免疫細(xì)胞的分離與檢測-文庫吧資料
2024-10-03 14:18本頁面
【正文】 細(xì)胞殺菌功能試驗(yàn) 細(xì)胞吞噬與殺傷功能試驗(yàn) 第四十九頁，共七十五頁。 間接溶血空斑試驗(yàn) 第四十七頁，共七十五頁。 直接溶血空斑試驗(yàn) 間接溶血空斑試驗(yàn) SPASRBC溶血空斑試驗(yàn) 三、抗體形成試驗(yàn) 第四十五頁，共七十五頁。 ? 待濾膜枯燥后用 γ液閃計(jì)數(shù)儀測定 cpm值。 ? 37℃ 5%CO2 培養(yǎng) 18小時(shí)〔 NK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞〕； ? 每孔加終濃度為 %癿胰酶和 %DNA酶 37℃ 處理30min〔消化細(xì)胞和處理掉死亡靶細(xì)胞釋放出來癿放射性DNA〕。 第四十三頁，共七十五頁。 ?〔 1〕試劑 ?小鼠脾細(xì)胞懸液 :別離單個(gè)脾臟細(xì)胞 裂解紅細(xì)胞淋巴細(xì)胞洗滌配置懸液〔 1640完全培養(yǎng)基2106/ml〕。用 3HTdR摻入法，靶細(xì)胞為 YAC1細(xì)胞株〔小鼠淋巴瘤細(xì)胞系〕。 ?NK細(xì)胞活性測定多采用 51Cr釋放法試驗(yàn)，其原理同細(xì)胞毒性 T細(xì)胞試驗(yàn)中所采用的 51Cr釋放法試驗(yàn)。 ?NK細(xì)胞是具有天然殺傷靶細(xì)胞活性的淋巴樣細(xì)胞，其殺傷作用丌需要抗體、補(bǔ)體的參加，所殺傷靶細(xì)胞通常指腫瘤細(xì)胞和病毒感染或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。 第四十頁，共七十五頁。 ? 自然釋放管：標(biāo)記的靶細(xì)胞 ，加完全培養(yǎng)基〔靶細(xì)胞丌裂解，但可自然釋放一定量的同位素〕。 ? 抗體對照管：標(biāo)記的靶細(xì)胞和亞凝集單位的抗體各 ，加完全培養(yǎng)基 〔未加效應(yīng)細(xì)胞〕。 ? 試驗(yàn)管：效應(yīng)細(xì)胞 (淋巴細(xì)胞懸液 ) ，標(biāo)記的靶細(xì)胞 (Cr51標(biāo)記的雞紅細(xì)胞 )和亞凝集單位的抗體 (兔抗雞紅細(xì)胞抗體 )各，加 RPMI 1640完全培養(yǎng)基 〔 ADCC〕。用計(jì)數(shù)儀分別檢測上清和細(xì)胞沉淀中的 cpm，根據(jù)上清中釋放的 51Cr的多少，可判斷 K細(xì)胞活性的上下。 第三十八頁，共七十五頁。 ?K細(xì)胞活性檢測的方法有同位素釋放試驗(yàn)法，溶血空斑法，細(xì)胞剝離法和靶細(xì)胞接合試驗(yàn)。 ?動(dòng)物機(jī)體有些免疫細(xì)胞，通過抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用〔 ADCC〕殺傷靶細(xì)胞，如 NK細(xì)胞、活化的 T細(xì)胞、吞噬細(xì)胞等，這類細(xì)胞統(tǒng)稱為 K細(xì)胞。 T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn) ADCC作用測定 NK活性測定 二、細(xì)胞毒檢測試驗(yàn) 第三節(jié) 免疫細(xì)胞功能測定 第三十六頁，共七十五頁。 第三十四頁，共七十五頁。由于 MLC中淋巴細(xì)胞接叐同種異型抗原癿刺激而収生活化、增殖，產(chǎn)生種類眾多癿細(xì)胞因子，促進(jìn) NK、LAK和 CTL等殺傷細(xì)胞癿分化，因此又是免疫調(diào)節(jié)研究中常用癿實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀? 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)：刺激物分為非特異性〔如植物血凝素、刀豆素 A等〕和特異性刺激因子〔如抗原〕；檢測方法為形態(tài)學(xué)檢測法和 3HTdR摻入法及 MTT法等。 第三十一頁，共七十五頁。 EA花環(huán)： B淋巴細(xì)胞外表有 Fc受體，能與免疫球蛋白的 Fc段結(jié)合，因此用抗體致敏的紅細(xì)胞與 B淋巴細(xì)胞混合，可見 B淋巴細(xì)胞周圍粘附有紅細(xì)胞 第三十頁，共七十五頁。 E花環(huán) ： 利用 T細(xì)胞膜上的異種動(dòng)物紅細(xì)胞受體 T細(xì)胞 B細(xì)胞 花環(huán)形成細(xì)胞 綿羊紅細(xì)胞 第二十八頁，共七十五頁。 SmIg的酶免疫檢測法 第二十六頁，共七十五頁。 二、免疫細(xì)胞膜分子的主要檢測方法 免疫標(biāo)記檢測方法 熒光抗體法 酶免疫檢測法 免疫金銀染色法 補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒試驗(yàn)〔 CDC〕 花環(huán)形成試驗(yàn) 第二十四頁，共七十五頁。 第二節(jié) 免疫細(xì)胞膜分子的檢測 一、免疫細(xì)胞膜分子檢測的原理不類型 二、免疫細(xì)胞膜分子的檢測方法 第二十二頁，共七十五頁。 第二十頁，共七十五頁。 細(xì)胞復(fù)蘇的原理與方法：細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)速度要快，使之迅速通過細(xì)胞最易受損的－ 5～ 0℃ ，細(xì)胞仍能生長，活力受損不大。在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞。 三、細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇 細(xì)胞凍存的原理與方
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