【正文】 因此，厭氧培養(yǎng)箱在分離，研究極端專性厭氧菌時(shí)更有其優(yōu)勢。 ? ⑤ 厭氧箱培養(yǎng)法：厭氧培養(yǎng)箱由厭氧環(huán)境操作箱、恒溫培養(yǎng)箱、高度真空傳遞箱、氣路控制系統(tǒng)、箱架、瓶架等部分組成。 焦性沒食子酸和 Na2℃ O3在有濕氣 (即水分 )存在的條件下緩慢作用吸氧和放出 CO2， 造成厭氧狀態(tài) ， 強(qiáng)化了厭氧條件 。 培養(yǎng)后可見到生長的厭氧微生物菌落 。厭氧菌過氧化氫酶 )和過氧化物酶 ， 不能破壞超氧離子和 H202， 易被殺傷 ， 故在有氧時(shí)不能生長 。 確定方法 ? 菌種的性質(zhì) (如菌種傳代后的穩(wěn)定性 ) ? 孢子瓶中的孢子數(shù) ， 孢子發(fā)芽及菌絲繁殖速度 ? 發(fā)酵罐中種子培養(yǎng)液的最低接種量 ? 種子罐與發(fā)酵罐的容積比 。 對于已出現(xiàn)雜菌菌落或噬菌斑的試管斜面菌種 ，應(yīng)予廢棄 。 ? 泡沫的控制除了添加消泡劑外 ， 改進(jìn)培養(yǎng)基成分也是相輔相成的一個(gè)重要方面 。 因此 ， 氣泡不易破裂 ， 聚成泡沫層 。 3．影響種子培養(yǎng)的條件 ? 菌種擴(kuò)大培養(yǎng)的關(guān)鍵就是搞好種子罐的擴(kuò)大培養(yǎng) 。 ? 用于面包酵母 、 氨基酸 、 抗生素等工業(yè) 。 同時(shí)包含了流入和流出 ， 屬開放系統(tǒng) ， 故變異菌株和雜菌污染隨時(shí)間的延長而增大 。 ? 此法不易染菌 ， 但很難采用控制基質(zhì)等濃度的方法來增大 發(fā)酵生產(chǎn)能力 。 這就叫做電子計(jì)算機(jī)控制發(fā)酵 。 第一步屬有機(jī)酸發(fā)酵或氨基酸發(fā)酵 。 ? f． 通過反饋控制盡量能使重要環(huán)境因子一致 。 ? b． 比較攪拌槳葉頂端速度 。 為此考慮到如何利用發(fā)酵時(shí)生成的二氧化碳引起的液體流動和輔助攪拌 ， 以提高冷卻效率 ， 這只需進(jìn)行發(fā)酵罐傳熱面積的設(shè)計(jì)即可 。為了延長氣泡滯留時(shí)間 ， 可在罐內(nèi)裝擋板產(chǎn)生渦流 。 深層培養(yǎng)基本操作的 3個(gè)控制點(diǎn) ? ① 滅菌：發(fā)酵工業(yè)要求純培養(yǎng) ， 因此在發(fā)酵開始前必須對培養(yǎng)基進(jìn)行加熱滅菌 。 在固體培養(yǎng)中 ， 氧氣是由基質(zhì)粒子間空隙的空氣直接供給微生物 ， 比液體培養(yǎng)時(shí)的用通氣 攪拌供給氧氣節(jié)能 。 (2)固體培養(yǎng) ? 固體培養(yǎng)具有以下優(yōu)點(diǎn)： ①原料：以谷物和農(nóng)業(yè)廢物為主要原料，只需外加適量水分、無機(jī)鹽等。 如醋酸 、 檸檬酸發(fā)酵和曲盤制曲 。 ? 相對于容器內(nèi)培養(yǎng)基體積而言 ， 表面積越大 ， 越易促進(jìn)氧氣由氣液 (氣固界面向培養(yǎng)基內(nèi)傳遞 ， 包括茄子瓶 、 克氏瓶或瓷盤培養(yǎng) 。 搖瓶通氣量大小與搖瓶機(jī)型式 、 轉(zhuǎn)數(shù) 、 振程 (或偏心距 )、 三角瓶容量 、裝料量有關(guān) 。 ? 靜置培養(yǎng)法即將培養(yǎng)基盛于發(fā)酵容器中 ， 在接種后 ， 不通空氣進(jìn)行發(fā)酵 ， 又稱為嫌氣性發(fā)酵 。 ? 接種量和培養(yǎng)物的生長過程的延緩期長短呈反比 。 ? 攪拌可以提高通氣效果 ， 但是過度地劇烈攪拌會導(dǎo)致培養(yǎng)液大量涌泡 ， 容易增加雜菌污染的機(jī)會 ， 液膜表層的酶容易氧 化變性 ， 微生物細(xì)胞也不宜劇烈攪拌 。因此隨著菌體繁殖 ， 呼吸增強(qiáng) ， 必須按菌體的吸氧量加大通氣量 ， 以增加溶解氧的量 。 通風(fēng)和攪拌 ? 通氣可以供給大量的氧 。 ? 一般來說 ， 高碳源培養(yǎng)基傾向于向酸性 pH轉(zhuǎn)移 ， 高氮源培養(yǎng)基傾向于向堿性 pH轉(zhuǎn)移 ，這都跟碳氮比直接有關(guān) 。 ? 發(fā)酵過程中 ， 控制發(fā)酵液的 pH值是控制生產(chǎn)的指標(biāo)之一 ， pH值過高 、 過低都會影響微生物的生長繁殖以及代謝產(chǎn)物的積累 。 溫度 ? 任何微生物的牛長都需要有最適的生長溫度 ， 在此溫度范圍內(nèi)微生物生長繁殖最快 。 這些代用品大多蛋白質(zhì)含量豐富 ， 貸源充足 ， 價(jià)格低廉 ， 便于就地取材 ， 方便運(yùn)輸 。 碳源的代用方向主要是尋找植物淀粉 、 纖維水解物 ， 以廢糖蜜代替淀粉 、糊精和葡萄糖 ， 以工業(yè)葡萄糖代替食用葡萄糖 。 ? 具有設(shè)備簡單 、 投資少 、 易推廣等優(yōu)點(diǎn) 。 ? （ 6） 根據(jù)生產(chǎn)和科學(xué)研究的需要選擇培養(yǎng)基 ? 工業(yè)上 ， 液體深層培養(yǎng)具有占地面積小 、發(fā)酵效率高 、 操作方便 、 易于機(jī)械化相自動化生產(chǎn) 、 降低勞動強(qiáng)度等優(yōu)點(diǎn) 。 ? 在合成培養(yǎng)基上得出一定結(jié)果后 ， 再做復(fù)合培養(yǎng)基試驗(yàn) 。 ? 注意培養(yǎng)過程中的 pH變化 ， 觀察適合于菌種生長繁殖和適合于代謝產(chǎn)物形成的兩種不同 pH，不斷調(diào)整配比來適應(yīng)上述各種情況 。 它們對營養(yǎng)的要求既有共性 ， 也有各自的特性 ，應(yīng)根據(jù)不同類型微生物的生理特性考慮培養(yǎng)基的組成 。 ? 與微生物有關(guān)的維生素主要是 B族維生素 ，這些維生素是各種酶的活性基的組成部分 ， 沒有它們 ， 酶就不能活動 。可分別消毒或逐步補(bǔ)加。 ? 磷： ? 是核酸和蛋白質(zhì)的必要成分，也是 ATP的成分。 ? 無機(jī)元素包括主要元素 (又稱大量元素 )和微量元素兩類 ， 這是依據(jù)微生物對它們需要量的大小劃分的 。 ? （ 4） 水的比熱高 ， 能有效地吸收代謝過程中所放出的熱 ， 使細(xì)胞內(nèi)溫度不致驟然上升 。 ? 實(shí)驗(yàn)室中常用蛋白胨、牛肉膏、酵母膏等作為有機(jī)氮源，工業(yè)生產(chǎn)上常用硫酸銨、尿素、氨水、豆餅粉、花生餅粉、麩皮等原料作氮源。 ? 由于玉米漿的來源不同，加工條件也不同，因此玉米漿的成分有較大波動。 ? 它們在微生物分泌的蛋白酶作用下，水解成氨基酸，被菌體進(jìn)一步分解代謝。 (2)氮素化合物 ? 氮是構(gòu)成微生物細(xì)胞蛋白質(zhì)和核酸的主要元素 ， 而蛋白質(zhì)和核酸是微生物原生質(zhì)的主要組成部分 。來源豐富，價(jià)格比較低廉。 ? 糖蜜：是制糖廠生產(chǎn)糖時(shí)的結(jié)晶母液，是蔗糖廠的副產(chǎn)物。 油酸和亞油酸等高級脂肪酸可被不少放線菌和真菌作為碳源和能源利用 ，低濃度的高級脂肪酸可刺激細(xì)菌生長 ， 但濃度較高時(shí)往往有 毒害作用 。 （ 2） 碳源種類 ? 糖：單糖中的己糖 ， 寡糖中的蔗糖 、 麥芽糖 、 棉子糖 ， 多糖中的淀粉 、 纖維素 、半纖維素 、 甲殼質(zhì)和果膠質(zhì)等 ， 其中淀粉是大多數(shù)微生物都能利用的碳源 。 ? 6. 金屬離子的影響： ? 有些種類的發(fā)酵生產(chǎn)對金屬離子相當(dāng)敏感 ， 因?yàn)橛行┙饘匐x子是中間代謝酶的抑制劑或激活劑 。 只有添加這些物質(zhì)的培養(yǎng)基 ， 才能獲得高產(chǎn) 。 (2)添加誘導(dǎo)物： ? 目前工業(yè)用微生物酶多數(shù)為誘導(dǎo)酶 ， 如蛋白酶 、淀粉酶 、 纖維素酶等 。 ? 硫酸銨中的 SO42與鈣鹽易形成難溶的硫酸鈣 ，因此二者也不宜直接配成培養(yǎng)基 。 ? 2. 還要注意有些營養(yǎng)物質(zhì)被利用后培養(yǎng)基的 pH變化情況 . ? 3. 控制 pH最常用的方法是在培養(yǎng)基中添加具有一定緩沖能力的物質(zhì)作為營養(yǎng)物 ，如以磷酸鹽作為磷的成分；或者避免使用容易產(chǎn)生生理酸性或堿性使培養(yǎng)基 pH波動太大的物質(zhì) 。 ? 3. 主成分與其他成分的配比 。 ? 7)所用原料盡可能減少對發(fā)酵過程中通氣攪拌的影響 ， 利于提高氧的利用率 ，降低能耗 。 ? (3)有利于 提高培養(yǎng)基和產(chǎn)物的濃度 ， 以提高單位容積發(fā)酵罐的生產(chǎn)能力 。 （ 2） 發(fā)酵培養(yǎng)基的各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度應(yīng)盡可能高些 ， 這樣在同等或相近的轉(zhuǎn)化率條件下有利于提高單位容積發(fā)酵罐的利用率 ， 增加經(jīng)濟(jì)效益 。 ? 3. 種子培養(yǎng)基成分還應(yīng)考慮與發(fā)酵培養(yǎng)基的主要成分相近 。 為了使細(xì)胞迅速進(jìn)行分裂或菌絲快速生長 。 有機(jī)氮有利于菌體的生長繁殖 ， 能獲得更多的細(xì)胞 。 ? 選擇培養(yǎng)基：是在培養(yǎng)基內(nèi)加入某種化學(xué)物質(zhì)以抑制不需要菌的生長 ， 而促進(jìn)某種需要菌的生長 。 ? 作用： ? 固體培養(yǎng)基在菌種的分離 、 保藏 、 菌落特征的觀察 、活菌計(jì)數(shù)和鑒定菌種方面是