制備hplc技術(shù)ppt課件-文庫(kù)吧資料
2025-05-12 12:04本頁(yè)面
【正文】 溶 劑 的 種 類(lèi) 影 響k 主 要 受 洗 脫 能 力 的 影 響k = K *V sV mK =C sC m 制備 HPLC技術(shù)問(wèn)題 — 條件的選擇 R =4n1 / 2*αα 1*1 + k2k2柱 效 項(xiàng)柱 選 擇 項(xiàng)柱 容 量 項(xiàng)α 主 要 受 溶 劑 的 種 類(lèi) 影 響k 主 要 受 洗 脫 能 力 的 影 響k = K *V sV mK =C sC mα =K2K1=k2k1 制備 HPLC技術(shù)問(wèn)題 — 條件的選擇 線(xiàn)形放大 非線(xiàn)形放大 指柱直徑、長(zhǎng)度（即柱體積）和流速等可以根據(jù)加樣量的增加情況進(jìn)行按比例線(xiàn)形放大。 2. 在分析柱上進(jìn)行 超量載樣 。 因?yàn)檫x擇性和超量載樣潛力是相互依靠的，選擇性的提高會(huì)提高一次運(yùn)行中所分離的樣品量。 制備 HPLC技術(shù)問(wèn)題 — 條件的選擇 濃縮法超量載樣和體積法超量載樣都會(huì)導(dǎo)致組份溶解性的降低。 然而，分析和制備是不同的概念，如果用分析的條件（上樣量，流動(dòng)相消耗量）等條件簡(jiǎn)單的放大，成本會(huì)很高。二是分離度方面有意想不到的收獲。此方法對(duì)不溶性樣品或不能用溶劑溶解的樣品很有效，同時(shí)分離效果也會(huì)提高 用正相色譜比用反相色譜更適合這個(gè)樣品。因?yàn)榱鲃?dòng)相很快，能很快稀釋樣品溶液 另外 制備 HPLC中常見(jiàn)而又不太好解決的問(wèn)題 回答 制備 HPLC技術(shù)問(wèn)題 — 應(yīng)用舉例 可以采用預(yù)裝柱形式：先將樣品和少量填料（粉）混合，攪拌均勻，然后將此部分硅膠裝到一小柱內(nèi)。 制備 HPLC技術(shù)問(wèn)題 — 超量載樣 分析 HPLC進(jìn)樣量遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于柱子的載樣極限 , 樣品在柱子里的分配幾乎是理想的 , 而制備通常都會(huì)對(duì)上樣到一定的過(guò)載 , 主要組分的量在柱子里分配已經(jīng)和分析情況很不相同 , 通常在增加到一定進(jìn)樣量后 , 分離效果都會(huì)不同程度的變差 ！ 制備 HPLC的首要問(wèn)題是快速、高效的制備色譜純的產(chǎn)品！！ 分離度在制備 HPLC中并不是首先要關(guān)注的問(wèn)題，色譜峰會(huì)比較難看！ 制備 HPLC技術(shù)問(wèn)題 — 樣品的純化 在利用制備 HPLC最終純化步驟前做一些初步純化是提高效率降低成本的優(yōu)化措施 . 比如最終純化通常有一定的分離難度 ,又希望有足夠的收率 ,所以使用的儀器和填料可能是昂貴的 .未經(jīng)預(yù)純化的樣品 ,尤其是天然產(chǎn)物 ,含有大量的可能在填料表面不可逆吸附的組分 ,直接進(jìn)樣 ,可導(dǎo)致昂貴的填料很快失效 . 此外 ,大量的雜質(zhì)降低對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物分離度 ,因此限制了進(jìn)樣量和生產(chǎn)效率 . 同時(shí)分別用正反相色譜去除前后雜 ,比單用一種色譜得到目標(biāo)產(chǎn)物更簡(jiǎn)單易行 . 總之 ,制備色譜尤其是工業(yè)色譜的目標(biāo)不僅是找到技術(shù)上可行的方法 ,而且要綜合考慮成本 . 制備 HPLC技術(shù)問(wèn)題 — 應(yīng)用舉例 樣品如果溶解度太低如何上制備？ 在制備系統(tǒng)溶劑中，樣品如果溶解度太低，估計(jì) ，該如何處理？（ 70％甲醇水） 不可能為了 50mg 而上 1000ml溶液吧？ 如果用純甲醇做溶劑，會(huì)導(dǎo)致樣品析出，如果用純甲醇做流動(dòng)相，那柱子根本無(wú)保留！ 問(wèn)題 樣品可能某種晶型難溶，這樣可以加入其他溶劑（如丙酮等）以助溶 如果不是蛋白質(zhì)等大分子，試一下 DMSO或 DMF 加入少量二氯甲烷，也有助于改善樣品的溶解性 對(duì)溶解不好的小極性分子更常用的是 THF/H2O 流動(dòng)相是甲醇：水＝７０：３０。 盡管如此，為每次可分離得到更多的樣品，還是應(yīng)在小體積的流動(dòng)相中溶解較多的樣品。 VS 容量因子降低，峰形從高斯曲線(xiàn)變?yōu)槿切?
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