細胞化學(xué)染色ppt課件(2)-wenkub.com
2025-05-01 12:01 本頁面
【正文】 ? ， 用以鑒別含鐵血黃素細胞 ， 對于診斷慢性肺淤血 （ 心衰細胞 ） 、 幼兒特發(fā)性肺含鐵血黃素沉著癥具有重要意義 。 ? 臨床意義 ： ? ⒈ 缺鐵性貧血時 ， 骨髓細胞外鐵明顯減少 ， 甚至消失；鐵粒幼紅細胞的百分率減低 ， 常小于 ， 嚴重時小于， 鐵粒 5粒以下 。 ? 5. 已做過瑞氏染色 （ 著色好 、 無沉渣 ） 的涂片 ， 也可做鐵染色 ， 且不需復(fù)染 。 ? 注意事項： ? 1. 所用玻片及器具應(yīng)潔凈 、 無鐵污染 。 ? ++：細胞漿內(nèi)含 2～ 5個鐵顆粒 。 ? ++++：見極多鐵顆粒、鐵小珠和很多密集成堆的鐵小塊。 ? 0：全片無細胞外鐵的藍色陽性反應(yīng)及顆粒 。 ? 10g/L藏紅花紅溶液或中性紅溶液復(fù)染 1分鐘 ， 流水沖洗 ， 干后鏡檢 。酸性亞鐵氫化鉀能與細胞內(nèi)、外鐵發(fā)生普魯士藍反應(yīng)，形成藍色的亞鐵氫化鐵沉淀，定位于細胞漿中。 ? ⒍ 高 雪氏細胞 、 海藍組織細胞為較強的陽性反應(yīng) ， 尼曼 匹克氏細胞為陰性至弱陽性反應(yīng) 。 ? ⒉ 急性粒細胞白血病的原始細胞多為陰性反應(yīng) ， 較分化的原始粒細胞及早幼粒細胞可呈弱陽性 ， 陽性物質(zhì)為紅色細顆粒狀 ， 均勻分布 。 ? 5. 巨核細胞及血小板呈陽性反應(yīng) 。 ? 正常分布 ： ? ：原粒細胞多為陰性反應(yīng) ， 早幼粒細胞至分葉粒細胞陽性反應(yīng)逐漸增強 ， 呈細顆粒狀 。 ? 7. 染色時 ， Schiff反應(yīng)最好在室溫下進行 。 使用時不要暴露于空氣中過久 ， 否則溶液中的 SO2外逸 ， 導(dǎo)致溶液變紅而失效 。 ? 2. 保存良好的 （ 已固定或未固定的 ） 陳舊涂片 、 已做過瑞氏染色的涂片 ， 均可進行 PAS染色 。 ? 20g/L甲基綠溶液復(fù)染 15分鐘或%孔雀綠溶液復(fù)染 2秒鐘 ， 流水沖洗 ，干后鏡檢 。 溶液變紅則失效 。醛基與雪夫氏（ schiff） 試劑中的無色品紅結(jié)合生成紫紅色化合物，定位于細胞漿中。 ? 3. 急性早幼粒細胞白血病 （ M3） 的白血病細胞為陰性 。 ? 4. 巨核細胞及血小板為陰性 。 ? 3. 重氮鹽也可用堅固籃 BB鹽或固醬紫 GBC鹽 ， 以代替六偶氮副品紅 。 ? 3. 10g/L甲基綠溶液復(fù)染 5min或 %孔雀綠溶液復(fù)染5s， 流水沖洗 ， 待干后鏡檢 。 ? 3. 磷酸鹽緩沖液 ： ,。 ? 3. 急性早幼粒細胞白血病 （ M3） 的白血病細胞可為 ANAE－ CE酯酶雙染陽性反應(yīng) 。CE陽性反應(yīng)呈藍黑色顆粒狀 ， 定位于細胞漿中 。 ? 染色步驟 ? 1. 干燥涂片 ， 滴加固定劑布滿血膜固定 1秒鐘 ， 流水沖洗 ， 待干或濾紙吸干 。 ? ⒉ 可用于惡性腫瘤的鑒別診斷： ? ⑴ .癌細胞多為強陽性 ， ? 肉瘤細胞多為陰性或弱陽性 。 ? ⑶ .急性早幼粒細胞白血病 （ M3） 時 ， 白血病細胞可呈中度至弱的陽性 。 ? 、 巨噬細胞呈強陽性反應(yīng) ，高雪氏細胞 、 海藍組織細胞為陽性 。 ? 正常分布 ： ? ：呈強陽性反應(yīng) ， 其反應(yīng)可被氟化鈉抑制 。 ? 2. 涂片可不固定而直接加工作液做 ANAE染色 ， 陽性反應(yīng)強于固定者； 37℃ 時陽性反應(yīng)強于室溫 。 ? ①點樣型：主要見于成熟 T淋巴細胞，陽性反應(yīng)呈棕色或棕紅色 1～ 4個圓形、團塊、邊界清楚的大點狀顆粒定位于胞漿中。 ? 染色步驟 ： ? 干燥涂片 ， 滴加固定劑布滿血膜固定1秒鐘 ， 流水沖洗 ， 待干或濾紙吸干 。 ? 3 .其它類型白血病細胞呈陰性反應(yīng) 。 ? 正常分布 ： ? ， 均為陽性反應(yīng)； ? 。 ? 結(jié)果判斷 ： ? 陽性反應(yīng)呈藍黑色顆粒狀，定位于細胞漿中。 ? ： ? ① PBS ? ② %氯醋酸 ASD萘酯 50ul ? （ N， N－ 二甲基甲酰胺 ） ? ③ 堅固籃 BB 1mg， 混勻 。 氯醋酸 ASD奈酚酯酶染色（ CE） ? 原理 ： ? 氯醋酸 ASD萘酯能被酯酶水解生成ASD萘酚，再與穩(wěn)定的重氮鹽偶聯(lián)，生成不溶性的藍色沉淀定位于細胞漿中。 ? 臨床意義： ? ⒈ 用于急性白血病的類型鑒別： ? ⑴ .急性粒細胞白血病較分化的原始粒細胞為陽性 ， Auer小體為陽性 。 ? 正常分布： ? ：中性粒細胞除早期原始粒細胞外 ， 下階段細胞均為陽性反應(yīng)；嗜酸性粒細胞反應(yīng)最快 ， 著色最強；嗜堿性粒細胞為陰性反應(yīng) 。 ? 3. 本法在顯示 MPO的同時 ， 細胞核能被染成淺紅色 ，可不需另外復(fù)染細胞核 。 ? 染色步驟： ? 1 干燥的骨髓涂片或外周血涂片 ， 滴加固定劑布滿血膜固定 30~60s， 流水沖洗 ，晾干或濾紙吸干 。 ? 2 . 磷酸鹽緩沖溶液 ： 。 ? 4. Washurn聯(lián)苯胺法不必預(yù)先固定血膜；預(yù)先固定了的血膜應(yīng)盡快做 MPO染色 ， 超過 48h酶的活性會顯著降低或消失 。 若發(fā)現(xiàn)成熟粒細胞 MPO反應(yīng)較弱或呈陰性 、 或染色時血膜上不產(chǎn)生氣泡 ， 則表明稀H2O2可能失效 ， 需重新配制 。 ? 加等量稀雙氧水 ， 混勻 ， 染色 4～ 5分鐘 ， 流水充分沖洗 。 ? 試劑： ? 1. 聯(lián)苯胺溶液 99ml 88%～ 95%的乙醇溶液中 ， 加 360g/L亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液 1ml， 儲存于棕色瓶中 ， 可保存 8個月 。 ? 性反應(yīng) 。 ? 2. 蘇丹黑 B溶液的溫度升至 37℃ 后開始計時 。 ? 2. 入蘇丹黑 B溶液 37℃ 孵育 1h， 流水沖洗 ， 待干或濾紙吸干 。 蘇丹黑 B染色（ SBB） ? 原理 蘇丹黑 B是一種脂溶性染料 ， 能將細胞內(nèi)的脂類顯示出來 ， 呈棕黑色顆粒狀定位于胞漿中 。 ? 臨床意義 ? 1. 單核細胞性白血病 、 真性組織細胞性淋巴瘤 、T細胞白血病及淋巴瘤 、 毛細胞白血病 、 漿細胞白血病 、 漿細胞瘤 、 多發(fā)性骨髓瘤細胞均呈較強陽性反應(yīng) 。 ? 2. 單核細胞 、 T淋巴細胞 、 漿細胞呈中等強度陽性 。 ? 注意事項： ? 1. 固定劑以甲醛蒸氣為最佳 。 ? 2. 入工作液 37℃ 孵育 2～ 3h， 流水沖洗數(shù)次 。 ? 試劑：
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