細胞信號轉(zhuǎn)導的技術(shù)方法-文庫吧資料
2025-05-06 05:32本頁面
【正文】 cJun through MEF2C phosphorylation by p38 First Military Medical University 蛋白質(zhì)與核酸相互作用技術(shù) 研究細胞內(nèi)蛋白質(zhì)尤其是轉(zhuǎn)錄因子與特定核酸序列的相互作用。First Military Medical University 細胞信號轉(zhuǎn)導的技術(shù)方法 First Military Medical University First Military Medical University 蛋白激酶磷酸化及其活性測定 First Military Medical University 蛋白激酶磷酸化的檢測 ? 裂解培養(yǎng)的細胞獲得裂解上清 ? 以免疫共沉淀法獲得蛋白激酶 ? SDSPAGE ? 再加入蛋白激酶磷酸化特異性抗體 ? 以 Phospho AbHRP Western 化學發(fā)光檢測試劑盒測定蛋白激酶的磷酸化程度。 First Military Medical University 經(jīng)典蛋白激酶活性分析實驗流程 ? 以免疫共沉淀法獲得蛋白激酶 ? 加入該激酶底物和 ?32ATP，激酶使底物磷酸化 ? 放射自顯影，確定磷酸化條帶 First Military Medical University ? 以免疫共沉淀法獲得蛋白激酶 ? 加入該激酶底物，激酶使底物磷酸化 ? 再加入底物磷酸化特異性抗體 ? 以 Phospho AbHRP Western 化學發(fā)光檢測試劑盒測定底物的磷酸化程度，進而推出蛋白激酶活性 非放射性蛋白激酶活性分析實驗流程 First Military Medical University 較傳統(tǒng)激酶活性測定方法的優(yōu)點 ? 無需接觸放射性物質(zhì) ? 敏感度高：可以檢測到每個磷酸化分子 ? 特異性：利用磷酸化特異性抗體可以進行位點特異性分析 ? 信噪比高 ? 低背景 ? 系統(tǒng)完整：提供一整套直接從細胞裂解液中測試酶活的試劑 ? 節(jié)約時間：由幾天降到幾分鐘 First Military Medical University 0 2 4 6 8 1 0 1 2 1 4 0 5 10 20 30 60 90 120 Time (min) Relative kinase activity Dynamic processes of p38 activation by LPS in RAW cells First Military Medical University Effect of individual MAPK pathways on PRAK activity in intact cells MKK7(D) GSTATF2 GSTELK1 MKK1(E) Control HSP27 PRAK First Military Medical University Control Aniso. Arsenite TNF 80kDa 47kDa 39kDa 80kDa 47kDa kDa Control Aniso. Arsenite TNF A B The major kinases of p38? and p38 First Military Medical
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