章dna的復(fù)制和修復(fù)(1)-文庫吧資料
2025-05-09 08:30本頁面
【正文】 旦開始就一直到完 ?DNA復(fù)制的起始與 DNA的甲基化和細(xì)菌脂膜的相互作用有關(guān) ?oriC 位點的回文序列 GATC（ 11個）的甲基化 ?新合成鏈的甲基化滯后 13 min A replisome consists of: DNA gyrase, the priming plex (primosome, helicase,primase,primer), SSB, and DNA polymerase III holoenzyme 聚合酶 III核心酶 聚合酶 I 聚合酶 III核心酶 滯后鏈 前導(dǎo)鏈 解螺旋酶 引物合成酶(DnaG) RNA引物 引發(fā)體 拓?fù)洚悩?gòu)酶 II ?夾子 ?聚體 ?夾子 ? 復(fù)合物 RNA引物 單鏈結(jié)合蛋白（ SSB） 終止 oriC 復(fù)制叉 2 復(fù)制叉 1 終止復(fù)制叉 2 終止復(fù)制叉 1 復(fù)制叉 1 復(fù)制叉 2 完成復(fù)制 DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶 IV 連鎖染色體 修復(fù)復(fù)制 22 bp Tus Tus—— terminus utilization substance 七、真核生物 DNA的復(fù)制 ?起點復(fù)制：稱作自體復(fù)制順序（ autonomously replicating sequence,ARS）或復(fù)制基因（ replicator）。這兩種解螺旋酶的配合作用推動著 DNA雙鏈的解開。 ?如雙鏈 DNA中有單鏈末端或缺口，解螺旋酶即可結(jié)合于單鏈部分，然后向雙鏈方向移動。 真核生物拓?fù)錁?gòu)酶 拓?fù)錁?gòu)酶 I：消除正、負(fù)超螺旋 類型 I 拓?fù)錁?gòu)酶 III：消除負(fù)超螺旋 拓?fù)錁?gòu)酶 IIa：消除正、負(fù)超螺旋，不能引 類型 II 拓?fù)錁?gòu)酶 II?：消除正、負(fù)超螺旋 入負(fù)超螺旋 入負(fù)超螺旋 大腸桿菌旋轉(zhuǎn)酶（ gyrase) 又稱為拓?fù)錁?gòu)酶 II，反應(yīng)需 ATP提供能量， 可連續(xù)引入負(fù)超螺旋，可消除復(fù)制叉前進(jìn)時 產(chǎn)生的扭曲張力。 ?酶從 DNA上脫落，兩條鏈復(fù)原，得到的 DNA比原來少一個負(fù)性超螺旋。 ?使一條鏈切開，但酶與切口的兩端結(jié)合阻止了螺旋的旋轉(zhuǎn) 。 類型 Ⅱ 的酶 —— 拓?fù)洚悩?gòu)酶 Ⅱ （旋轉(zhuǎn)酶），能使 DNA的兩條鏈同時發(fā)生斷裂和再連接，當(dāng)它引入超螺旋時需要由 ATP供給能量，可引入負(fù)超螺旋， 它們協(xié)同作用控制著 DNA的負(fù)超螺旋水平。 DNA拓?fù)涿复呋?DNA分子不同超螺旋狀態(tài)之間的轉(zhuǎn)變。 拓?fù)洚悩?gòu)酶（ topoisomerase)： DNA在復(fù)制過程中雙鏈需要解開。兩條互相纏繞的雙螺旋核酸分子表現(xiàn)出許多拓?fù)鋵W(xué)的關(guān)系。因此先合成一條低忠實性的多核苷酸來開始 DNA的合成，并以核糖核苷酸來表示是“暫時”的，當(dāng) DNA聚合以后再將其切除，以高忠實性的脫氧核苷酸取而代之，確保復(fù)制的忠實性。 為什么？ 這是保證 DNA聚合過程高度精確的又一措施。 3180。 復(fù)制的 起始 DNA鏈的 延長 DNA鏈 終止 5180。 前導(dǎo)鏈 滯后鏈 3180。 3180。最初出現(xiàn)的 DNA片段長度約為 1000個核苷酸左右，稱為岡崎片段（ Okzaki fragment）。 339。 539。 539。 339。這在 DNA復(fù)制、修復(fù)和重組中起著重要的作用。 ?這兩條鏈必須是與同一條互補鏈配對結(jié)合的(T4DNA連接酶除外 )，而且必須是兩條緊鄰 DNA鏈才能被 DNA連接酶催化成磷酸二酯鍵。PO4與另一 DNA鏈的 539。核酸外切酶作用 合成速度（核苷酸 /分） 持續(xù)合成能力 DNA 聚合酶 Ⅰ 103,000 400 + + + 1,0001,200 3200 88,000 100 + + 2,400 1,500 830,000 1020 + + 15,00060,000 ≥500,000 比較項目 DNA 聚合酶 III 切除引物 修復(fù) 修復(fù) 復(fù)制 功能 聚合酶 IV 和 V: 1999年發(fā)現(xiàn) ,它們涉及 DNA的錯誤傾向修復(fù) (error prone repair） ?DNA連接酶是 1967年在三個實驗室同時發(fā)現(xiàn)的。核酸外切酶作用 5180。聚合酶作用 3180。 外切酶活性 大腸桿菌三種 DNA聚合酶比較 DNA 聚合酶 Ⅱ 分子量 每個細(xì)胞的分子統(tǒng)計數(shù) 5180。 B． 339。 －ＯＨ的引物鏈存在，通過核苷酸聚合反應(yīng)使 DNA鏈沿 5’→3 ’方向延長?，F(xiàn)在認(rèn)為它是大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)真正負(fù)責(zé)從新合成 DNA的復(fù)制酶。 該酶不是復(fù)制的主要聚合酶，因為此酶缺陷的大腸桿菌突變株的 DNA復(fù)制都正常?！?39?！?39。該酶的最適模板是雙鏈 DNA而中間有空隙 (gap)的單鏈DNA部份，而且該單鏈空隙部份不長于 100個核苷酸?！?39。此酶為多亞基，MW 88KD，每個細(xì)胞內(nèi)約有 100個酶分子。 DNA聚合酶 Ⅱ （ DNA polII) ?DNA聚合酶 Ⅰ 缺陷的突變株仍能生存，這表明 DNA polⅠ 不是 DNA復(fù)制的主要聚合酶。 ?焦磷酸交換作用 : 催化 dNTP末端的 PPi同無機(jī)焦磷酸的交換反應(yīng)。 外切酶活性 ── 切除修復(fù)作用 : ?焦磷酸解作用 : DNApolⅠ 的這種活性可以催化 339。 ?539。對岡崎片段 539。每次能切除 10個核苷酸。→339。脫氧核苷酸。→339?！?39。 方向識別和切除不配對的 DNA生長鏈末端的核苷酸（對單鏈作用）。 外切酶活性 ── 校對作用 : 這種酶活性的主要功能是從 339。 ? 339。在引物 DNA或 RNAOH末端，以 dNTP為底物，按模板 DNA上的指令由 DNApolⅠ 逐個將核苷酸加上去，就是 DNA polⅠ 的聚合作用?！?39?！?39。→339。 外切酶活性。 外切酶活性，小片段有 539
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