微生物研究進(jìn)展chapter5分子生態(tài)學(xué)方法在環(huán)境微生物研究領(lǐng)域的應(yīng)用-資料下載頁(yè)
2024-12-28 22:52本頁(yè)面
【正文】 利用不同序列結(jié)構(gòu)的 DNA，雙鏈 具有不同的熔點(diǎn)溫度 Tm 同上 同上 SSCP 長(zhǎng)度相同但 序列不同的單鏈 DNA具有空間構(gòu) 象上的差異 操作比較簡(jiǎn)便 價(jià)格低廉 靈敏度和重現(xiàn)度差，150～ 400bp最佳 的分離效果 ARDRA 16S rDNA序列的差異， 限制性核酸內(nèi)切酶酶切 后將得到長(zhǎng)度與數(shù)量 不同的 DNA片段 分辨率高 對(duì)圖譜進(jìn)行定量化解析和進(jìn)行群落 間的比較都十分困難 T RFLP PCR擴(kuò)增中所用引物的一端或兩端帶有 熒光 標(biāo)記 方便快捷 分辨率高 靈敏度高 復(fù)雜群落多樣性的低估、 影響因素多、 無(wú)法對(duì)微生物定性分析 RISA 核糖體區(qū)間序列多態(tài)性 操作簡(jiǎn)單、序 列多態(tài)性豐富 核糖體的拷貝數(shù)的不同 會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性 分析 方法 方法 類(lèi)別 原理 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn) 分子 雜交 核酸 探針 雜交 DNA的變性、復(fù)性及其 在復(fù)性過(guò)程中的堿基 配對(duì)原則、探針與 靶分子的特異性結(jié)合 過(guò)程簡(jiǎn)單 避免 PCR偏差 影響雜交分析結(jié)果的 因素復(fù)雜， 只能用來(lái) 檢測(cè)事先已知其目標(biāo) 基因序列的微生物 FISH 人工合成的熒光或放射性標(biāo)記探針與微生 物基因組雜交 操作簡(jiǎn)單， 可原位檢測(cè) ， 檢測(cè)靈敏度高 只能對(duì)特定類(lèi)群的 微生物進(jìn)行研究 其它 分子 生物 學(xué) 方法 RFLP 序列差異引起限制性?xún)?nèi)切酶 酶切位點(diǎn) 的差異 信息量大 重復(fù)性高 周期長(zhǎng)，過(guò)程繁瑣 RAPD 利用隨意設(shè)計(jì)的 非特異引物 簡(jiǎn)單、迅速 重復(fù)性低 ERIC 腸桿菌基因間重復(fù)共有序列在不同種屬或 者同屬的不同種微生物之間的拷貝數(shù)和定 位的差異引起兩個(gè) ERIC之間序列的多態(tài)性 結(jié)果穩(wěn)定 重復(fù)性好 靈敏度高 PCR反應(yīng)本身的擴(kuò)增和 偏差可能會(huì)產(chǎn)生假 陽(yáng)性， 不能對(duì)群落中 感興趣的菌進(jìn)一步研究 三、展望 使用微生物分子生態(tài)學(xué)方法，繞過(guò)了純培養(yǎng)的瓶頸，可以 普遍的、定量的、系統(tǒng)的 描述微生物的多樣性，從而能夠以 相對(duì)無(wú)偏見(jiàn)的方式 了解環(huán)境中的微生物及其生態(tài)系統(tǒng)。 存在的問(wèn)題： ? 環(huán)境樣品在提取核酸前 ,無(wú)論是厭氧或是室溫存放， 樣品 中的微生物仍不可避免的發(fā)生一些變化 。 ? 每次提取 DNA的效率不同 ,影響結(jié)果的 重復(fù)性 。 ? 提取核酸時(shí) , 細(xì)胞的裂解程度不均一 。 ? 引物對(duì)樣品中不同微生物核酸擴(kuò)增效率 不同 。 ? 在真核微生物生態(tài)學(xué)的分析上還是比較少 。 現(xiàn)在，微生物分子生態(tài)學(xué)研究已經(jīng)超越了 單純說(shuō)明環(huán)境微生物群落結(jié)構(gòu) 的階段； 重心轉(zhuǎn)移到了 群落功能方面 的研究，一方面要求 深入挖掘已有方法的潛力 ，另一方面也 嘗試著多種方法的聯(lián)合 ， 最終分析清楚各種微生物在生態(tài)系統(tǒng)中發(fā)揮的作用 ， 將微生物群落結(jié)構(gòu)和群落功能聯(lián)系起來(lái) 。 這也是微生物分子生態(tài)學(xué)研究的 最終目的 。 謝謝觀看 /歡迎下載 BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAIT
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