微生物的生化試驗(yàn)和血清學(xué)試驗(yàn)(參考版)
2025-08-04 15:02本頁(yè)面
【正文】 上層液體稍混濁，以+++記錄 （ 3）部分凝集，上層液體混濁以 ++記錄 （ 4）很少凝集，液體較混濁以 +記錄 （ 5）與對(duì)照管相同，無(wú)變化，以 記錄 復(fù)習(xí)題 血清學(xué)反應(yīng)、抗原、抗體、抗原抗體反應(yīng)的概念 影響血清學(xué)試驗(yàn)的因素有哪些？ 血清學(xué)試驗(yàn) 常用的 電解質(zhì) 有哪些，有什么 作用？ 寫出血清學(xué)試驗(yàn)中 玻片凝集法的原理和試驗(yàn)的方法步驟。 試管號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 對(duì)照 生理鹽水（ ml) 稀釋血清（ ml) 血清稀釋度 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 菌懸浮液（ ml) 血清最后稀釋度 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 試管凝集試驗(yàn)稀釋步驟 結(jié)果記錄 （ 1）完全凝集：凝集塊完全沉于管底。菌體凝集試驗(yàn)需較高的溫度和較長(zhǎng)的時(shí)間，最好是放 37℃ 后，移置 55℃ 24h。如此每管內(nèi)所含受檢血清濃度為前一管的一半，即 1:1: 1:40…1:2560 ，最后一管留作對(duì)照。然后吸取 待檢血清加入第 1管內(nèi)，吹打 3次，使混勻，該管含 1:10稀釋血清。 ? 因子診斷血清 ： 把含有多種 抗體的混合免疫血清，用具有共同抗原成分的有關(guān)細(xì)菌將其共同抗體吸收，只留下一種或幾種所需的特異性抗體的血清。 ? 多價(jià)診斷血清 ： 用含有兩種（型）的菌體免疫動(dòng)物后所獲得的血清。 ? 抗 H血清 ：用鞭毛抗原（ H抗原）免疫動(dòng)物后所獲得的血清。 ③、輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)玻片，使其充分混勻，靜置數(shù)分鐘，觀察結(jié)果。 （ 2）方法步驟 : ① 、于潔凈玻片的一端加診斷血清 1滴，另一端加生理鹽水 1滴作為陰性對(duì)照。 圖 91沉淀反應(yīng)中沒淀量與抗原抗體的比例關(guān)系 Ag：抗原； Ab：抗體 三、影響血清學(xué)試驗(yàn)的的因素 3. 電解質(zhì) : 常用 :％ 氯化鈉或各種緩沖液 作用 :中和膠體粒子上的電荷，使膠體粒子的電勢(shì)下降，促使抗原抗體復(fù)合物從溶液中析出，形成可見的沉淀物或凝集物。 Ag+Ab (AgAb) n 特異性結(jié)合 AgAb 電解質(zhì) 親水膠體 帶電荷的疏水膠體 疏水膠體凝集 ② 理化性質(zhì)改變：親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體 2. 反應(yīng)過程： ① 不可見階段 ② 可見階段 二、血清學(xué)反應(yīng)的特點(diǎn)： 具有特異性與交叉性 具有敏感性 具有定理特性 。因此它們分別被命名為 7Sγ球蛋白分子（ 16萬(wàn)） 19S,β2巨球蛋白分子 (β2M,90萬(wàn) )和 β2A球蛋白分子，所以從早期對(duì)抗體性質(zhì)的研究證明抗體不是由均質(zhì)性球蛋白組成，而是由異性球蛋白組成。 抗體的理化性質(zhì) （ 1）抗體是球蛋白 （ 2）免疫球蛋白 圖 21 兔血清電泳分離圖 其后，經(jīng)對(duì)不同免疫血清的電泳分析，超速離心分析和分子量測(cè)定等方法，發(fā)現(xiàn)大部分抗體活性存在于 γ球蛋白內(nèi)，但有小部分抗體活性可存在于 β球蛋白內(nèi)。 一、抗原與抗體 （一）抗原 抗原的概念 抗原 (Ag)：是指凡能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，并能與應(yīng)答產(chǎn)生的抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異反應(yīng)的物質(zhì)。在培養(yǎng)基上應(yīng)該產(chǎn)生什么現(xiàn)象？ 2. 大腸桿菌，能分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)能分解乳糖，不產(chǎn)生 H2S。 1℃ 培養(yǎng) 18~24h，觀察結(jié)果。 如果細(xì)菌又能分解含硫化合物，產(chǎn)生硫化氫，培養(yǎng)基底部變黑。 陽(yáng)性反應(yīng) 陰性反應(yīng) 不凝固 少量、零散凝固 明顯的塊狀凝固 巨大塊 凝固 完全凝固，倒置不流動(dòng) 金黃色葡萄球菌血漿凝固酶實(shí)驗(yàn) 試管法的結(jié)果觀察與記錄 ? 空白對(duì)照管的血漿流動(dòng)自如，陽(yáng)性對(duì)照管血漿凝固，試驗(yàn)管血漿凝固者為陽(yáng)性； ? 均無(wú)凝固則為陰性。另 1支加入營(yíng)養(yǎng)肉湯或 ％氯化鈉溶 。如兩者呈均勻混濁，無(wú)凝固則為陰性。 （四） 血漿凝固酶試驗(yàn) 原理：致病性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，可使血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白，附著在細(xì)菌的表面，形成凝塊；或作用于血漿凝固酶原，使它成為血漿凝固酶，從而使抗凝的血漿發(fā)生凝固現(xiàn)象 ,為陽(yáng)性。 管底發(fā)生混濁沉淀，對(duì)照管無(wú)沉淀者，為陽(yáng)性。 結(jié)果觀察與記錄 菌落周圍形成較大的不透明區(qū)，為陽(yáng)性。在 36 ℃ 水浴中，經(jīng) 2h、 4h、 8h、 24h觀察結(jié)果。卵磷脂酶具抗原性，其活性可被相應(yīng)抗血清所抑制， （ 2）卵黃鹽水法 將庖肉培養(yǎng)基培養(yǎng)物經(jīng)除菌過濾，收集濾液。 兩邊均無(wú)不透明區(qū)，為陰性。 1 ℃ 厭氧培養(yǎng) 24～ 48h，觀察結(jié)果。 1 ℃ 培養(yǎng) 3～ 6h，觀察結(jié)果。 結(jié)果觀察與記錄 ? 如凝塊全部溶化 ,為陽(yáng)性 +， ? 凝塊 24 h仍不溶化 ,為陰性 （三）卵磷脂酶試驗(yàn) 原理： 某些微生物能產(chǎn)生卵磷脂酶，在鈣離子存在時(shí)，能迅速分解卵磷脂，生成不溶性甘油酯和水溶性磷酸膽堿，在卵黃瓊脂平板上菌落周圍形成不透明的乳濁環(huán)或混濁白環(huán)，或使血清、卵黃液變混濁，以此鑒別細(xì)菌。如 2 h內(nèi)不溶化，繼續(xù)放置 24 h后觀察。 試驗(yàn)方法 吸取草酸鉀血漿 mL( g草酸鉀加5 mL兔血漿混勻，經(jīng)離心沉淀，吸取上清液 )，加入 mL生理鹽水，混勻后，再加入待檢菌36℃ 下培養(yǎng) 1824h肉湯培養(yǎng)物 mL和 ％氯化鈣 mL，混勻，放 37℃ 水浴中， 2 min觀察一次。
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