基因工程選修三dna重組技術(shù)的基本工具-文庫吧資料
2025-01-11 17:57本頁面
【正文】 A ② 用含目的基因的 DNA片段用 放射性同位素 等作標(biāo)記，以此做 探針 ③ 使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交 ,若顯示出雜交帶 ，表明染色體已插入染色體 DNA中 （ 1） 方法 : DNA分子雜交 （ 2）過程 : 檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了 mRNA 檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) （ 1）方法 : 分子雜交 方法 : 抗原 抗體雜交 （ 2）過程 : 用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的 mRNA雜交，若出現(xiàn) 雜交帶 ,表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了 mRNA （二）鑒定（個(gè)體生物學(xué)水平） 抗蟲、抗病接種實(shí)驗(yàn)，活性比較等 人體細(xì)胞 質(zhì)粒 大腸桿菌 目的基因 (人胰島素基因 ) 用同一種限制酶 進(jìn)行酶切 DNA連接酶連接目的基因和質(zhì)粒 重組質(zhì)粒 (重組 DNA) 重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞 繁殖 人胰島素 復(fù)制目的基因 1. 獲取目的基因 ?從基因文庫中獲取目的基因 ?利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 ?化學(xué)方法人工合成目的基因 2. 構(gòu)建基因表達(dá)載體 ?目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因 3. 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 ?植物、動物、微生物 4. 目的基因的檢測與鑒定 ?檢測：分子水平是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯 ?鑒定：個(gè)體水平 小節(jié) : 基因工程的基本操作程序 1. 基因工程的基本工具？ 2. 限制酶的特點(diǎn)？ 3. DNA連接酶和載體的種類？ 4. 基因工程的基本操作程序？ 5. 獲取目的基因的方法？ 6. 基因工程的核心步驟是？ 7. 基因表達(dá)載體的組成？ 8. 將抗蟲基因轉(zhuǎn)移到棉花細(xì)胞中遺傳和表達(dá)稱為？ 9. 將目的基因?qū)胫参?、動物、微生物?xì)胞的方法？ ？ ？ ？ 復(fù)習(xí) 一、植物基因工程碩果累累 轉(zhuǎn)基因工程技術(shù)主要用于 提高農(nóng)作物的抗逆能力 ,以及 改良農(nóng)作物的品質(zhì) 和 利用植物生產(chǎn)藥物 等方面。 受體細(xì)胞 穩(wěn)定 表達(dá) 三、將目的基因?qū)胧荏w紳胞 將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法： （ 1） 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 ①農(nóng)桿菌特點(diǎn)： 易感染 雙子葉植物和裸子植物 ，對大多數(shù)單子葉植物沒有感染能力。 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 體外 特定 DNA片段 ： 體外模擬雙鏈 DNA復(fù)制 （二）利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 四種脫氧核苷酸 (dNTP) 一對引物： 熱穩(wěn)定 DNA聚合酶 (Taq酶） 模板 DNA( 含有目的基因 ) ： 與目的基因的起始段互補(bǔ)核苷酸序列 一段已知目的基因的核苷酸序列 ： 變性 （ 90℃ 95℃ ）：目的基因 DNA受熱變性后解鏈為單鏈； 復(fù)性 （ 55℃ 65℃ ）：引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合； 延伸 （ 70℃ 75℃ ）：在Taq酶的作用下，合成與模板互補(bǔ)的 DNA鏈； 約 2n PCR技術(shù)擴(kuò)增與 DNA復(fù)制的比較 PCR技術(shù) DNA復(fù)制 相同點(diǎn) 原料 條件 不同點(diǎn) 解旋方式 場所 酶 結(jié)果 四種脫氧核苷酸 模板、能量、酶 高溫下變性解旋 解旋酶催化 體外復(fù)制 主要細(xì)胞核內(nèi) 熱穩(wěn)定的 DNA聚合酶 細(xì)胞內(nèi)的 DNA聚合酶 大量的 DNA片段 形成整個(gè) DNA分子 蛋白質(zhì)的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列 目的基因 推測 推測 化學(xué)合成 例：根據(jù)已知的氨基酸序列合成 DNA法 ： （三）化學(xué)方法人工合成的目的基因 適用：基因比較小，核苷酸序列已知 ： 使目的基因 在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在 ，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因 能夠表達(dá)和發(fā)揮作用 。 基因工程基本操作的四個(gè)步驟 1 2
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1