基因工程原理第七章-文庫吧資料
2024-09-24 20:48本頁面
【正文】 法 ? 體細(xì)胞 卵細(xì)胞核替換 ? 顯微注射受精卵 ? 反病毒侵染胚胎干細(xì)胞或早期胚 轉(zhuǎn)基因小鼠 ? 大多數(shù)動物細(xì)胞在發(fā)育能力上受到限制，不能產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動物：分化的細(xì)胞無法完全去分化和重復(fù)發(fā)育 ? 動物中實現(xiàn)生殖細(xì)胞系轉(zhuǎn)化的唯一途徑就是在形成生殖細(xì)胞系的發(fā)育階段之前把 DNA導(dǎo)入全能細(xì)胞 ? 胚胎干細(xì)胞 (Es Cells)是這樣一個動物體特殊的全能細(xì)胞 轉(zhuǎn)基因小鼠中的 DNA轉(zhuǎn)移方法 ? 直接顯微注射：注入剛受精卵細(xì)胞的雄或雌性原核中 ? 重組反轉(zhuǎn)錄病毒：不適宜產(chǎn)生完全的轉(zhuǎn)基因動物，可用于形成胚轉(zhuǎn)基因部分 ? Es細(xì)胞轉(zhuǎn)染：可利用標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)記進(jìn)行篩選 胚胎干細(xì)胞 (Es Cells) ? 取自生殖細(xì)胞發(fā)育前的早期胚 ? 具有發(fā)育成動物的所有組織的能力 ? 受同源重組影響顯著，可以用于基因?qū)ぐ校纯捎猛庠?DNA的同源片段精確地替換內(nèi)源基因組的片段。因為它們失去的功能需要通過共轉(zhuǎn)入攜帶有載體所缺失基因的輔助病毒來提供。 擴(kuò)增選擇標(biāo)記 ? 當(dāng)動物細(xì)胞暴露在某種藥物的有毒濃度中，少數(shù)個別細(xì)胞由于自發(fā)的、擴(kuò)增性的抗藥突變而存活，這樣的DNA上的擴(kuò)增性標(biāo)記，稱為擴(kuò)增選擇標(biāo)記 ? 出現(xiàn)擴(kuò)增選擇性標(biāo)記的細(xì)胞栽種群中是隨機(jī)出現(xiàn)的，可進(jìn)行高濃度抗藥性的篩選 ? 側(cè)翼 DNA序列可隨標(biāo)記基因一起擴(kuò)增 氨基蝶呤 DHFR 葉酸 擴(kuò)增選擇標(biāo)記 ? 擴(kuò)增選擇標(biāo)記也常可用于內(nèi)源或顯性選擇標(biāo)記，但常常用于擴(kuò)增選擇的藥物不同 擴(kuò)增選擇標(biāo)記常用于外源基因的高效表達(dá) 復(fù)制子載體：帶有病毒復(fù)制子的載體 ? 病毒基因組具有在宿主細(xì)胞內(nèi)獨立
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