db46t280-20xx羅非魚鏈球菌病檢測技術(shù)規(guī)程doc-wenkub.com
2025-07-12 11:27 本頁面
【正文】 Note: “+”represents positive reaction。 半固體BHI（腦心浸出液Brain Heart Infusion，BHI）培養(yǎng)基 %的瓊脂粉，將樣品按說明書加水溶解后，分裝于試管中（不超過試管總體積的1/3），121 ℃高壓滅菌15 min，垂直冷卻后，置4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?000 mL附 錄 A （規(guī)范性附錄）試劑的配制方法 1TAE Buffer (pH )Tris堿242 g， g，加約800 mL去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙猓?mL，充分?jǐn)嚢韬蠹尤ルx子水定容至1000 mL，使用時50倍稀釋。d) 或API 20 STREP或Rapid ID 32 STREP試劑盒的檢測結(jié)果為無乳鏈球菌。 感染結(jié)果根據(jù)科赫法則，人工感染患病的羅非魚出現(xiàn)與自然患病羅非魚相同的癥狀，且從人工感染患病的羅非魚中分離出與人工感染細(xì)菌菌落形態(tài)相同的細(xì)菌，可確定為病原菌?！?電泳檢測陽性對照 (模板為無乳鏈球菌和海豚鏈球菌DNA混合物) %的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果應(yīng)同時顯474 bp和296 bp兩條帶，陰性對照 (無DNA模板) 的PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果不顯示任何條帶，則認(rèn)定檢測結(jié)果成立，否則檢測結(jié)果不成立。 測序結(jié)果分析采用序列拼接軟件ContigExpress對測序結(jié)果進(jìn)行拼接，采用Vector NTI suite ()進(jìn)行序列同源性分析。 PCR反應(yīng)程序94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性 30 s，57 ℃退火30 s，72℃延伸2 min，循環(huán)30次；72 ℃再延伸10 min。 結(jié)果判讀用ATB TM Expression儀或mini API或人工判讀?！?Rapid ID 32 STREP檢測 革蘭氏染色按GB/T 執(zhí)行?！?接觸酶試驗 ?！?吲哚試驗 按SC/T 7014規(guī)定執(zhí)行。在血平板上形成明顯的透明環(huán)為β溶血，形成狹窄的灰綠色溶血環(huán)為α溶血，不形成溶血環(huán)為γ溶血。通過細(xì)菌由中央向周邊遷移形成游動圈大小來檢測其運動性強弱?！?革蘭氏染色按GB/T 執(zhí)行?！?解剖檢查肝臟充血、腫大，顏色不均，呈花肝狀，質(zhì)地脆弱；脾充血腫大；膽囊充盈、充滿藍(lán)黑色的膽汁；部分患病魚體出現(xiàn)腹水，腸道有輕度炎癥，腸腔內(nèi)有少量黃色的粘液。d) 微量移液器。5 儀器設(shè)備除下列儀器設(shè)備外，其余儀器設(shè)備按SC/T 的規(guī)定執(zhí)行。GB/T 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 染色法、培養(yǎng)基和試劑SC/T 7014 水生動物檢疫實驗技術(shù)規(guī)范SC/T 魚類細(xì)菌病檢疫技術(shù)規(guī)程 第1部分：通用技術(shù)3 病原體與流行情況 主要病原體無乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae）、海豚鏈球菌（Streptococcus iniae）。本標(biāo)準(zhǔn)適用于羅非魚鏈球菌病的檢測與診斷。
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1