【正文】 ？ 6．試述細(xì)菌病害的檢驗(yàn)與診斷要點(diǎn)。 2．試述梨火疫病在國(guó)外的分布狀況、癥狀表現(xiàn)特點(diǎn)、病原分類(lèi)地位、檢驗(yàn)方法和防治措施。也有報(bào)道用土霉素－鹽酸注射液對(duì)病株的樹(shù)干進(jìn)行注射處理，能抑制植原體病的癥狀，處理過(guò)的植株又能重新健康生長(zhǎng)，每 4個(gè)月處理一次能保持植株不表現(xiàn)癥狀。 注射抗生素：可注射四環(huán)素 (500ppm)，每株椰子樹(shù)注射的最大劑量為 8克，加水 1000毫升。 防治昆蟲(chóng)介體。 科研單位特殊需要進(jìn)口，應(yīng)由檢疫機(jī)關(guān)審批隔離試種一年以上，證明種苗是健康的，方能進(jìn)口。 ? 檢疫措施 嚴(yán)禁從疫區(qū)進(jìn)口椰子果和苗木。 3．電鏡觀察 用電鏡觀察植物韌皮部組織中是否有植原體存在。 ? 檢驗(yàn)與檢測(cè) 1． 產(chǎn)地檢疫 根據(jù)植物受侵染后的癥狀，鑒定是否感病。有報(bào)道表明化學(xué)防治昆蟲(chóng)介體可明顯降低病害的傳播速度。葉蟬介體在美洲的地理分布與病害植原體的分布相吻合。 ? 傳播途徑 在自然條件下，椰子致死黃化病的介體為麥蠟蟬（ Myndus crudus）。在感病椰子樹(shù)韌皮部篩管細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)植原體的存在，形狀包括絲狀、念珠狀及近球狀，大小為 4002020 nm。一般椰子黃化植原體病癥狀發(fā)展過(guò)程如下 ： ① 大多數(shù)感病植株在果實(shí)成熟前提前落果 ② 新開(kāi)的花序黑化 ③ 從下部葉片到上部葉片逐漸黃化 ④ 針形葉死亡和脫落，可能僅保留少量綠葉 ⑤ 整個(gè)樹(shù)冠脫落，僅留赤裸的呈線桿狀枝干 ?病原： 椰子致死黃化植原體 學(xué)名 Coconut lethal yellowing Phytoplasma 英文名 Coconut lethal yellowing 分類(lèi)地位 原核生物界，無(wú)壁菌門(mén)，軟球菌綱，植原體屬（ MLO） ? 形態(tài)特征 電鏡下，典型的植原體顆粒存在于病株的篩管中。在葉部呈現(xiàn)黃化癥狀時(shí)， 根系 出現(xiàn) 壞死，不久腐爛 ，根系受害死亡。芽片感染后表現(xiàn)有不規(guī)則的褐色水浸狀條斑，逐漸發(fā)展到 芽腐，并有惡臭味 。開(kāi)花的花序軸從頂端開(kāi)始?jí)乃?、變黑，佛焰苞未成熟就提前開(kāi)放，然后 凋萎、落花、落果 。病害早期的典型癥狀是 花序干枯。在墨西哥和坦桑尼亞，成千上萬(wàn)公頃的椰子已被病害侵襲而死亡。在牙買(mǎi)加，據(jù)統(tǒng)計(jì) 1961年的 600萬(wàn)株感病的 Jamaica Tall椰子中的 90％在 1981年因感染黃化植原體而死亡。感病寄主屬包括： Allagoptera，桄榔屬 Arenga， Arikuryroba，Boraxxus， 魚(yú)尾屬 Caryota， 散尾屬 Chrysalidocarpus，椰子屬 Cocos， Corypha， Dictyosperma， Gaussia，Hyophorbe， Latania， 薄葵屬 Livistona， Mascarena，Nannorrhops， 刺葵屬 Phoenix， Pritchardia， 棕櫚屬 Trachycrpus， Veitchia。 ?寄主范圍： 除為害椰子樹(shù) (Cocos nucifera L.)外，還可以為害油棕、棗椰子、扇棕、馬尼拉棕、海棕等 30多種棕櫚科植物。該病害在加勒比海地區(qū)至少已有 100年的歷史，在西非也有 50年的歷史。 椰子致死黃化病 Coconut Lethal Yellowing ?分布 椰子致死黃化病的名稱(chēng)來(lái)源于 Nutman and Roberts (1955)。新梢期噴布 1－ 2次殺蟲(chóng)劑。 挖除病株 發(fā)現(xiàn)病株或可疑病株，應(yīng)立即挖除，用無(wú)病苗進(jìn)行補(bǔ)植。 ? 檢驗(yàn)與檢測(cè)： ：每年 10～ 12月癥狀表現(xiàn)最明顯 ：鑒別寄主法 ： ：黃色熒光 ：染色法 ： ? 檢疫與防治： 實(shí)行檢疫 禁止病區(qū)苗木及一切帶病材料進(jìn)入新區(qū)和無(wú)病區(qū)，新開(kāi)辟的果園要種植無(wú)病苗。 ? 傳播：遠(yuǎn)距離傳播主要是來(lái)自病區(qū)調(diào)運(yùn)的苗木、接穗；大田主要依靠柑橘木虱進(jìn)行傳播，在亞洲是 亞洲木虱，在非洲是 非洲木虱 。根據(jù)其對(duì)熱的反應(yīng)和傳病木虱的不同，分為兩個(gè)株系：在亞洲，其發(fā)病的最適溫度為 27－ 32℃ ，傳播介體為亞洲木虱（ Diaphorina citri）， 病原為柑桔黃龍病原亞洲株系 （ L. asiaticum）； 在非洲，其發(fā)病的最適溫度為20－ 24℃ ,傳播介體為非洲木虱 （ Trioza aryteae） 病原為柑橘黃龍病非洲株系（ L. africanum）。病果小，果皮光滑，畸形，無(wú)光澤，味酸，果皮著色時(shí)黃綠不均勻或在果蒂附近變橙紅色，而其余部份仍為青綠色的青果 ? 病原 Liberobacter asiaticum （亞洲）、 Liberobacter africanum（非洲） 分類(lèi)地位：原核生物界 (Procaryoces)，薄壁菌門(mén) (Gracilicutes)，韌皮部桿菌屬 Liberobacter 英文名稱(chēng)： Citrus Huanglongbing； Citrus Yellow shoot； Citrus greening ? 未能在人工培養(yǎng)基上分離獲得純培養(yǎng)，在電鏡下為橢圓形或短桿狀的細(xì)菌，大小為 30－ 600 500－1400?m，細(xì)胞壁厚度為 25－ 30 ?m。 ? 癥狀： 典型癥狀是在濃綠的樹(shù)冠中出現(xiàn) 1－2條或多條的發(fā)黃枝梢，有兩種類(lèi)型：一種是整張葉片均勻黃化 ，另一種是葉片呈黃綠相間的斑駁狀 。草本植物有長(zhǎng)春花 。 （ 4）抗菌素溫浸法： ： ： 柑橘黃龍病 Citrus Yellow shoot ? 分布： 1939年在中國(guó)廣東發(fā)現(xiàn)該病，現(xiàn)已擴(kuò)展到亞洲和非洲 37個(gè)國(guó)家和地區(qū)，中國(guó)主要發(fā)生在廣東、廣西、福建、臺(tái)灣、海南、云南、貴州、四川、浙江、湖南、江西等省。 ? 檢疫和防治 ： （ 1）微波爐 70℃ 處理 10min，效果很好。 ：用專(zhuān)化性噬菌體，如 ZP ZP82等檢驗(yàn)。 ：采用伊凡諾夫選擇培養(yǎng)基，其成分如下： 甘油 30ml 檸檬酸鐵銨 10g 磷酸氫二鉀 2 . 5g, 氯化鈉 15g 硫酸鎂 , 瓊脂 17g 氯化鈣 , 蒸餾水 1000ml, 為了抑制雜菌的污染 ,還可采用選擇性黑色素培養(yǎng)基 ,其成分如下 : 酵母浸膏 1g 甘油 30ml 制霉菌素 200mg/ml 牛膽酸鈉 3g 氯化鈉 15g 1%水溶性黑色素 20ml 瓊脂 17g 蒸餾水 1000ml 30℃ 下培養(yǎng) 7d，對(duì)光觀察，菌落中心呈黑色，邊緣透明，菌落圓形，表面光滑，呈粘狀。此外 有利于發(fā)病的條件包括土壤氮肥水平偏高，鉀肥水平偏低，高溫高濕等。s wilt bacterium (Pantoea stewartii). ?流行條件 ：發(fā)病與流行主要決定于冬季氣溫（ 1 2月）的高低，若平均氣溫總和在 37℃ 以上，有利蟲(chóng)媒越冬，帶菌昆蟲(chóng)成活率高，有可能引起發(fā)病。越冬后現(xiàn)在早播玉米苗上取食，引起初侵染，并產(chǎn)卵發(fā)育成新一代成蟲(chóng)，繼續(xù)向其它植株傳病。土壤和病原殘?bào)w不能越冬，昆蟲(chóng)是病原細(xì)菌的傳播介體和重要的越冬場(chǎng)所。 細(xì)菌生長(zhǎng)溫度最低溫度 8～ 9℃ ，最適溫度30℃ ，最高溫度 39℃ ，致死溫度 53℃ 10min，適宜 ～ ，最適 ～ 。在牛肉膏培養(yǎng)基上形成黃色圓形菌落，全緣，表面扁平光滑，能利用葡萄糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、甘露糖、木糖、甘油鶴甘露糖、醇等產(chǎn)酸，但不產(chǎn)生氣體。 Pseudobacterium stewartii (Smith) Hrasil’nikov,1949。 Bacterium stewartii( Smith) Smith。 Apalnobacter stewartii (Smith) McCulloch。 second phase of Stewart39。果穗的菌膿可通過(guò)內(nèi)層包葉的氣孔滲出，籽粒表面沾滿(mǎn)細(xì)菌菌膿，病籽粒變形、皺縮和變色。生長(zhǎng)后期，葉片產(chǎn)生許多小病斑，結(jié)合成大塊，火燒狀干枯死亡。 ?癥狀 ：整個(gè)生育期都可危害，以開(kāi)花期癥狀最明顯。 ?寄主植物 主要是甜玉米，也侵染馬齒玉米、粉質(zhì)玉米、硬粒玉米和爆裂玉米。 玉米細(xì)菌性枯萎病 Stewart’s bacterial wilt of corn ?分布 ： 1889年紐約首先報(bào)道，現(xiàn)已 20多個(gè)國(guó)家。芽前刮除發(fā)病樹(shù)皮，在生長(zhǎng)季節(jié)每隔 7天檢查 1次各種發(fā)病新梢和組織，發(fā)現(xiàn)后及時(shí)剪除。 ： 120mg/kg鏈霉素噴霧，或花期用波爾多液噴霧防治，效果很好。 ： 免疫熒光、 ELISA、 ODD和凝集實(shí)驗(yàn) ： 核酸探針和 PCR技術(shù) ? 檢疫和防治 ，禁止從疫區(qū)引入薔薇科仁果類(lèi)果樹(shù)樹(shù)苗。 NA上培養(yǎng) 48小時(shí)的細(xì)菌配成 108 cells /ml的懸液，注入煙草葉片或接種于 1cm厚梨片、或針刺接種于１丈長(zhǎng)的巴黎枝條，28℃ 下培養(yǎng)，一般 10~12小時(shí)后，煙草注射區(qū)出現(xiàn)白色壞死斑。配方：水 380ml，蔗糖 160g，營(yíng)養(yǎng)瓊脂 12g，結(jié)晶紫 （ 1%乙醇溶液）， %放線菌酮 20ml。次氮基三乙酸 ，硫酸十七烷基鈉 ， %溴麝香草酚蘭水溶液 9ml，%中性紅 ，蒸餾水 970ml， 1%放線菌酮 5ml， 1%硝酸銫水溶液 。 MS培養(yǎng)基 菌落為紅橙色，背景為蘭綠色。 ?檢驗(yàn)方法： ： ：梨火疫病的癥狀很典型，是鑒定的重要方法，但必須與其他癥狀相似的梨梢枯病區(qū)分開(kāi)。經(jīng)冰雹襲擊，病害蔓延更加迅速。 ② 遠(yuǎn)距離傳播：主要是感病寄主繁殖材料，包括種苗、接穗、砧木、水果、被污染的運(yùn)輸工具、候鳥(niǎo)等。除次之外，昆蟲(chóng)對(duì)病菌的傳播擴(kuò)散起一定的作用。病菌亦通過(guò)傷口、自然孔口（氣孔、蜜腺、水孔）、花侵入寄主組織，有一定損傷的花、葉、幼果和茂盛的嫩枝最易感病。菌膿的理化性質(zhì)隨濕度變化而變化，干時(shí)皺、硬，大時(shí)膨脹易被雨水?dāng)U散，中等濕度的菌膿粘易被昆蟲(chóng)、風(fēng)傳播。除蛋白酶外，病菌不產(chǎn)任何有助于侵入寄主的酶，主要是在環(huán)境條件適宜時(shí)，通過(guò)胞間組織侵入薄壁組織的病菌產(chǎn)生胞外多糖。 細(xì)菌生長(zhǎng)的溫度范圍 6～ 37 ℃ ，最適溫度 25～ ℃ ，致死溫度 45～ 50℃ ， 10 min，最適酸堿度為 。氯化鈉濃度高于 2％以上時(shí)生長(zhǎng)延緩，至 6％－ 7%時(shí)則完全抑制。不產(chǎn)生硫化氫，不利用丙二酸鹽。 ? 生物學(xué)特性： 兼性厭氧，過(guò)氧化物酶陽(yáng)性，氧化酶陰