園林植物快繁技術(shù)-文庫(kù)吧資料
2025-07-19 22:07本頁(yè)面
【正文】 、 單離細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)方法三、 培養(yǎng)細(xì)胞的密度及生活率的測(cè)定第五章 原生質(zhì)培養(yǎng)與融合第一節(jié) 原生質(zhì)體分離一、 用以游離原生質(zhì)的材料來(lái)源二、 酶混合液三、 游離原生質(zhì)體的一般技術(shù)程序四、 花粉原生質(zhì)體的分離第二節(jié) 原生質(zhì)體培養(yǎng)一、 培養(yǎng)莖二、 培養(yǎng)方法三、 原生質(zhì)體的培養(yǎng)結(jié)果及其觀察第二節(jié) 原生質(zhì)體融合：原生質(zhì)體融合：也稱體細(xì)胞雜交，就是使分離下來(lái)的不同親本的原生質(zhì)體之間在人工控制的條件下，象形細(xì)胞受精作用那樣及相融合為一體。而是純碎的單細(xì)胞。一、 建立無(wú)菌材料二、 莖尖的發(fā)育方向及調(diào)節(jié) 三、 生根成苗及移栽促進(jìn)生根的措施：①降低基本培養(yǎng)培養(yǎng)基無(wú)機(jī)莖濃度 ②調(diào)節(jié)生長(zhǎng)素濃度 ③添加吸附劑 ④減少瓊脂用量第三節(jié) 固相化細(xì)胞培養(yǎng)固相化細(xì)胞：把細(xì)胞固定在一種惰性基質(zhì)，如瓊脂、藻酸鹽、纖維或膜上面或里面、細(xì)胞不能運(yùn)動(dòng)，而營(yíng)養(yǎng)液可以在細(xì)胞間流動(dòng)，供應(yīng)其營(yíng)養(yǎng)。二、 胚乳培養(yǎng)材料的選擇：細(xì)胞型期三、 胚乳愈傷組織的誘導(dǎo)四、 器官分化再生植株五、 胚乳再生植株的染色體胚性第三章 器官和組織培養(yǎng)器官培養(yǎng)：是植株物某一器官的全部或部分或器官原基的培養(yǎng)組織培養(yǎng)：廣義：各種類型外植株的培養(yǎng)。3. 再生的植株多為三倍體，有可能產(chǎn)生無(wú)籽果實(shí)。4. 快速繁殖良種胚末5. 誘導(dǎo)胚性愈傷組織離體胚培養(yǎng)的發(fā)育途徑：按正常胚胎發(fā)育途徑形成植株合子 球形胚 心形胚 魚雷形胚 子葉形胚 再生植株胚胎脫分化形成愈傷組織胚“早期萌發(fā)”成熟胚的培養(yǎng)：材料的消毒與接種，培養(yǎng)莖，種胚培養(yǎng)的外界條件原胚培養(yǎng)：基本培養(yǎng)莖：MS改良White培養(yǎng)莖；培養(yǎng)莖的滲透應(yīng)用蔗糖調(diào)整，用量在8—10％生長(zhǎng)調(diào)節(jié)：及其它附加物的影響生長(zhǎng)調(diào)節(jié)：種類、濃度、比例附加物：天然提取物第二節(jié) 胚乳培養(yǎng)一、 胚乳培養(yǎng)的用途1. 誘導(dǎo)分化植株，證明細(xì)胞全能性的理論。具有多胚發(fā)育受阻，其珠心胚可以侵入胚囊，使合子胚發(fā)育受阻影響雜交育種工作。對(duì)于有休眠期的種子，可通過(guò)胚培養(yǎng)。2℃恒溫條件下培養(yǎng)（三）濕度瓶?jī)?nèi)一般可達(dá)到100％，避免環(huán)境濕度過(guò)小，防改瓶?jī)?nèi)失水（四）汽體避免培養(yǎng)室內(nèi)存在有氨氣體第二章 胚胎培養(yǎng)和離體受精 通過(guò)學(xué)習(xí)，了解胚珠和子房培養(yǎng)，離體受精的胚胎培養(yǎng)技術(shù)，理解和掌握胚培養(yǎng)，胚乳培養(yǎng)的胚胎培養(yǎng)技術(shù)。4. 操作時(shí)，試管口應(yīng)略略向下，避免塵埃殺菌落入管內(nèi)，又便于操作。操作期間，也應(yīng)在檫拭數(shù)次。 基本培養(yǎng)莖 大量元素+微量元素+維生素+氨基酸+糖+水完全培養(yǎng)莖基本培養(yǎng)莖+植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑（有機(jī)附加物）2. 固體培養(yǎng)莖和液體培養(yǎng)莖的比較固體培養(yǎng)莖設(shè)備簡(jiǎn)單 使用方便 充分利用培養(yǎng)容器中的養(yǎng)分易選成自我毒害液體培養(yǎng)莖需要一定的設(shè)備 有利于外植株的生長(zhǎng)避免上述固體培養(yǎng)莖的缺點(diǎn)3. 常見培養(yǎng)莖配方 （參見教材附錄2）二、 配制培養(yǎng)莖的準(zhǔn)備工作 （一）、器皿和用具的準(zhǔn)備 主要器具：燒杯、容量瓶、移液管、滴管、試管器具的準(zhǔn)備： 清潔 烘干（二）、水和藥品 水原則上用純水，一般用蒸餾水即可 化學(xué)藥品用分析，純或化學(xué)純（三）、貯備液的配制 大量元素 擴(kuò)大10—50倍 微量元素 擴(kuò)大100倍 鐵鹽 擴(kuò)大100倍（+Na2—EDTA）植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑 分別稱量 溶解 混合 儲(chǔ)存三、配制培養(yǎng)莖的方法 少量蒸餾水溶解蔗糖倒入1000ml容量瓶 吸取各種貯備液放入容量瓶 定容 轉(zhuǎn)移到大燒杯與瓊脂加熱溶解 PH調(diào)整 分袋 滅菌 保存?zhèn)溆玫诙?jié) 無(wú)菌技術(shù)（一）、無(wú)菌室 無(wú)菌室的組成：包括無(wú)菌操作室和無(wú)菌培養(yǎng)室 無(wú)菌室的要求：墻壁光滑 地面平坦 門窗密閉 無(wú)菌室的滅菌：2％新潔爾滅擦洗 75％乙醇噴霧 紫外燈照射： 定期使用甲醛和高錳酸鉀熏蒸（二）、試材和器具的滅菌采用高溫高壓滅菌鍋㎡（120℃）保質(zhì)15—20min注意排盡冷空氣滅菌完畢 冷卻 備用高溫下易分解和變質(zhì)的藥品過(guò)濾除菌：—抽濾除菌：用真空泵產(chǎn)生抽力，使溶液通過(guò)過(guò)濾網(wǎng)（具）滅菌常用干熱滅菌法工作條件為160℃/hr注意用牛皮紙等包扎好器皿（具）（1）75％乙醇 潤(rùn)浸和殺菌作用 30s（2）氯化汞 ％ 5—10min，無(wú)菌水沖洗3—5次（3）次氯酸鈉 濃度2—10％ 15—30min ，無(wú)菌水沖洗3—5次（三）無(wú)菌操作1. 無(wú)菌操作前10min先使超凈工作臺(tái)處于工作狀態(tài)。 （二）、培養(yǎng)材料的處理 母株的預(yù)處理 促使母株的生長(zhǎng)帶謝活躍 方便取材 容易滅菌 降低污染率 外植體休眠期的處理 通常采用低溫或者赤霉藥劑進(jìn)行處理 ， 外植體的滅菌 進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌 林料來(lái)源 取材部位 取材季節(jié) 第
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