dna的復(fù)制與重組(參考版)
2025-01-10 02:12本頁面
【正文】 （ 2）兩端 IR（ 30~40bp）相似或相同；兩端無 IS組件 。 IR（ inverted repeat） IS Transposase IR 插入序列的基本結(jié)構(gòu)特點(diǎn) a、自身攜帶有轉(zhuǎn)座酶基因 b、末端有反向重復(fù)序列（ IR） c、轉(zhuǎn)座后兩端有正向重復(fù)序列（ DR） ATGCA 12345678 TACGT 12345678 87654321 ATGCA 87654321 TACGT 轉(zhuǎn)座酶基因 插入序列（ insertion sequences， IS） Tn （復(fù)合轉(zhuǎn)座子 , posite transposons） 特點(diǎn)： （ 1） 210kb。 二、噬菌體 λ對(duì) DNA的整合 （一） λDNA存在兩種形式 裂解狀態(tài) 溶源狀態(tài) （二）通過位點(diǎn)特異性重組實(shí)現(xiàn)兩種類型間的轉(zhuǎn)換 λDNA整合到宿主 DNA 進(jìn)入溶源狀態(tài) λDNA從宿主 DNA 中切離 進(jìn)入裂解狀態(tài) （ 三）催化重組的酶 整合酶 Int (integrase)：有拓?fù)洚悩?gòu)酶活性 整合宿主因子（ IHF， integration host factor ） 切除酶（ excisionase） / 終止重組 （四）重組位點(diǎn)： 附著位點(diǎn)（ attachment site） attP（ POP’）和 attB（ BOB’）有 15bp核心序列配對(duì) （五）重組過程： 整合： POP’ + BOB’ → BOP’— POB 切離： BOP’— POB’ → POP’ + BOB’ attP attB attP attB 第四節(jié) DNA的轉(zhuǎn)座 一、轉(zhuǎn)座子（ transposon ）的定義： 存在于染色體 DNA上可自主轉(zhuǎn)移座位的基本單位 二、 轉(zhuǎn)座子 發(fā)現(xiàn)： McClintock B： 1938年，提出轉(zhuǎn)座基因概念 1983年，獲諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng) ： 1980年，證實(shí)了可移位的遺傳基因存在 三、轉(zhuǎn)座子的類型 IS （插入序列 , insertion sequences） 特點(diǎn)（ 1）比較小， ~。該實(shí)驗(yàn)是建立在不大可能同時(shí)發(fā)生兩種或三種回復(fù)突變的設(shè)想上的。 轉(zhuǎn)導(dǎo)模型 （ 2） . 局限轉(zhuǎn)導(dǎo)（ restricted transduction） 定義 ： 通過部分缺陷的溫和噬菌體把供體菌的少數(shù) 特定基因攜帶到受體菌中，并與后者的基因 組整合、重組，形成轉(zhuǎn)導(dǎo)子的現(xiàn)象。 由轉(zhuǎn)導(dǎo)作用而獲得供體細(xì)胞部分遺傳性狀的重組受體 細(xì)胞稱為 轉(zhuǎn)導(dǎo)子 （ transductant） 攜帶供體部分遺傳物質(zhì)（ DNA片段）的噬菌體稱為 轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體。 （ 3）轉(zhuǎn)染 (transfection)： 現(xiàn)在把 DNA轉(zhuǎn)移至動(dòng)物細(xì)胞的過程也稱轉(zhuǎn)染 提純的噬菌體 DNA以轉(zhuǎn)化的（而非感染）途徑進(jìn)入微生物細(xì)胞并表達(dá)后產(chǎn)生完整的病毒顆粒。 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化效率高 （不像線型 DNA 那樣易于降解，而且還能在宿主中復(fù)制。 在自然轉(zhuǎn)化的基礎(chǔ)上發(fā)展和建立的一項(xiàng)細(xì)菌基因重組手段，是基因工程的奠基石和基礎(chǔ)技術(shù)。 轉(zhuǎn)化的頻率通常為 ％ ～ 1％ ， 最高為 20％ 。 由于每個(gè)細(xì)胞表面能與轉(zhuǎn)化因子相結(jié)合的位點(diǎn)有限 （ 如肺炎鏈球菌約 10個(gè) ） ， 因此 ， 從外界加入無關(guān)的 dsDNA就可競(jìng)爭并干擾轉(zhuǎn)化作用 。 轉(zhuǎn)化因子進(jìn)入細(xì)胞前還會(huì)被酶解成更小的片段 ， 約 8kb。 目前已知有二十多個(gè)種的 G+和 G細(xì)菌具有自然轉(zhuǎn)化的能力 此過程可以發(fā)生在土壤和海洋環(huán)境中，可能是自然界遺傳交換的重要方式。
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