sds-聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳分離蛋白質(zhì)-wenkub.com
2025-05-09 10:50 本頁面
【正文】 （ 4）加樣時樣品不能超出凹形樣品槽。 加入染色液染色 12 h， 再用脫色液脫色 ，直至蛋白質(zhì)區(qū)帶清晰 ， 即可計算相對遷移率 。 4. 樣品的處理及加樣 將樣品按 –1 mg/mL加樣品溶解液，溶解后，將其轉(zhuǎn)移到帶塞的小離心管中，輕輕蓋上蓋子 (不要塞緊，以免加熱時迸出 )，在 100℃ 沸水浴中加熱3min，取出冷卻后加樣。用 1 mL注射器在凝膠表面沿短玻璃板邊緣輕輕加一層重蒸水 (約 3–4 mm)，用于隔絕空氣，使膠面平整。 (4)將下貯槽的銷孔對準已裝好螺絲銷釘?shù)纳腺A槽 ， 雙手以對角線的方式旋緊螺絲帽 。 因此可以利用 SDSPAGE測定蛋白質(zhì)分子量 。 （ 1） 樣品濃縮效應(yīng) (a)凝膠孔徑不連續(xù)性： (b)緩沖體系離子成分及 pH值的不連續(xù)性； ? 在 前導(dǎo)離子或快離子： HC1解離出的氯根 (C1) 尾隨離子 (trailing ion)或慢離子：甘氨酸根 mcl?clmp?pmG?G(Cl代表氯根 ， P代表蛋白質(zhì) ， G代表甘氨酸根 )有效遷移率 =m?， m為遷移率 ， ?為解離度 ) ? 當進入 ， 甘氨酸解離度增加 ， 其有效遷移率超過蛋白質(zhì)； （ c)電位梯度的不連續(xù)性： (2)分子篩效應(yīng) (3)電荷效應(yīng) 圖 4 電泳過程示意圖 A為電泳前 3層凝膠排列順序， 3層膠中均有快離子，慢離子 B顯示電泳開始后，蛋白質(zhì)樣品夾在快、慢離子之間被濃縮成極窄的區(qū)帶。濃縮膠是由 AP催化聚合而成的大孔膠，凝膠緩沖液為 TrisHC1。 ? 凝膠濃度 (T)的選擇與被分離物質(zhì)分子量密切相關(guān) 。實驗八 SDS－ 聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳分離蛋白質(zhì) 一、目的要求 SDS－聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳分離蛋白質(zhì)技術(shù) 二 、 原理 聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺 (acrylamide，簡稱 Acr)和交聯(lián)劑 N,
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