浙江大學王鏡巖生物化學甲上第09章核酸的生物合成-wenkub.com
2025-01-15 02:05 本頁面
【正文】 ? GTF（ Genaral Transcription Factor） ? TBP(TATAbox binding protein) 是唯一能識別 TATA盒并與其結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子，是三種 RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄時都需要的； ? 不同基因由不同的上游啟動子元件組成，能與不同的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，這些轉(zhuǎn)錄因子通過與基礎的轉(zhuǎn)錄復合體作用而影響轉(zhuǎn)錄的效率。 ? ③增強子要有啟動子才能發(fā)揮作用 ，沒有啟動子存在，增強子不能表現(xiàn)活性。 ? ? ①核心啟動子元件 (core promoter element) 指 RNA聚合酶起始轉(zhuǎn)錄所必需的最小的 DNA序列，包括轉(zhuǎn)錄起始點及其上游－ 25/－ 30bp處的 TATA盒。 真核基因的調(diào)控 ⑤ 翻譯調(diào)節(jié) （ translational control） 真核染色質(zhì)體（ DNA） ① 轉(zhuǎn)錄前調(diào)節(jié) 轉(zhuǎn)錄初級產(chǎn)物 RNA （ Pro－ RNA） hnRNA ③ 轉(zhuǎn)錄后加工的調(diào)節(jié)（ RNA Processing control） ④ 轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)（ RNA transport control） mRNA ⑥ mRNA降解的調(diào)控 mRNA降解物 多肽鏈 ⑦ 翻譯后加工及蛋白質(zhì)活性控制（ protein activity control） 活性蛋白 失活蛋白 ② 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)（ transcription control） ? 順式作用元件 (cis acting elements) 真核基因的順式調(diào)控元件是基因周圍能與特異轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合而影響轉(zhuǎn)錄的 DNA序列。 ? lac操縱子強的誘導作用既需要乳糖存在又需缺乏葡萄糖。 異丙基硫代半乳糖苷（ IPTG）是一種作用極強的誘導劑，不被細菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實驗室廣泛應用。 ? 乳糖操縱子的調(diào)節(jié)機制 ? 色氨酸操縱子的調(diào)節(jié)機制 I－調(diào)節(jié)基因 P－啟動子 O－操作子（操作基因） Z、 Y、 A－三種結(jié)構(gòu)基因 ?阻遏蛋白的負性調(diào)節(jié) 當無誘導物乳糖存在時，調(diào)節(jié)基因編碼的阻遏蛋白（ repressor protein）處于活性狀態(tài)，阻止 RNA聚合酶與啟動基因的結(jié)合，則無法啟動轉(zhuǎn)錄。 。1983年發(fā)現(xiàn) RNase P中的 RNA可催化 tRNA前體的加工。 大腸桿菌 rRNA前體加工 真核生物 rRNA前體加工 ? tRNA前體的加工 ? tRNA前體在 tRNA剪切酶的作用下，切成一定數(shù)量的tRNA分子 ? 3’末端加上 CCA ? 堿基的修飾：甲基化、脫氨和還原作用 ? 真核 mRNA前體的加工 ? 剪接（ Splicing） 去除內(nèi)含子，連接外顯子 ? 5’帽端結(jié)構(gòu)的生成（如圖） ? 3’端多聚 A（ polyA）的附加 六、 RNA的復制合成（ RNA指導的 RNA合成） ?噬菌體 Qβ 的 RNA復制兩階段 （ 1）其單鏈 RNA可充當 mRNA，利用寄主中的核糖體合成 外殼蛋白 和 RNA復制酶的 β 亞基。 甲基化修飾：修飾在堿基上。此過程總稱為 RNA的成熟 或稱為 RNA的轉(zhuǎn)錄后加工。 強終止子： （ 1 ）在終止點之前具有一段富含 GC的回文區(qū)域。所形成的 啟動子、全酶和核苷三磷酸復合物稱為三元起始復合物 ，第一個核苷三磷酸一旦摻入到轉(zhuǎn)錄起始點， σ 亞基就會被釋放脫離核心酶。 β ’ 亞基 ：與 DNA模板結(jié)合功能。 ? 原核 RNA聚合酶 ? 轉(zhuǎn)錄過程 二、原核細胞 RNA轉(zhuǎn)錄合成特點 調(diào)節(jié)基因 啟動子 操縱 基因 lacZ lacY lacA CAP cAMP CAPcAMP 復合物 mRNA + ?半乳糖苷酶 ?半乳糖苷透過酶 ?半乳糖苷乙酰 基轉(zhuǎn)移酶酶 forward 大腸桿菌的 RNA聚合酶 全酶由 5種亞基 α 2ββ ’ ?σ 組成 ， σ 因子與其它部分的結(jié)合不是十分緊密，它易于與 β ’βα 2分離，沒有 σ 、 ?亞基的酶稱為核心酶 —— 只催化鏈的延長，對起始無作用。 編碼鏈 (coding strand)及有意義鏈 (sense strand)： 不作為轉(zhuǎn)錄的另一條 DNA鏈為編碼鏈，又稱有意義鏈。 , 539。 反應體系： DNA模板 ,NTP,酶， Mg2+,Mn2+，合成方向 539。 PCR的主要步驟： ? 模板 DNA的變性 一般選用 95℃ 左右 1min，使 DNA 雙鏈解為單鏈
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