【正文】 PI值：Ala： Ser： Phe： Leu： Arg： Asp： His：[（1）Ala、Ser、Phe和Leu以及Arg和His向負極，Asp移向正極；（2）電泳時，具有相同電荷的較大分子比較小分子移動得慢，因為電荷/質(zhì)量之。）（1）血清蛋白，；（2）β乳球蛋白，；（3）胰凝乳蛋白酶原，、。[肌球蛋白、過氧化氫酶、血清清蛋白、胰凝乳蛋白酶原、肌紅蛋白、細胞色素C]，從分子排阻層析柱上洗脫細胞色素C、β乳球蛋白、未知蛋白和血清紅蛋白時，其洗脫體積分別為11537和24ml，問未知蛋白的Mr是多少？假定所有蛋白質(zhì)都是球形的，并且都處于柱的分級分離范圍。[（a）Keff=；(b)Keff=10]。假設(shè)某化合物的分配系數(shù)，（a）Kd=1；（b）Kd=50。20℃,根據(jù)斯維德貝格公式計算該蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量。%%，問其最低相對分子質(zhì)量是多少？[13110；15870]解：（1）蛋白質(zhì)Mr=247。必須指出，任何單獨鑒定只能認為是蛋白質(zhì)分子均一性的必要條件而不是充分條件。蛋白質(zhì)制品的純度鑒定通常采用分辨率高的物理化學(xué)方法，例如PAGE、等電聚焦、毛細血管電泳、沉降分析和HPLC等。纖維素離子交換劑和Sephadex離子交換劑的離子交換柱層析已廣泛地用于蛋白質(zhì)的分離純化。等電點沉淀、鹽析和有機溶劑分級分離等方法常用于蛋白質(zhì)分離的頭幾步。透析和超過濾是利用蛋白質(zhì)不能通過半透膜的性質(zhì)使蛋白質(zhì)分子和小分子分開，常用于濃縮和脫鹽。蛋白質(zhì)分子顆粒周圍的雙電層和水化層是穩(wěn)定蛋白質(zhì)膠體系統(tǒng)的主要因素。蛋白質(zhì)溶液是親水膠體系統(tǒng)。凝膠過濾是一種簡便的測定蛋白質(zhì)Mr的方法。沉降系數(shù)（s）的定義是單位離心場強度的沉降速度。在無鹽類干擾情況下，一種蛋白質(zhì)的質(zhì)子供體基團解離出來的質(zhì)子數(shù)與質(zhì)子受體基團結(jié)合的質(zhì)子數(shù)相等時的pH是它的真正等電點，稱為等離子點，它是該蛋白質(zhì)的特征常數(shù)。在等電點以上的pH時蛋白質(zhì)分子帶凈負電荷，在等電點以下的pH時帶凈正電荷。對某些蛋白質(zhì)說，在某一pH下它所帶的正電荷與負電荷相等，即凈電荷為零，此pH稱為蛋白質(zhì)的等電點?！?7步第七章 蛋白質(zhì)的分離、純化和表征提要蛋白質(zhì)也是一種兩性電解質(zhì)。（b） 一次循環(huán)中肌球蛋白沿細絲滑行“一步”，問一次收縮中每個肌動蛋白纖維需要進行多少個步？[（a），（b）約67步]解：（a）根據(jù)P281圖635A所示，當(dāng)松弛時重疊總長度為：（1+1）（）= 當(dāng)收縮時重疊總長度為：（1+1）（）= （b）（32）247。因為結(jié)合部位數(shù)目只可能是整數(shù)，所以n=2]。[L] mol/LN105105105104104[（a）第一個方程兩邊各乘（1+Ka [L]），然后兩邊各除以[L]，并重排第2個方程；（b）根據(jù)第二方程， N /[L]對N作圖的斜率是Ka，N /[L]=0時的截距給出n。（a）證明上面的方程可重排為N /[L]=KanKaN此方程式稱Scatchard方程，方程表明，N /[L]對N作圖將是一條直線。結(jié)合的速度常數(shù)是多少？此說明在結(jié)合半抗原時抗體中的結(jié)構(gòu)變化是大還是??？[（a）ΔG0ˊ=；（b）Ka=2106mol1L；（c）結(jié)合速度常數(shù)k=2108mol1S1L，此值接近于小分子與蛋白質(zhì)相遇（結(jié)合）的擴散控制限制（108至109mol1S1L）]解：(a)ΔG0ˊ=RTlnKa=298ln2000000=(b)Ka=1/Keq=1/5107=2106mol1L。]8．假設(shè)一個Fab半抗原復(fù)合體的解離常數(shù)在25℃和pH7時為5107mol/L。這樣的纖維不能繼續(xù)延長，因為末端的去氧HbA分子缺少“粘性”區(qū)。]。BPG濃度下降，Hb對O2的親和力增加，致使不能給組織供氧。[n=，Y肺=，Y毛細血管=，所以，ΔY=，n=，Y肺=，Y毛細血管=，所以，ΔY=，=，差值似乎不大，但在代謝活躍的組織中p（O2）40 torr，因此潛在輸氧效率不小，參見圖615]解：Y肺/（1Y肺）=[100/26] Y肺=Y毛/（1Y毛）=[40/26] Y毛=ΔY==當(dāng)n=，同理，Y肺= Y毛= ΔY=，貯存相當(dāng)時間的血。比較n==。設(shè)P50=26 torr，n=，計算肺（這里p（O2）=100 torr）中的Y和毛細血管（這里p（O2）=40 torr）中的Y。[（a）（1）98%，（2）58%；（b）約40%；（c）約50%]解：（a）圖略，從圖中克知分別為98%和58%； （b）98%58%=40%，故約40%； （c），據(jù)圖617可知：96%46%=50%。對血紅蛋白：（a）降低；（b）增加；（c）降低]℃，CO2分壓40 torr和BPG正常勝利水平（）條件下，人全血的氧結(jié)合測定給出下列數(shù)據(jù)：p（O2）%飽和度（=100Y）10305070859698（a） 根據(jù)這些數(shù)據(jù)，繪制氧結(jié)合曲線；估算在（1）100torr p（O2）(肺中)和（2）30 torr p（O2）（靜脈血中）下血的氧百分飽和度。[（a）蛋白質(zhì)B；（b）蛋白質(zhì)A的Ka=106(mol/L)1，蛋白質(zhì)B的Ka=109(mol/L)1？（a）；（b）肺中CO2分壓從45torr（屏息）降到15torr（正常）；（c）（海平面）（高空）。習(xí)題，前者的解離常數(shù)Kd為106mol/L，后者Kd為109mol/L。肌肉收縮受從肌質(zhì)網(wǎng)釋放的Ga2+刺激。肌球蛋白上的ATP水解與肌球蛋白頭片的系列構(gòu)象變化相偶聯(lián)，引起肌球蛋白頭從 F肌動蛋白亞基上解離并與細絲前方的另一F肌動蛋白亞基再結(jié)合。G肌動蛋白是一種單體，由它聚集成纖維狀的F肌動蛋白，后者是細絲的主體。肌肉收縮是由于肌球蛋白和肌動蛋白“精心安排”的相互作用的結(jié)果。由于抗體容易制取并具有高度特異性，它成為許多分析和制備生化方法的核心，如酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）、Western印跡和單克隆抗體技術(shù)等都得到廣泛應(yīng)用。一個給頂?shù)拿庖咔虻鞍滓话阒唤Y(jié)合一個大抗原分子的一部分，稱為表位。最豐富的是IgG類，它由4條多肽鏈組成，兩條重鏈，兩條輕鏈，通過二硫鍵連接成Y形結(jié)構(gòu)的分子。一個特定的祖先細胞通過刺激繁殖，產(chǎn)生一個具有同樣免疫能力的細胞群的過程稱為克隆選擇。助T細胞誘導(dǎo)那些產(chǎn)生免疫球蛋白的B細胞和產(chǎn)生T細胞受體的胞毒T細胞 增殖。T淋巴細胞產(chǎn)生T細胞受體，B淋巴細胞產(chǎn)生免疫球蛋白，即抗體。地中海貧血是由于缺失一個或多個編碼血紅蛋白鏈的基因造成的。這一改變在血紅蛋白表面上產(chǎn)生一個疏水小區(qū)，因而導(dǎo)致血紅蛋白聚集成不溶性的纖維束，并引起紅細胞鐮刀狀化和輸氧能力降低。了解最清楚的分子病是鐮刀狀細胞貧血病。胎兒血紅蛋白（α2β2）比成年人的血紅蛋白 （α2β2）有較高的氧親和力，就是因為它結(jié)合BPG較少。BPG能與去氧血紅蛋白結(jié)合，但不能與氧合血紅蛋白結(jié)合。H+、CO2和O2的結(jié)合之間的別構(gòu)聯(lián)系稱為Bohr效應(yīng)。第二，H+和CO2促進O2從血紅蛋白中釋放，這是生理上的一個重要效應(yīng)，它提高O2在代謝活躍的組織如肌肉的釋放。第一，血紅蛋白的氧結(jié)合曲線是S形的，這以為著氧的結(jié)合是協(xié)同性的。T態(tài)和R態(tài)之間的構(gòu)象變化是由亞基亞基相互作用所介導(dǎo)的，它導(dǎo)致血紅蛋白出現(xiàn)別構(gòu)現(xiàn)象。氧的結(jié)合促進T態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)镽態(tài)。T態(tài)是通過幾個鹽橋穩(wěn)定的。四聚體血紅蛋白中出現(xiàn)了單體血紅蛋白所不具有的新性質(zhì)，Hb除運載氧外還能轉(zhuǎn)運H+和CO2。血紅蛋白由4個亞基（多肽鏈）組成，每個亞基都有一個血紅素基。氧與Mb結(jié)合是可逆的。第6個配位位置是O2的結(jié)合部位。血紅素鐵離子直接與一個His側(cè)鏈的氮原子結(jié)合。多肽鏈中約75%是α螺旋，共分八個螺旋段。肌紅蛋白是一個單一的多肽鏈，含153個殘基，外形緊湊。亞鐵（Fe2+）態(tài)的血紅素能結(jié)合氧，但高鐵（+3）態(tài)的不能結(jié)合氧。這些蛋白質(zhì)含有一個結(jié)合得很緊的血紅素輔基。肌紅蛋白便于氧在肌肉中轉(zhuǎn)運，并作為氧的可逆性貯庫。因此它比一步合成所產(chǎn)生的缺陷頻率約低1000倍。（2）該復(fù)合物分3個階段形成：第一階段，多肽A和B的合成；第二階段，AB二聚體的形成；第三階段，6個AB二聚體裝配成復(fù)合物?？紤]一個多聚體酶復(fù)合物的合成，此復(fù)合物含6個相同的二聚體，每個二聚體由一個多肽A和一個B組成，多肽A和B的長度分別為300個和700個氨基酸殘基。穩(wěn)定締合的是哪種類型的相互作用（同種或異種）？（b）假設(shè)四聚體，如血紅蛋白，是由兩個相同的單位（每個單位含α和β兩種鏈）組成的。]。]，直接用SDS凝膠電泳分析（見第7章）時，它的區(qū)帶位于肌紅蛋白（相對分子質(zhì)量為16900）和β乳球蛋白（相對分子質(zhì)量37100）兩種蛋白之間，當(dāng)這個毒素蛋白用β巰基乙醇和碘乙酸處理后，在SDS凝膠電泳中仍得到一條區(qū)帶，但其位置靠近標(biāo)記蛋白細胞素（相對分子質(zhì)量為13370），進一步實驗表明，該毒素蛋白與FDNB反應(yīng)并酸水解后，釋放出游離的DNPGly和DNPTyr。關(guān)于該酶的結(jié)構(gòu)作出什么結(jié)論？[此酶含4個亞基，兩個無活性亞基的相對分子質(zhì)量為50000，兩個催化亞基的相對分子質(zhì)量為100000，每個催化亞基是由兩條無活性的多肽鏈（相對分子質(zhì)量為50000）組成。大的組分占總蛋白質(zhì)的三分之二，具有催化活性。因為在水環(huán)境中多肽對穩(wěn)定焓（ΔH折疊）的貢獻要小些。RRPVVLMAACLRPVVFITYGDGGTYYHWYH[殘基411是一個α螺旋，殘基1419和2430是β折疊片。]。但是在正常情況下A是以單體形式存在的，而B是以四聚體（B4）形式存在的，問A和B的氨基酸組成可能有什么差別。（d）ΔG折疊= kj/℃時ΔG折疊0，因此折疊的蛋白質(zhì)是穩(wěn)定的。該蛋白質(zhì)的折疊形式在25℃時是否穩(wěn)定？[（a）W=2200=1060；（b）ΔS折疊= kj/（K并假設(shè)對每個鍵φ和ψ有兩個定向。]。試預(yù)測在室溫下的溶液中下列多聚氨基酸那些種將形成α螺旋，那些種形成其他的有規(guī)則的結(jié)構(gòu)，那些種不能形成有規(guī)則的結(jié)構(gòu)？并說明理由。時可知該螺旋為左手性。[（a）左手；（b）]解：據(jù)P206圖513拉氏構(gòu)象圖， =φ80176。ψ=+120176。這就是氫鍵能量對穩(wěn)定焓貢獻小的原因。試解釋這種差別的原因。設(shè)有X個氨基酸殘基呈α螺旋結(jié)構(gòu)，則：X（）[59%]解：一般來講氨基酸的平均分子量為120Da，此蛋白質(zhì)的分子量為240000Da，所以氨基酸殘基數(shù)為240000247。該蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量為240000，105cm。習(xí)題1.（1）計算一個含有78個氨基酸的α螺旋的軸長。寡聚蛋白是由兩個或多個亞基通過非共價相互作用締合而成的聚集體。蛋白質(zhì)折疊不是通過隨機搜索找到自由能最低構(gòu)象的。蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能是蛋白質(zhì)天然構(gòu)象所具有的性質(zhì)。有些變性是可逆的。蛋白質(zhì)受到某些物理或化學(xué)因素作用時，引起生物活性丟失，溶解度降低以及其他的物理化學(xué)常數(shù)的改變，這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)變性。球狀蛋白質(zhì)種類很多，結(jié)構(gòu)也很復(fù)雜，各有自己獨特的三維結(jié)構(gòu)。亞基一般是一條多肽鏈。球狀蛋白質(zhì)可根據(jù)它們的結(jié)構(gòu)分為全α結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)、α、β結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)、全β結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)和富含金屬或二硫鍵蛋白質(zhì)等。結(jié)構(gòu)域常常也就是功能域。超二級結(jié)構(gòu)有3種基本形式：αα（螺旋束）、βαβ（如Rossman折疊）、ββ（β曲折和希臘鑰匙拓撲結(jié)構(gòu)）。細分時可在二、三級之間增加超二級結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域兩個層次。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)一般被分為4個組織層次（折疊層次），一級、二級、三級和四級結(jié)構(gòu)。α角蛋白、絲心蛋白（β角蛋白）、膠原蛋白和彈性蛋白是不溶性纖維狀蛋白質(zhì)；肌球蛋白和原肌球蛋白是可溶性纖維狀蛋白質(zhì)，是肌纖維中最豐富的蛋白質(zhì)。彈性蛋白是結(jié)締組織中另一主要的結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)。膠原蛋白是動物結(jié)締組織中最豐富的結(jié)構(gòu)蛋白，有若干原膠原分子組成。大多數(shù)β折疊股和β折疊片都有右手扭曲的傾向，以緩解側(cè)鏈之間的空間應(yīng)力（steric strain）。肽鏈的走向可以有平行和反平行兩種形式。α角蛋白是毛、發(fā)、甲、蹄中的纖維狀蛋白質(zhì)，它幾乎完全由α螺旋構(gòu)成的多肽鏈構(gòu)成。α螺旋結(jié)構(gòu)中每個肽平面上的羰氧和酰氨氫都參與氫鍵的形成，因此這種構(gòu)象是相當(dāng)穩(wěn)定的。最常見的二級結(jié)構(gòu)元件有α螺旋、β轉(zhuǎn)角等。并因此提出了拉氏構(gòu)像，它表明蛋白質(zhì)主鏈構(gòu)象在圖上所占的位置是很有限的（%%）。就其主鏈而言，由于肽鏈?zhǔn)怯啥鄠€相鄰的肽平面構(gòu)成的，主鏈上只有α碳的二平面角Φ和Ψ能自由旋轉(zhuǎn)，但也受到很大限制。此外二硫鍵在穩(wěn)定某些蛋白質(zhì)的構(gòu)像種也起重要作用。此外紫外差光譜、熒光和熒光偏振、圓二色性、核磁共振和重氫交換等被用于研究溶液中的蛋白質(zhì)構(gòu)像。第五章 蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)提要每一種蛋白質(zhì)至少都有一種構(gòu)像在生理條件下是穩(wěn)定的，并具有生物活性，這種構(gòu)像稱為蛋白質(zhì)的天然構(gòu)像。如果你打算向LysAla加入一個亮氨酸殘基使成三肽，可能會掉進什么樣的“陷坑”？解：（1）用BOC保護Ala氨基端，然后將其羧基掛接在樹脂上；（2）除去N端保護，將用BOC保護的Arg用縮合劑DDC與Ala相連；（3）將把樹脂懸浮在無水三氟乙酸中，通人干燥的HBr，使肽與樹脂脫離，同時保護基也被切除。[（1）兩個；（2）二硫鍵的位置可能是13和1115或111和315或115和311，第一種情況，用胰蛋白酶斷裂將產(chǎn)生兩個肽加Arg；第二種情況和第三種，將產(chǎn)生一個肽加Arg，通過二硫鍵部分氧化可以把后兩種情況區(qū)別開來。[YRMP]解：胰蛋白酶酶專一水解Lys和Arg殘基的羧基參與形成的肽鍵，故該四肽中含Lys或Arg；一肽段在280nm附近有強光吸收且Pauly反應(yīng)和坂口反應(yīng)（檢測胍基的）呈陽性，說明該肽段含Tyr和Arg；溴化氰專一斷裂Met殘基的羧基參加形成的肽鍵，又因生成了與茚三酮反應(yīng)呈黃色的氨基酸，故該肽段為MetPro；所以該四肽的氨基酸組成為TyrArgMetPro，即YRMP。另一片段用溴