【正文】 第三步萃取的目的是使目的蛋白分配于鹽相，使其與 PEG分離，以便進一步純化蛋白和回收 PEG并循環(huán)使用。第一步萃取后，分布于上相的蛋白質可通過加入適量的鹽 (有時也可同時加入少量的 PEG)進行第二次萃取。 從細胞漿液中提取到的蛋白質還需要進一步純化。大量細胞或細胞碎片的存在使體系兩相的粘度，特別是下相的粘度大大增高，上、下相體積比降低．從而影響蛋白質的收率。實際操作中多數(shù)采用 PEG—鹽體系，主要是因為這種體系物理特性較好．易于相分離，而且價格也低。 雙水相萃取的應用 ? 產品的濃縮 ? 蛋白質的提取和純化 ? 生物小分子的分離和純化 ? 中草藥有效成分的提取 ? 生物活性物質的分析檢測 案例 從細胞漿液中提取蛋白質時，蛋白質均分配于上相，而細胞或細胞碎片分配于下相。 A 表面自由能的影響 kTEK /ln △??kTrK )(4ln 2SS12 ??? ???kTAK )(ln 2S1S ?? ???kTMK ?rln ? 因為大分子物質的 Mr很大， λ的微小改變會引起分配系數(shù) K發(fā)生很大的改變，因此利用不同的表面性質，可以達到分離大分子的目的。 雙水相中溶質分配理論 溶質在雙水相中的分配性質可用分配系數(shù) K表示，計算方法如下： BTccK ? 溶質在雙水相中的分配受表面自由能、表面電荷、疏水作用及生物親和作用等因素的影響，其中表面自由能、表面電荷對分配行為的影響最為重要，因而對這兩方面的理論研究也比較深入。用 A點代表體系總組成， B點和 C點分別代表互相平衡的上相和下相組成，稱為節(jié)點。如果體系總組成位于雙節(jié)點曲線上方的區(qū)域，體系就會形成兩相。 （５） 雙水相萃取 雙水相體系 物質類型 物質 P的名稱 物質 Q的名稱 兩種非離子型聚合物 聚丙二醇 聚乙二醇 聚乙烯醇 葡萄糖（ Dex） 羥丙基葡萄糖 聚乙二醇（ PEG） 聚乙烯醇 葡萄糖 (Dex) 聚乙烯吡咯烷酮 P為帶電荷聚電解質 硫酸葡聚糖鈉鹽 羧甲基葡聚糖鈉鹽 聚丙二醇、聚乙二醇 甲基纖維素 P、 Q都為聚電解質 羧甲基葡聚糖鈉鹽 羧甲基纖維素鈉鹽 P為聚合物 Q為鹽類 聚乙二醇 磷酸鉀、硫酸銨、硫酸鈉 硫酸鎂、酒石酸鉀鈉 圖中把均相區(qū)與兩相區(qū)分開的曲線，稱為雙節(jié)點曲線。用此方法提純的酶已達數(shù)十種，其分離也達到了相當規(guī)模。 雙水相萃?。?aqueous twophase extraction）是利用物質在互不相溶的兩水相間分配系數(shù)的差異來實現(xiàn)分離的一新型分離技術。 案例 通過調節(jié)水相 pH值和 KCl濃度來實現(xiàn)三種蛋白質的分離。 反膠團萃取機理 萃取過程 反萃過程 )( 00 mccKdtdcAVdtdcAVJ wfw ?????)39。 反膠團萃取機理 萃取過程中，水相中的溶質進入反膠團相需經(jīng)歷三步傳質過程： ① 通過表面液膜擴散，從水相到達相界面； ② 在相界面處溶質進入反膠團； ③ 含溶質的反膠團擴散進入有機相。 萃取色譜有兩種形式：表面涂敷固定相和萃淋樹脂 (將萃取劑鍵合到惰性支撐體上 )。 如無機萃取色譜是將有機萃取劑或絡合劑等吸附在惰性載體上 ，以無機物質如酸 、 堿 、 鹽等溶液為流動相 ， 用于分離無機物質的一種色譜法 。 ? 配體之間的交換萃?。喝鐪y定痕量銻時 ， 先用苯萃取結晶紫和氯銻酸締合物 ， 然后用羅丹明 6G交換締合物中的結晶紫 。 （２）交換萃取 根據(jù)萃取常數(shù)的不同 ， 利用金屬配合物或其鹽作萃取劑 ，發(fā)生金屬或配體之間的取代反應 ， 從而提高反應的選擇性 。 在萃取分離中進行大量元素和痕量元素的分離時 ， 應考慮共萃取現(xiàn)象可能引起痕量元素的損失或引入干擾 。 其它 （１）共萃取與抑萃取 ?共萃取是指某一元素 (通常指微量元素 )單獨存在時不被萃取或很少被萃取 ， 但與另一元素 (提出是常量元素 )存在時 ， 則被萃取或萃取效率增大這一現(xiàn)象 。 應用舉例 DCH18C6（ 二環(huán)己基 )可用于從大量 Ca2＋ 中萃取 Sr2＋ ， Sr2＋ 的回收率達 97%， 而其中的 Ca2＋ 僅存 1/(10－ 410－ 5)。 ④ 陰離子性能 陰離子的性質對冠醚配合物在有機相的溶解度有很大的影響 。 Pb2＋ 和 Sr2＋ 的離子半徑相近 , 但Sr2＋ 具有惰性氣體構型 , 其水合作用較強 , 因此 DB18C6對Pb2＋ 的萃取能力是 Sr2＋ 的 4050倍 。 ② 金屬離子半徑和電荷 主要考慮金屬離子的半徑和電荷 , 它們可能影響離子水化作用和對冠醚的靜電作用 。 其孔穴大小與萃取選擇性有關 , 應與金屬離子的直徑相匹配 。但要注意冠醚的價格較貴 , 并且具有一定的毒性。在通常情況下 , 堿金屬是難于采用萃取分離的。冠醚絡合物的萃取 , 類似于離子締合物的萃取。 冠醚萃取原理： 冠醚在一定的條件下能與離子形成有一定穩(wěn)定性的主客體配合物。如在硝酸溶液中用TBP萃取金屬離子： Mm+ + mNO3 + pTBP ←→ M(NO 3)mpTBP 例 7:冠醚萃取 適用于堿金屬和堿土金屬的萃取 YYYYYYYYYYYYK+X 冠醚結構：冠醚是一類大雜環(huán)化合物 , 雜環(huán)中包含著重復的 [YCH2CH2]環(huán)節(jié)。如 HCl 介質中乙醚萃取 FeCl4 萃取條件 ? 使用含氧溶劑 ， 其形成羊鹽能力為： R2O ROH RCOOH RCOOR RCOR RCOH； ? 采用高酸度 ， 一般要求 [H+]要達到 （ 515） mol/L； ? 被萃物酸根陰離子不能有大的親水性； ? 金屬離子能與陰離子形成疏水性的配合陰離子 。 如高氯酸、三氯乙酸、硝酸的萃取 H(H2O)4++ClO4+TBP(H2O) ←→ H(H2O)3 TBP +它們還可以用堿溶液再生。 R NH A M e A R NH M e A An n3 3? ? ? ? ? ?? ?? ?有機 水 有機 水 溶于有機相中的高分子胺鹽，與水相中的金屬絡陰離子接觸時，發(fā)生交換過程，使水相中的金屬絡陰離子與有機相中的胺鹽陽離子締合生成三元絡合物而進入有機相。如 次甲基藍陽離子萃取 BF4： NS N ( C H 3 ) 2( C H 3 ) 2 N + [BF4] 主要萃取條件：配位陰離子、酸性溶液和惰性溶劑 例 3： 高分子量胺萃取 R N H A R NH A3 3有機 有機? ? ??? ? ? ?質子加成反應 因此，高分子胺可用于水溶液中酸的萃取。 OCR1 R1R2CR1 R1R2R3 R4C O O R5三苯甲烷系堿性染料