植物基因工程ppt課件-文庫吧資料
2024-09-24 18:50本頁面
【正文】 延伸到左邊界第 22堿基處，置換出原來的下鏈，形成 ssDNA，即 T鏈。TDNA 首先在細(xì)菌中被加工、剪切、復(fù)制，然后轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞，并非整個(gè) Ti質(zhì)粒都進(jìn)入植物細(xì)胞。因此，磷酸化把 virG蛋白從非活性狀態(tài)轉(zhuǎn)變成活性狀態(tài)。 章魚堿型（ ocs） Ti 質(zhì)粒具有 8個(gè) Vir 操縱子：VirA， VirB， irC， VirD， VirE， VirF， VirG， Vir H 胭脂堿型（ Nop）有 7個(gè) Vir 操縱子： VirA， VirB， VirC， VirD， VirE， VirG， Tzs 農(nóng)桿菌 Ti質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)化機(jī)理 VirA和 VirG被結(jié)構(gòu)性表達(dá) （ 1） VirA 基因產(chǎn)物 VirA蛋白，是細(xì)菌細(xì)胞膜上的疏水蛋白，是植物酚類物質(zhì)如乙酰丁香酮的受體。 （ 2） Vir基因產(chǎn)物加工 TDNA形成單股 DNA片段， （ 3） T－股（ T Strand）被轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞，整合到寄主基因組中， （ 4） T－ DNA基因被表達(dá)，使植物細(xì)胞增殖并產(chǎn)生冠瘤堿。 胭脂堿型有 7個(gè)操縱子。 Vir 區(qū)的基因結(jié)構(gòu)與功能 Vir的位置： 位于 Ti質(zhì)粒上 TDNA的左側(cè)，兩者之間的距離常隨 Ti質(zhì)粒類型不同而有差異，章魚堿型的距離較大，而胭脂堿型的間隔距離很小。 結(jié)論： TDNA的基因序列只能被真核生物識(shí)別，不能被原核生物識(shí)別?？赏ㄟ^植物 RNA聚合酶 II被轉(zhuǎn)錄，并具有 5` 帽子結(jié)構(gòu)和 3`polyA尾巴。 （ 2）冠癭堿合成酶及其分解基因：使植物細(xì)胞合成某種冠癭氨基酸的基因。 TDNA通常較完整的且序列不改變地被整合到植物基因組中。 章魚堿型的 TDNA區(qū)分為兩部分，左區(qū)（ TLDNA）為 13kb的單拷貝序列，是誘發(fā)和維持腫瘤所必需的。關(guān)于 Ti 質(zhì)粒上的部分基因及其功能見表 5 2 。冠癭堿能激活 t r a 基因，誘導(dǎo) Ti 質(zhì)粒轉(zhuǎn)移，因此稱之為接合轉(zhuǎn)移編碼區(qū)。 T D N A 區(qū)與 V i r 區(qū)在質(zhì)粒 DNA 上彼此相鄰，合起來約占 Ti 質(zhì)粒 D N A 的三分之一。該 DNA 片段上的基因與腫瘤的形成有關(guān)。 （ 4） Ori區(qū)（ origin of replication）： 該區(qū)段基因調(diào)控 Ti質(zhì)粒的自我復(fù)制起始。 Ti質(zhì)粒 （ 3） Con區(qū)（ regions encoding conjugations）： 該區(qū)段上存在著與細(xì)菌間接合轉(zhuǎn)移相關(guān)基因（ tra），調(diào)控 Ti質(zhì)粒在農(nóng)桿菌之間的轉(zhuǎn)移。 （ 2） Vir區(qū)（ virulence region）： 該區(qū)段上的基因能激活 TDNA轉(zhuǎn)移，使農(nóng)桿菌表現(xiàn)出毒性，故稱之為毒性區(qū)。 Fi gu r e 5 5 M ap of t h e T i p l as m i d s h ow i n g t h e l oc at i on ofs om e ge n e s i m p or t an t f or c r o w n gal l i n d u c t i on 圖 5 6 章魚堿型 p T i A c h 5 和胭脂堿型 p T i C 58 T i 質(zhì)粒的基因圖 （引自 J oh n 等 1998 ） ：主要功能區(qū) ：同源區(qū) Ti質(zhì)粒 Ti質(zhì)粒的基因位點(diǎn)及其功能區(qū)域 （ 1） T－ DNA區(qū)（ transferredDNA regions）： TDNA是農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞時(shí)，從 Ti質(zhì)粒上切割下來轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞的一段 DNA，故稱之為轉(zhuǎn)移 DNA。在轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞二倍體基因組中含有一個(gè)或幾個(gè)（至多） T－DNA拷貝。 Ti質(zhì)粒 ? Ti質(zhì)粒的 基因圖譜 不同的 Ti質(zhì)粒有二個(gè)同源區(qū)： ① Vir區(qū)（轉(zhuǎn)化所必須） 是毒性區(qū)，也叫毒性基因或 Vir基因或致病基因。由于在轉(zhuǎn)座子嵌入處的編碼基因發(fā)生失活，因而可通過分析 Ti質(zhì)粒限制性內(nèi)切酶片段的變化，如某些片段消失或電泳遷移率改變，確定這些基因插入位置，并且與突變體的表型相對(duì)應(yīng)，從而建立 Ti質(zhì)粒的基因圖。 ? 基因圖譜構(gòu)建：轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽法 利用細(xì)菌的轉(zhuǎn)座子（ transposon），使 Ti質(zhì)粒發(fā)生嵌入突變和缺失突變。 粒的限制性內(nèi)切酶的酶切圖。 ? Ti物理圖譜構(gòu)建：經(jīng)限制性內(nèi)切酶處理之后的 Ti質(zhì)粒 DNA，用瓊脂糖凝膠電泳作片段分離，便可顯示出有 20多條大小不同的 DNA酶切片段。迄今已從多種植物中分離出不同種類的根癌農(nóng)桿菌。最近有人發(fā)現(xiàn)農(nóng)桿菌中還有其它的質(zhì)粒，稱之為隱秘質(zhì)粒。冠癭堿是根癌農(nóng)桿菌生活的 C、 N和能量來源。 （ 2）根癌農(nóng)桿菌侵染植物后產(chǎn)生兩種物質(zhì)：類植物激素和冠癭堿。把瘤組織培養(yǎng)在不加生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素
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