體內(nèi)藥物分析方法(參考版)
2025-01-02 00:46本頁面
【正文】 min1（ 300mg） （ 2） 裝樣 過載 突破性試驗(yàn) 已知濃度樣品液 ① 小體積上柱 →洗脫回收百分率 ② 加大體積 →洗脫回收百分率 ③繪圖 當(dāng)回收率下降時(shí)為過載 （ 六 ） 生物樣品的組分濃集 （ 七 ） 衍生化處理 GC衍生化 HPLC衍生化 第四章 體內(nèi)藥物分析方法的建立與評價(jià) 一、分析方法 靈敏度 專屬性 光譜法 + + 剛開始應(yīng)用較多雙波長，導(dǎo)數(shù) 色譜法 +++ +++ HPLC GC 免疫法 ++++ ++ 疫交叉反應(yīng)，重現(xiàn)性 根據(jù)藥物理化性質(zhì)，結(jié)構(gòu)特征，藥物濃度，干擾成分大小，實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 二、分析方法的設(shè)計(jì)依據(jù) 方法的建立 原始方法改進(jìn) →創(chuàng)新 創(chuàng)立方法 1． 做好文獻(xiàn)總結(jié) 2． 充分了解藥物特征及體內(nèi)狀況 pH、 親脂性 、 溶解度 、 極性 、 光譜特征 、 藥動學(xué)參數(shù) 、體內(nèi)代謝情況 3． 明確測定目的 、 要求 目的 4． 結(jié)合實(shí)驗(yàn)室條件 設(shè)備條件 預(yù)處理方法 藥濃監(jiān)測 藥代動力學(xué)研究 母體藥物和代謝物 三、分析方法的建立 1． 純品進(jìn)行測定 確定線性范圍 、 靈敏度 、 反應(yīng)條件 （ pH、 t、 T） 2． 空白樣品測定 確定空白樣品是否有干擾 3． 以水代替空白樣品 ， 加標(biāo)準(zhǔn)液后測定 了解提取率 、 檢測濃度 確定萃取條件 、 pH、 揮發(fā)濃縮等 4． 空白樣品加入標(biāo)準(zhǔn)液測定 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立 回歸方程 回收率 5．實(shí)驗(yàn)樣品測定 四、分析方法的評價(jià) 可行性和可靠性 1． 準(zhǔn)確度 accuracy 測定結(jié)果與真實(shí)性的差異 用回收率表示 ① 接近 100% ② 相對恒定 ① 絕對回收率 也稱萃取回收率 、 提取回收率 測定血漿樣品中藥物濃度 /相同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液 =絕對回收率 考慮 3個(gè)濃度 （ 高 、 中 、 低 ） 分布在標(biāo)準(zhǔn)曲線成上 、 中 、 下 一般要求絕對回收率在 ≥70% 一般方法 HPLC內(nèi)標(biāo) 內(nèi)標(biāo)法時(shí)注意：藥物與內(nèi)標(biāo)用各自外標(biāo)法測定回收率應(yīng)相近 ，差值 10% ② 相對回收率 方法回收率 藥物系列濃度 +血樣 →標(biāo)準(zhǔn)曲線 取高 、 中 、 低三濃度加入到空白血漿中 ， 處理后測定 ， 與加入標(biāo)準(zhǔn)量相比 ， 得方法回收率 ， 測定值 15%， 定量限 20% 注意問題： a． 加入藥量與實(shí)際測定值相近 b． 加入物與實(shí)際存在狀態(tài)相近 c． 空白試驗(yàn) 與已確定方法進(jìn)行比較 2．精密度 precision ① 標(biāo)準(zhǔn)差 SD ② 相對標(biāo)準(zhǔn)性偏差 RSD不大于 15%， 定量限不大于 20% ② 日間精密度 日內(nèi)精密度 3．靈敏度（ sensitivity） 檢測的最小量 （ 1） 檢測限 （ LOD） 從背景中檢測到的最小藥物濃度： S/N≥3的絕對量 LOD=3N/S （ N噪間 S被測物信號 /單位重量 ） N=1mm 取 2μgmin1 洗脫 ~1ml （一）樣品的采集 1． 血樣 血樣濃度與作用點(diǎn)的濃度密切相關(guān)，可以反映靶器官的濃度。 ? 氧化反應(yīng) ? 還原反應(yīng) ? 水解反應(yīng) ? 結(jié)合反應(yīng) a． 葡萄糖醛酸結(jié)合 b． 硫酸酯化 c． 谷胱甘肽綴合 d． 乙?；Y(jié)合 e． 氨基酸結(jié)合 五、藥物代謝與體內(nèi)藥物分析的關(guān)系 1． 樣品的保存 樣品可能會分解 ， 如血漿酯酶可使酯類藥物水解 ，酶類可使
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