小鼠腎臟細胞系的建立doc-資料下載頁
2025-07-18 02:32本頁面
【正文】 測定有細胞計數(shù)法、四挫鹽比色實驗和CCK8試劑盒檢測法這三種方法。這里采用MTT來進行測量?；驹硎腔罴毎€粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性的MTT還原為難溶性的藍紫色結(jié)晶物并沉淀在細胞中，而死細胞無此功能。然后用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接放映活細胞數(shù)量。3） 細胞分裂指數(shù):分列指數(shù)是指細胞群體中分裂細胞所占的百分比。一般要觀察和計算1000個細胞中的細胞分裂相數(shù)。獲得分裂相數(shù)后可以繪制細胞分裂指數(shù)曲線。4） 細胞接種存活率：當細胞被制成分散的懸液后，接種到底物上能貼壁并能存活生長的細胞百分數(shù)值稱為接種存活率，用以表示細胞群的活力。細胞接種存活率=（貼壁存活細胞數(shù)/接種細胞數(shù)）100%5） 細胞周期：選擇對數(shù)生長期細胞，用消化法制成細胞懸液，使細胞成為單個細胞，不能成團。然后根據(jù)流式細胞儀的檢測步驟進行操作。最后計算出細胞周期。6） 細胞活力的檢測：細胞損傷或死亡時，某些染料可穿破透變性的細胞膜，與解體的DNA結(jié)合而著色。借此鑒別死細胞與活細胞。7） 細胞種屬的鑒定：可以用熒光抗體染色鑒別、同工酶譜系鑒別。然后進行染色體分析，人主要組織相溶性抗原，和核酸技術(shù)來鑒定和培養(yǎng)細胞中等位基因的多態(tài)性。細胞在70℃以下時，酶活性降低，代謝處于完全停止狀態(tài)，故可以長期保存。細胞低溫保存的關(guān)鍵在于通過200℃階段的冷凍過程。在此范圍內(nèi)，易造成細胞的嚴重損傷。如果不加任何保護劑，細胞內(nèi)外的水分很快會形成冰晶，導致細胞內(nèi)電解質(zhì)濃度增高，pH改變，部分蛋白質(zhì)變性從而造成細胞死亡。一般添加兩大類保護劑：一種是滲透性保護劑，如甘、二甲基亞砜、葡萄糖等，第二種是非滲透性保護劑如乳糖、蔗糖、麥芽糖等。主要過程是將對數(shù)期細胞以等體積20%培養(yǎng)液重懸，并分裝于冷凍管中，封口，然后降溫至4℃30min，冰盒10min，液氮罐氣相2h，最后投入液氮中保存。由于凍存細胞比較脆弱，要輕柔操作，融化要快速，解凍后直接加入完全生長培養(yǎng)基。這里采用直接鋪板法。取出凍存細胞，37℃水浴中快速融化，移入完全生長培養(yǎng)基，進行活細胞計數(shù)，細胞接種密度為3105個/mL。培養(yǎng)12到24小時，更換新鮮的培養(yǎng)基，以去除凍存劑。四．注意事項1） .配制溶液時必須用新鮮的蒸餾水。2） ，并且要特別注意濾膜光面朝上。3） 配制RPMI1640培養(yǎng)基時因為還要加入小牛血清，而小牛血清略偏酸性。4） 在引頸殺死小鼠的時候，要注意手的位置與方法，以免被老鼠咬到。如果被咬，要及時報告給老師，以盡快的進行疫苗注射。5） 在用手術(shù)剪刀等鋒利器具時要注意，以免被割傷。6） 在對實驗室及實驗器具進行消毒的時候，要小心使用有腐蝕性的液體，必要時帶上手套。7） 在細胞培養(yǎng)的時候，要注意所加試劑的用量等，以免損傷細胞。
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