液相-20xx中國藥品檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(參考版)
2025-05-31 01:50本頁面
【正文】 ? 樣品分析前必須進行空白梯度洗脫，以辨認溶劑雜質(zhì)峰，如洗脫過程中基線漂移較大，亦可對色譜圖進行空白扣除處理。例如甲醇和水黏度都小，當(dāng)二者以相近比例混合時黏度增大很多，此時的柱壓大約是甲醇或水為流動相時的兩倍。當(dāng)有機溶劑和緩沖液混合時，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時須特別小心。要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相。 ?如遇到這種情況，建議實驗者在檢測靈敏度調(diào)節(jié)（或工作站標(biāo)尺量程調(diào)整）完畢后，采用對照溶液逐步稀釋法配制系統(tǒng)溶液來確定此色譜系統(tǒng)的檢測限，在與供試品溶液及對照溶液相同的標(biāo)尺下記錄色譜圖，通常以信噪比 3:1時的相應(yīng)濃度作為檢測限，以該檢測限對應(yīng)的峰面積作為計算雜志總量時色譜峰峰面積的取舍限值。 ? 目前國內(nèi)色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)大致有積分儀和色譜工作站兩種類型，對于傳統(tǒng)的積分儀，由于記錄儀的滿量程是固定的，因此檢測靈敏度的調(diào)節(jié)通常是調(diào)節(jié)檢測器的靈敏度使色譜峰高達到記錄儀滿量程的某個范圍；而對于色譜工作站，由于記錄標(biāo)尺的滿刻度是可調(diào)的所以通常是調(diào)節(jié)滿刻度的設(shè)定值，使色譜峰的量程占滿刻度的某個范圍。 雜質(zhì)檢查時色譜參數(shù)的設(shè)置 ? 在進行雜質(zhì)檢查時，選擇適宜的檢測靈敏度和設(shè)定適宜的積分參數(shù)非常重要。 ?對于 5%的組分，其最大相對改變量為 %，該組分比例調(diào)節(jié)的范圍是 177。 ?對于 35%的組分，其最大相對改變量為 %，已超過了絕對該變量允許的范圍，故該組分比例調(diào)節(jié)的范圍是177。 ?例 2 兩組分比例為 2:98 按上述原則， 2%的最大相對改變量為 %，故該流動相比例調(diào)節(jié)的范圍是 : :。 二元流動相系統(tǒng) ?例 1 兩組分比例為 50： 50 按上述原則， 50%的最大相對該變量為 15%，已超過了絕對改變量允許的范圍，故該流動相比例調(diào)節(jié)的范圍是177。 10%為限。 30%且絕對改變量不超過 177。 流動相的調(diào)整 ?為滿足色譜柱系統(tǒng)適用性要求，試驗中有時需要調(diào)整流動相組分的比例。 ?一般來講，對于反相色譜柱，如使用緩沖液或含鹽溶液作為流動相，在試驗結(jié)束后，應(yīng)用 10倍柱體積（如150mm柱長，約 15ml）的低濃度的甲醇 /乙腈 水溶液（ 10%～ 20%）沖洗，使色譜柱內(nèi)的鹽完全溶解洗脫出，再用較高濃度的甲醇 /乙腈 水溶液（ 50%）沖洗，最后用高濃度的甲醇 /乙腈 水溶液（ 80% ～ 100%）沖洗，使色譜柱中的強吸附物質(zhì)沖洗出來。溫度的突然變化或者機械震動都會影響柱內(nèi)定相的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流動相流速時應(yīng)該緩慢進行。經(jīng)色譜系統(tǒng)適用性試驗測試，應(yīng)符合要求。除另有規(guī)定外，不宜反向使用，否則會導(dǎo)致色譜柱柱效明顯降低，無法恢復(fù)。 色譜柱的使用與保存 ?根據(jù)實驗要求和流動相的 pH值范圍，參照色譜柱說明書，選用適宜的色譜柱。供試品溶液在注入液相色譜儀前，一般應(yīng)經(jīng)適宜的 （或 )濾膜濾過，以減少對色譜系統(tǒng)產(chǎn)生污染或影響色譜分離。如確需貯存，可在冰箱內(nèi)冷藏，并在3天內(nèi)使用，用前應(yīng)重新濾過。貯存溶劑一定要蓋嚴(yán)，以防止溶劑揮發(fā)引起組成變化，也防止氧和二氧化碳溶入流動相引起 pH值變化，對分離或分析結(jié)果帶來誤差。 ?流動相一般貯存于玻璃、聚四氟乙烯等容器內(nèi)，不能貯存在塑料容器中。配制好的流動相應(yīng)通過適宜的（或 )濾膜濾過，以除去雜質(zhì)微粒。凡規(guī)定 pH值的流動相，應(yīng)使用精密 pH計進行調(diào)節(jié)，除另有規(guī)定外，偏差一般不
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