffer ， ， Taq 酶 ， 。AAGGAGGTGATCCAGCC GCA339。AGAGTTTGAT CCTGGCTCAG339。 16S rDNA 的 PCR 擴(kuò)增和序列
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