hela細胞傳代培養(yǎng)ppt課件(參考版)
2025-02-24 16:20本頁面
【正文】 ? 9．待培養(yǎng)基（本身為紅色），當 pH值降低，培養(yǎng)基呈偏淡紅色時，一般 2天以后，將舊的培養(yǎng)基吸掉，更換新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。細胞懸液 ，培養(yǎng)密度為 1 105－ 106/ML。（無需準確計數(shù)時離心可略） ? 7．細胞離心畢，尖吸管棄去上清，吸取培養(yǎng)基適量，加入離心管，將細胞重懸、吹勻。 ? 6．至所有細胞從培養(yǎng)皿底部脫落下來，然后吸取至離心管中。吹打的部位均勻，從上到小，從左到右，順序進行吹打，保證各個部位的培養(yǎng)細胞均能吹打到，成片的細胞已經(jīng)分散成小的細胞團或者單細胞便停止吹打。在倒置顯微鏡下觀察，當細胞質(zhì)回縮，胞間間隙加大為消化適宜。消化時間長短是實驗成敗的關鍵，寧可短消化，不能過消化。 ? ，加入的量以覆蓋整個細胞培養(yǎng)面為宜，輕輕搖動。 ? ，用尖吸管棄去舊的培養(yǎng)基，加入 D－ Hanks。 ? 2．從冰箱中取出 ％胰酶、 D－ Hanks、培養(yǎng)基。 配制常用的胰蛋白酶液濃度是 ％ 。 ? 慶大霉素：每毫升 100單位 —— 方便、廣譜、穩(wěn)定 完全培養(yǎng)基的組成 ? 基礎培養(yǎng)基 80％一 95％ ? 血清 5％一 20％（一般加 10％） ? 碳酸氫鈉 g/L ? 青、鏈霉素 各 100卑位／毫升 實驗前的準備 ?培養(yǎng)基的配置 RPMI1640培養(yǎng)粉 1袋 碳酸氫鈉 g 青、鏈霉素 各 100單位／毫升 加三蒸水 至 1000ml, 過濾除菌。 ? 通常是青霉素和鏈霉素聯(lián)合使用。 ? 優(yōu)質(zhì)血清的標準：透明，淡黃色，無沉淀物，無細菌、支原體、病毒污染。 目前，絕大多數(shù)人工合成培養(yǎng)基使用時還需添加血清 ? 血清質(zhì)量好壞是實驗成敗的關鍵。 即使同源組織的不同細胞株 ， 所需 補加物 也不同 。 ? 向無清培養(yǎng)液中能促進細胞系生長的補加物都是獨特的 。 ? 1975
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