核苷酸與核酸-資料下載頁
2025-07-19 20:16本頁面
【正文】 核酸是兩性化合物 ? 互變異構(gòu) ? 堿基在體液環(huán)境中以堿性解離為主 ? 核酸分子是酸性化合物 ? 酮式－烯醇 ? 氨基－亞氨基 61 共軛雙鍵 ? 260nm波長的紫外吸收強(qiáng)。 ? 核酸的紫外吸收（ A260） ? 單核苷酸 〉 ssDNA（或 RNA） 〉 dsDNA 62 1. quantification A260= 50μg/ml雙鏈 DNA 40μg/ml單鏈 DNA（或 RNA） 20μg/ml寡核苷酸 2. Judgement of the purity DNA: A260/A280 = RNA: A260/A280 = A260 Application 63 Denaturation ? 雙鏈分開和重新形成雙鏈這樣的過程稱為變性和復(fù)性。 ? 破壞氫鍵形成的因素都可能使 DNA變性，如過量的酸、堿或加熱。 64 The process of denaturation 65 Hyper and hypochromic effects ? 單核苷酸 單鏈 DNA雙鏈 DNA ? DNA變性，使溶液 A260增高，稱為增色效應(yīng)。 ? 在解鏈曲線中的中點(diǎn)稱為中點(diǎn)解鏈溫度，或解鏈溫度 (Tm)。 ? 變性和復(fù)性是可逆的。 66 melting temperature, Tm ? Tm： 變性是在一個(gè)相當(dāng)窄的溫度范圍內(nèi)完成，在這一范圍內(nèi)，紫外光吸收值達(dá)到最大值的 50%時(shí)的溫度稱為 DNA的解鏈溫度，又稱融解溫度 (影響因素 ： – 1． DNA均一性決定熔解溫度范圍大??； – 2． GC堿基對含量決定熔解溫度高低； – 3．介質(zhì)中的離子強(qiáng)度影響變性。 67 68 DNA renaturation ? DNA – Recovery of the double helix 性。 – The process of DNA renaturation after heated denaturation. 退火 (annealing) 。 ? 減色效應(yīng) Hypochromic affect – DNA復(fù)性時(shí)，其溶液 A260降低。 69 hybridization ? 雜交：不同的 DNA鏈放在同一溶液中作變性處理，或把單鏈 DNA和 RNA放在一起，局部的堿基配對，就可以形成局部雙鏈， 在不同的分子間形成雜化雙鏈（ heteroduplex）。 ? 這種雜化雙鏈可以在不同的 DNA與 DNA之間形成，也可以在 DNA和 RNA分子之間或者 RNA和RNA分子之間形成。 這一過程稱為 核酸分子雜交 。 70 Probe ? 探針： a kind of technology used for detection and probing certain nucleotide sequence. ? Labeled single oligonucleotide chain 71 Nuclease digests nucleic acids. ?DNA酶 (deoxyribonuclease, DNase)： 專一降解 DNA。 ?RNA酶 (ribonuclease, RNase)： 專一降解 RNA。 72 Nuclease 核酸內(nèi)切酶： 分為限制性核酸內(nèi)切酶和非特異性限制性核酸內(nèi)切酶。 核酸外切酶： 5?→3 ?或 3?→5 ?核酸外切酶。
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