哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)-wenkub.com
2025-08-12 21:47 本頁(yè)面
【正文】 因此，通過(guò)增加目的基因拷貝數(shù)來(lái)獲得高表達(dá)重組藥物的 CHO細(xì)胞工程株是基因工程藥物研究中不可或缺的一步。 2 翻譯水平 除了轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控外，翻譯水平的調(diào)控 (如mRNA壽命、 mRNA的翻譯起始效率 )和翻譯產(chǎn)物的加工修飾的效率等也對(duì)目的基因的表達(dá)產(chǎn)生重要的影響。最好多試用幾種不同的載體及宿主細(xì)胞。 誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng) 是指目的基因的轉(zhuǎn)錄受外源小分子誘導(dǎo)后才得以開(kāi)放。已有報(bào)道能放大到 100 L反應(yīng)器中生產(chǎn)重組蛋白，產(chǎn)量 (分泌型蛋白 )可達(dá) l~10 mg/L。 CHO細(xì)胞則利于外源基目的穩(wěn)定整合，易于大規(guī)模培養(yǎng)，能在無(wú)血清和蛋白的條件下生 比，是用于真核生物基因表達(dá)軟為成功的宿主細(xì)胞。產(chǎn)生的抗體具有相應(yīng)的結(jié)合能力和數(shù)應(yīng)功能，但表達(dá)量很低。 目前常用的強(qiáng)啟動(dòng)子包括人巨細(xì)胞病毒早期啟動(dòng)子(CMVIE)、人延伸因子 1亞基啟動(dòng)子和 Rous肉瘤長(zhǎng)末端重復(fù)序列； Invitrogen公司開(kāi)發(fā)的pcDNA、 pEF和 pRL三種系列載體即分別是以這三種啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)目的基因的表達(dá)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，在不斷提高的選擇壓力下， dhfr及側(cè)翼序列能擴(kuò)增至上千個(gè)拷貝，大大增加目的基因的表達(dá)水平。 為了將含目的基因的載體導(dǎo)入哺乳動(dòng)物功物細(xì)胞．還必須加入遺傳選擇標(biāo)記。相比之下， 附加體型載體 不存在這方面的 問(wèn)題，但載體 DNA在復(fù)制中容易發(fā)生突變或重排。依據(jù)質(zhì)粒在宿主細(xì)胞內(nèi)是否具有自我復(fù)制能力，可將質(zhì)粒載體分為整合型和附加體型載體兩類(lèi)。 病毒載體 是以病毒顆粒的方式，通過(guò)病毒包膜蛋白與宿主細(xì)胞膜的相互作用使外源基因進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)。有人認(rèn)為其限速步驟可能是在工程細(xì)胞中重組蛋白的分泌效率較低。 ②已有許多重要的蛋白及糖蛋白利用哺乳動(dòng)物細(xì)胞系統(tǒng)表達(dá)和大量制備、生產(chǎn)。與其它系統(tǒng)相比，哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)在于能夠指導(dǎo)蛋白質(zhì)的正確折疊，
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