沙門菌檢驗(yàn)技術(shù)和方法-文庫吧資料
2024-08-28 11:46本頁面
【正文】 + + + + + + + 沙門菌 應(yīng)得樹枝 0 2 4 1 2 4 0 0 0 0 0 4 1 2 4 1 0 4 0 2 0 組合編碼 6 7 0 4 7 5 2 應(yīng)用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片進(jìn)行測(cè) 試，卡片含有干燥的抗菌藥物和生化基質(zhì)。 ? 碳源和氮源利用試驗(yàn)：丙二酸鹽。 注：本試驗(yàn)主要用于不產(chǎn) H2S的沙門菌與大腸桿菌的判定 沙門菌生化鑒定的主要試驗(yàn)項(xiàng)目 ? 糖發(fā)酵試驗(yàn)：三糖鐵瓊脂 (葡萄糖、乳糖、蔗糖 )、甘露醇、山梨醇、衛(wèi)茅醇、水楊苷、ONPG。 ? 原理：大腸桿菌含有 β半乳糖苷酶，能分解 ONPG，使培養(yǎng)基呈黃色。試驗(yàn)失敗的主要原因是封口不嚴(yán)，氰化鉀逐漸分解，生成氫氰酸氣體逸出，以致藥物濃度降低細(xì)菌生長，呈假陽性反應(yīng)。 ? 注：本試驗(yàn)必需設(shè)置對(duì)照管（不加氰化鉀），若對(duì)照管細(xì)菌生長良好，試驗(yàn)管細(xì)菌不生長，可判定為陰性。本試驗(yàn)常用于沙門菌與檸檬酸桿菌的鑒定。 ? 原理：氰化鉀是劇毒藥物，可抑制某些細(xì)菌的呼吸酶系統(tǒng)，使這些酶失去活性，細(xì)菌的生長因此受到抑制。 ? 沙門菌的反應(yīng)：陰性。 尿素酶試驗(yàn) ? 尿素培養(yǎng)基：蛋白胨、葡萄糖、酚紅、氯化鈉、磷酸二氫鉀、尿素， 。 ? 原理：細(xì)菌分解蛋白胨中色氨酸，生成靛基質(zhì)，與對(duì)二氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈紅色。培養(yǎng)基需用液體石蠟封 蓋，阻止空氣的氧化作用。 注：本試驗(yàn)的陽性反應(yīng)為培養(yǎng)基不改變顏色 ,而培養(yǎng)基變黃色者為陰性反應(yīng)。 ? 沙門菌的反應(yīng)：陽性。 沙門菌在 TSI瓊脂上的反應(yīng) 斜面 底層 產(chǎn)氣 H2S 可能的菌屬和種 – + +/– + 沙門菌屬、弗勞地氏檸檬酸桿菌、變形桿菌屬、緩慢愛德華氏菌 + + +/– + 沙門菌、弗勞地氏檸檬酸桿菌、普通變形桿菌 – + – – 傷寒沙門菌、雞沙門菌、志賀菌屬、大腸埃希氏菌、蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌、普羅菲登斯菌屬 – + + – 沙門菌屬、大腸埃希氏菌、蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌、普羅菲登斯菌屬 + – + – +/– – – – 非沙門菌 賴氨酸脫羧酶試驗(yàn) ? 賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基：蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖、溴麝香草酚藍(lán)（紫）。 ? 硫酸亞鐵銨：是硫化氫的指示劑，可與硫化氫反應(yīng)生成硫化鐵呈黑色。 ? TSI的主要成分：蛋白胨、乳糖、蔗糖、葡萄糖、硫酸亞鐵銨、硫代硫酸鈉、酚紅、瓊脂。而大腸桿菌等其他腸道桿菌呈藍(lán)綠色。 沙門菌顯色培養(yǎng)基 ? 沙門菌顯色培養(yǎng)基主要用于快速篩選、分離沙門菌。如果經(jīng) 48177。 2小時(shí)后，沒有出現(xiàn)典型菌落，則不挑取任何菌落，讓平板繼續(xù)培養(yǎng) 24177。 ? BS瓊脂：某些非典型菌株產(chǎn)生綠色菌落，其周圍培養(yǎng)基稍微或不呈暗色。 HE和 XLD平板經(jīng) 24177。 分離培養(yǎng)中的注意要點(diǎn) ? 非典型的沙門氏菌菌落形態(tài)：不存在典型的或可疑的沙門氏菌菌落時(shí)，按如下步驟檢驗(yàn)非典型的沙門氏菌菌落。因這些培養(yǎng)基尚有抑制志賀菌屬生長的潛在因素，故本培養(yǎng)基是分離鑒定沙門菌及志賀菌屬的可靠培養(yǎng)基。 沙門菌的分離培養(yǎng)基 ? XLD瓊脂：培養(yǎng)基中含有去氧膽酸鈉作指示劑，在該濃度下的去氧膽酸鈉也同時(shí)作為大腸埃希氏菌的抑制劑 ，而不影響沙門菌屬和志賀菌屬的生長。 沙門菌的分離培養(yǎng)基 ? HE瓊脂：在保證細(xì)菌所需營養(yǎng)的基礎(chǔ)上，加入了一些抑制劑，如：膽鹽、檸檬酸鹽、去氧膽酸鈉等，可抑制某些腸道致病菌和革蘭氏陽性菌的生長，但對(duì)革蘭氏陰性的腸道致病菌則無抑制作用。菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色，有些不產(chǎn) H2S的菌落，形成灰綠的菌落，周圍培養(yǎng)基不變。該培養(yǎng)基制備過程不宜過分加熱，以免降低其選擇性，應(yīng)在臨用時(shí)配制，超過 48h不宜使用。 沙門菌的分離培養(yǎng)基 ? 亞硫酸鉍瓊脂（ BS）：含有煌綠、亞硫酸鉍能抑制大腸桿菌、變形桿菌和革蘭氏陽性菌的生長，但對(duì)傷寒、副傷寒等沙門菌的生長無影響。 沙門菌的增菌液 ? 四硫磺酸鈉煌綠增菌液 (TTB)：含有膽鹽，抑制革蘭氏陽性球菌和部分大腸埃希氏菌的生長，而傷寒與付傷寒沙門菌仍能生長。 使受損傷的沙門菌細(xì)胞恢復(fù)到穩(wěn)定的生理狀態(tài)。 －表示陰性。 反應(yīng)序號(hào) 2：補(bǔ)做甘露醇和山梨醇試驗(yàn)，沙門菌靛基質(zhì)陽性變體兩項(xiàng)結(jié)果均為陽性； 反應(yīng)序號(hào) 3：補(bǔ)做 ONPG， ONPG陰性，同時(shí)賴氨酸脫羧酶陽性為沙門菌；但甲型副傷寒沙門菌賴氨酸脫羧酶為陰性。 如有 2項(xiàng)異常為非沙門氏菌。 反應(yīng)序號(hào) A1：典型反應(yīng)判定為沙門氏菌屬。其他反應(yīng)結(jié)果均有沙門菌屬的可能，同時(shí)也均有不是沙門菌的可能。 沙門氏菌屬在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基內(nèi)的反應(yīng)結(jié)果 三糖鐵瓊脂 賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基 初步判斷 斜面 底層 產(chǎn)氣 硫化氫 + ＋（－） ＋（－） ＋ 可疑沙門氏菌屬 + ＋（－） ＋（－） － 可疑沙門氏菌屬 + + ＋（－） ＋（－） ＋ 可疑沙門氏菌屬 + + ＋ /－ ＋ /－ － 非沙門氏菌 注：＋陽性，－陰性；＋（－）多數(shù)陽性 , 少數(shù)陰性；＋ /－陽性或陰性。 ? 接種針在接種 TSI后 不要滅菌 ，直接接種賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂平板，于 36 ℃ 177。 ? 將已挑菌落的平板儲(chǔ)存于 2 ℃ ～ 5 ℃ 或室溫至少保留 24 h，以備必要時(shí)復(fù)查。于 36 ℃ 177。 1 ℃ 分別培養(yǎng) 18 h～ 24 h (XLD瓊脂平板、 HE瓊脂平板、顯色培養(yǎng)基平板 ) 或 40 h～ 48 h (BS瓊脂平板 )，觀察各個(gè)平板上生長的菌落
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