醫(yī)用分子遺傳學(xué)dna復(fù)制-wenkub.com
2025-01-05 06:22 本頁面
【正文】 M13噬菌體 priA,priB,priC識(shí)別起始點(diǎn) 在 DnaT幫助下DnaB,DnaC復(fù)合物結(jié)合形成前引發(fā)體 引發(fā)體 引發(fā)體可沿著DNA鏈移動(dòng)，在合適的位點(diǎn)起始引物 RNA的合成 引發(fā)體的裝配只能在起始點(diǎn)，引物合成可在多處。 真核細(xì)胞（ Yeast） （ 1） ORC（ Origin Recognition Complex） 6個(gè)亞基組成 在真核生物中相當(dāng)保守 特異識(shí)別 ARS （ Autonomously replicating sequence） ORC1p， ORC2p， ORC4p 與 A 元件結(jié)合， ORC5p與 B元件結(jié)合 結(jié)合過程需要 ATP （ 2） Cdc6/Cdc18 （ 3）微染色體支持蛋白（ Minichromosome maintenance proteins， MCMp） 與 DNA發(fā)生周期性的作用，與復(fù)制叉運(yùn)動(dòng)有關(guān)。 真核細(xì)胞（ SV40） ? 真核細(xì)胞 （ SV40） 的 DNA復(fù)制至少需要 6個(gè)蛋白因子參與 。 ? DnaG DNA復(fù)制引發(fā)酶 ， 合成引物 。 ? 起始不是隨機(jī)的，但未發(fā)現(xiàn)起始位點(diǎn)的特征序列。 復(fù)制起始點(diǎn)、復(fù)制子與復(fù)制叉 半保留復(fù)制，必須解決解開雙螺旋的問題。 ? 終止位點(diǎn) 終止復(fù)制的位點(diǎn) ? 每個(gè)細(xì)胞周期啟動(dòng)復(fù)制一次。 當(dāng)引入負(fù)超螺旋 時(shí)需要由 ATP提供能量 , 同復(fù)制有關(guān)。 ? 大腸桿菌的連接酶需 NAD+， 真核細(xì)胞的連接酶需要 ATP。 PCR 與 Taq DNA 聚合酶 Taq DNA聚合酶特性 （ Taq DNA polymerase） 最初由 ?? 性質(zhì) 具有 5’－ 3’聚合酶活性以及依賴于聚合作用的 外切酶活性 ?? 耐熱性 此酶是一種耐熱的依賴于 DNA的 DNA聚合酶 最適反應(yīng)溫度為 72℃ － 80℃ ?? 應(yīng)用 能以高溫變性的靶 DNA分離出來的單鏈 DNA 為模板，進(jìn)行 DNA的體外擴(kuò)增－ PCR反應(yīng)。 RFC：復(fù)制因子 C(Replication Factor C)。 DNA聚合酶 ?的作用 ? DNA聚合酶 ?的 結(jié)構(gòu) ? 多亞基組成： ? P125 大亞基，催化亞基，含聚合酶和 外切酶活性 ? P50 與增殖細(xì)胞核抗原 (PCNA)結(jié)合相關(guān) ? P66 ? P12 DNA聚合酶 ?的 功能 ? 主要 DNA復(fù)制酶： DNA聚合酶活性，延伸 DNA鏈。 3? 5? 3? 5? 解鏈方向 領(lǐng)頭鏈 (leading strand) 后隨鏈 (lagging strand) DNA 聚合酶 polⅠ polⅡ pol Ⅲ 亞基數(shù)目 1 ≥7 ≥10 5 ′→3 ′ 聚合酶活性 + + + 3 ′→5 ′外切酶活性 + + + 5 ′→3 ′外切酶活性 + 聚合速度 (核苷酸 /分 ) 1 0001 200 2 400 15 00060 000 持續(xù)合成能力
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