【正文】 也說明 K+緩沖環(huán)境對著兩種結(jié)構(gòu)識別區(qū)分效果更好，這可能是由于 K+緩沖條件下形成的的 G四鏈體更有利于其與配合物的作用。從圖 44 41 412中可以看出， DNA在 鉀、鈉離子緩沖 溶液中 幾乎沒有 發(fā)光。目 前， G四鏈體被認(rèn)為是潛在的癌癥治療靶標(biāo)。 釕配合物對端粒 G四鏈體與 DNA作用強度的研究 人類的端粒含有重復(fù)銜接的雙鏈 DNA 序列 (5 ′ TTAGGG): (5 ′ CCCTAA)。 共 32 頁 第 23 頁 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 裝 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 訂 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 線 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 0 1 2 3 4 50 .1 5 00 .1 5 50 .1 6 00 .1 6 50 .1 7 00 .1 7 50 .1 8 0IntensityC o n ce n t ra t i o n / u M 圖 45 DNA滴定鉀離子緩沖溶液配合物 1 在 450nm左右的吸收峰滴定趨勢圖， [Ru]=10uM,450nm左右的吸收峰變化是由于 DNA濃度的增加 (從 0,1,2,3,4,5μM)。一般對于雙鏈 DNA 來說，當(dāng)配合物以插入方式進入 DNA 的堿基對時，與堿基對發(fā)生Π 電子堆積效應(yīng)，其Π *空軌道與堿基的Π 電子軌道發(fā)生耦合，能級下降，從而導(dǎo)致Π Π *躍遷能減小，產(chǎn)生紅移現(xiàn)象。 四種配合物在 260280 nm 附近出現(xiàn)較強的吸收峰，在 450 nm 附近出現(xiàn)較弱的的吸收峰，均可歸屬為配體中的Π Π *躍遷， 450 nm 附近的吸收峰對應(yīng)于金屬釕配位體電荷轉(zhuǎn)移（ MLCT）。 300 400 50001absW a v e l e n g t h / n m 配合物 5 u L D N A 1 0 u L D N A 1 5 u L D N A 2 0 u L D N A 2 5 u L D N A 圖 41 鉀離子緩沖溶液配合物 1與端粒 Gquadruplex作用的紫外滴定曲線 , [Ru]=10uM,450nm左右的吸收峰變化是由于 DNA濃度的增加 (從 0,1,2,3,4,5μM)。配合物與兩種端粒 DNA作用后的 LC 峰和 MLCT 峰表現(xiàn)出了明顯的減色效應(yīng)和一定程度的紅移現(xiàn)象，因為DNA 在可見光區(qū)沒有吸收，推測配合物 2在 K+、 Na+緩沖溶液環(huán)境中都能與 G四鏈體發(fā)生某種相互作用。這種現(xiàn)象的產(chǎn)生往往來源于小分子配合物發(fā)色團與 DNA 堿基電子云的強烈相互作用。 配合物與 G四鏈體作用的熒光光譜滴定 在樣品池中加入 1950uL 的緩沖溶液以及 50uLDNA儲備液，測定溶液在 620nm（ 440nm激發(fā)）處發(fā)光強度，隨后樣品池中每次加入 10uL 濃 度為 200uM的配合物 2 溶液，用移液槍反復(fù)吸吐，混勻， 5 分鐘后檢測熒光情況，如此反復(fù)，滴加 10 次。 濃度確定：用紫外分光光度計測量 DNA 在 260nm 的吸光度值 A260。 2） 富 G 四螺旋 DNA 共 32 頁 第 19 頁 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 裝 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 訂 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 線 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 取兩份一定質(zhì)量富 G 單鏈 DNA（核苷酸序列為 539。用乙醇、乙醚洗滌干燥，得到 咖啡色 固體 ，產(chǎn)率 81%。過濾，用水洗滌，去掉未反應(yīng)的 K2PtCl4，然后用少量乙醇、乙醚洗滌并進行干燥。 鉑配合物的合成 對于鉑配合物的合成，設(shè)計了如下 一 種，并對其進行了合成。繼續(xù)回流 1 小時后停止反應(yīng)，趁熱過濾，旋蒸濃縮濾液，再加入過量的石油醚后析出黃色固體，抽濾后用石油醚洗滌濾餅 真空干燥。產(chǎn)率 87%。 本文設(shè)計合成得出了鉑配合物 [(ptap)Pt(en)](PF6)2，通過核磁、質(zhì)譜表征方法證明為此種配合物。 此外，還有 pH 滴定、 熱力學(xué)方法和電化學(xué)方法等，不過這些方法在研究小分子化合物與DNA 鍵合機理方面不太常用。 在確定小分子化合物與 DNA 作用模式方面，流體力學(xué)方法 (如粘度 [53]，沉降速度及在凝膠中的泳動速度等 )有其獨特的應(yīng)用。當(dāng)配合物與 DNA 以插入方式作用時， DNA 熔化溫度 (Tm)變化最 大。 利用圓二色譜儀同時可以做熱變性的實驗。 G四鏈體或 Imotif 結(jié)構(gòu)在圓二色譜中有著特殊的峰結(jié)構(gòu)：平行型 G四鏈體在 265nm 附近有正的最大吸收峰， 240nm 附近有負(fù)的最大吸收峰；反平行型的 G四鏈體在 295nm 附近有最大正吸收峰，260nm 有最大負(fù)吸收峰；混合式的 G四鏈體構(gòu)型則包括了 290nm 附近的正吸收以及特征的265nm 附近的肩峰。熒光物質(zhì)在激發(fā)光的激發(fā)下，由基態(tài)躍遷到較高的能級 (激發(fā)態(tài) )后，首先通過內(nèi)轉(zhuǎn)換過程消耗一部分能量，回到第一電子激發(fā)態(tài)的最低振動能級，同時以光量子的形式發(fā)射能量，即為熒光。一般來說，結(jié)構(gòu)越有序，吸收值越低。配合物與 DNA 結(jié)合后，使合物所處的環(huán)境發(fā)生改變，吸收光譜波長和吸收強度發(fā)生變化，配合物與 DNA 作用方式不同，則波長和吸收強度變化不同。外部堆積模式來有許多結(jié)構(gòu)特點來維持整個分子能量穩(wěn)定，末端 G四分體更容易與配體形成共軛結(jié)構(gòu) ， 結(jié)合位點較易識別 ， 動力學(xué)穩(wěn)定 ， 化合物的作用模式更傾向于外部堆積模式。 即小分子配體插入到兩個 G四 鏈 體之間 ； 3) 非特異結(jié)合模式。分子模擬顯示 ， 配體可以非共價鍵結(jié)合形式堆積在末端 G四分體上 ， 結(jié)合在溝上、環(huán)上或插入兩個 G四分體平面之間。 主要做了以下工作： （ 1） 合成配體 dpqdf。 G四螺旋結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定劑或 G四螺旋形成誘導(dǎo)劑的優(yōu)勢在于 G四螺旋結(jié)構(gòu)具有特異性，故具備更強的選擇性，從而大大降低了傳統(tǒng)化療藥物的毒性。 由此說明端粒酶與細胞的惡性轉(zhuǎn)化及維持分裂增殖具有密切的關(guān)系。在胚胎發(fā)育期，端粒酶的活性很高，而在成熟體細胞中端粒酶的活性則會被關(guān)閉，以此來調(diào)控細胞的生長、分化和衰老。而端粒的長短可由端粒酶調(diào)節(jié)。正是由于這個閉合結(jié)構(gòu)，端粒顯現(xiàn)出了對于染色體的穩(wěn)定及其基因組的完整非常重要的作用，它為染色體末端提供保護性，防止染色體互相融合、重組及一些外切酶、連接酶的作用，防止 DNA的損傷，并計數(shù)在線性 DNA復(fù)制時出現(xiàn)的末端 DNA片斷的丟失。不同物種的端粒 DNA序列存在差異，但都以富含鳥嘌呤 (G)的重復(fù)序列為特征。它是染色體末端的一種特殊結(jié)構(gòu)，能防止染色體 DNA 降解、末端融合、缺失及非正常重組維持染色體的完整和穩(wěn)定，并保證細胞正常分化。大量研究表明含不同 G 序列所形成的四螺旋結(jié)構(gòu)是不 同的，即使是相同的序列也可以按不同的方式進行組裝。四鏈體四鏈體之間通過 ππ作用相互堆積結(jié)合在一起。在4條鏈中相應(yīng)的的 G之間形成的四分體平面層層堆疊，就形成一段極其穩(wěn)定的四鏈體 DNA結(jié)構(gòu) （見圖 17） 。此外， G四鏈體結(jié)構(gòu)作為一種特殊的 DNA二 級結(jié)構(gòu)，與普通雙鏈具有顯著的結(jié)構(gòu)差異，可以成為藥物選擇性識別的靶點。 形成三螺旋 DNA的第三條鏈的抗酶括性、水溶性、脂溶性和毒副作用等因素直接影響其作為治療藥物的可能性。 它 是指 DNA中單鏈與雙鏈、雙鏈之 間的相互作用形成的三鏈或四鏈結(jié)構(gòu) ，由 DNA雙螺旋進一步扭曲，包括線狀雙鏈中間可能有的扭結(jié)和超螺旋、多重螺旋及環(huán)狀DNA中諸如超螺旋和連環(huán)之類的各種拓?fù)鋵W(xué)狀態(tài)。 雙鏈 DNA 的構(gòu)象與其核苷酸序列和堿基組成有密切關(guān)系。 DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)是 DNA二級結(jié)構(gòu)的一種重要形式，它 是指兩條脫氧多核苷酸鏈反向平行盤繞所形成的雙螺旋結(jié)構(gòu)。 堿基間遵循堿基互補配對原則，即腺嘌呤 (A)一定與胸腺嘧啶 (T)配對，鳥嘌呤 (G)一定與胞嘧啶 (C)配對。 RNA 主要由含腺嘌呤 (A)、鳥嘌呤 (G)、胞嘧啶 (C)和尿嘧啶 (U)的核苷酸構(gòu)成 。單個核苷酸是由堿基、戊糖和磷酸三部分構(gòu)成的。 研究發(fā)現(xiàn)，端粒酶能保證端麗的正常復(fù)制。 端粒是真核細胞染色體末端富含鳥嘌呤的 DNA 重復(fù)序列及一些結(jié) 合蛋白組成的特殊結(jié)構(gòu)。 生物體內(nèi)核酸常與蛋白質(zhì)結(jié)合形成核蛋白。第三代鉑類代表化合物樂鉑 （ 結(jié)構(gòu)如圖 ） ， 樂鉑全稱是環(huán)丁烷乳酸鹽二甲胺合鉑 (Ⅱ )， 研究表明 ， 該藥的抗腫瘤效果與順鉑、卡鉑的作用相當(dāng)或者更好 ， 毒性作用與卡鉑相同 ， 且與順鉑無交叉耐藥。順鉑和卡鉑所獲得的成就極大地鼓舞了各國學(xué)者積極研究更好、更有效的鉑類抗癌新藥。 除此 此外，鉑化合物也有希望 用來 診斷一些疾病。 金屬鉑抗癌藥物的發(fā)展 自 1967年美國密執(zhí)安州立大學(xué)教授 Rosenberg Camp ， 經(jīng)過30多年的發(fā)展 ， 鉑類金屬抗癌藥物的合成應(yīng)用和研究得到了迅速的發(fā)展。目前非鉑系金屬抗腫瘤藥物研究主要集中在釕、銠、錫、鍺等金屬配合物，特別是釕配合物。從此以后，金屬藥物及其抗腫瘤機理成為人們關(guān)注的 研究 熱 點。 釕配合物對端粒 G四鏈體的選擇識別研究 ........................................ 錯誤 !未定義書簽。 3 實驗部分 .......................................................................................................................... 14 引言 ........................................................................................................................... 14 藥品和儀器 ................................................................................................................. 15 實驗試劑 ............................................................................ 錯誤 !未定義書簽。 Application of Bjerrum Function in Determination of Stability Constants 【 Abstract】 Cancer is a mon and frequentlyoccurring diseases seriously threatening human health and life, which has bee the second largest human death cause. Since cisplatin was found having anticancer activity in 1967, after 30 years of development, the synthetic applications and research of metal anticancer drugs of platinum obtained a rapid development. At the same time, the research of the reaction betwwen drugs and DNA is one of the most inportant issues in the process of discovery and development of drugs. Gquadruplex is rich in guanine bases of DNA which formed through the hydrogen bonding interaction of the formation of the four chain spiral structure. This structure can inhibit the telomerase activity effectively, hinder telomerase to telomere DNA primers recognition, and make normal cell apoptosis, so as to achieve antitumor purpose. In recent years, the Gquadruplex target cancer drug research has attracted widespread attention. This pa