【導讀】成、藥理與臨床都進行了大量的研究工作。據(jù)報道，槲皮素具有祛痰、止咳、平。9O年代初以來，有關槲皮素的抗血小板聚集和抗腫瘤等作用的研究，取得。了良好進展并獲得了滿意的結果；而槲皮素新的衍生物研究同樣引人矚目。槲皮素結構中具有的5個羥基進行烴化反應后可獲得一系列的衍生物，據(jù)報道，一o-葡萄糖苷，具有抗氧化和抗癌作用的槲皮素與稀土金屬組成的配合物。它是強有力的腫瘤多藥耐藥的逆轉劑。由于其毒副作用低，所以具有廣泛的應用。件，并希望能夠獲得有用產(chǎn)品。成產(chǎn)物進行分離、分析，進一步確定產(chǎn)物結構。，檢測反應進行，驗證反應可行；，分析原因并改進；世界上很多科學研究者都對槲皮素進行了研究，發(fā)現(xiàn)其生物學活性和藥理。為了開發(fā)槲皮素更高的價值，提升其生物活性，科學家們對槲皮素進行。合物，對其進行合成7位羥基取代的含氮原子的槲皮素衍生物。氮雜原子類槲皮素衍生物。

　　

【正文】 3a. 3,5,3’ ,4’ 四羥基 7[4(二乙胺基 )丁氧基 ]黃酮（ 3b）的合成 1mmol 3b 原點 槲皮素 1 點 2 點 4 點原料點 3 點 混合物原點 取 2mmol（ ） 產(chǎn)物 3a，加入 10ml無水 DMF溶解，稱取 （ 1mmol）槲皮素 ,(1mmol)無水 K2CO3,分別加入 DMF溶液中，油浴 80℃下反應 2h，通冷卻水回流。 TLC點樣檢測反 應程度， TLC所用展開劑為 甲苯：乙酸乙酯：甲酸 =5:2:1 由 TLC點板可知，第二步有機反應不完全，延續(xù)反應，反應 18h后，仍不完全反應，反應轉化率低且反應有副反應產(chǎn)物存在，需要進行產(chǎn)品分離提純。 將反應混合物蒸干，加入丙酮溶解，然后通過減壓抽濾，除去不溶物，待丙酮溶劑揮發(fā)后，得反應產(chǎn)品混合物 3B。 反應混合物分離 硅膠層析柱分離法： 層析柱規(guī)格：（內徑 外徑）Ｘ長度 （ 1318）Ｘ 500（ mm） 清洗收集瓶，即 250ml錐形瓶 8個； ① 配制洗脫液 500ml,洗脫液配置比例為 甲苯：乙酸乙酯：甲酸 =10:2:1 ； ② 拌樣：將產(chǎn)物 3B溶于 5ml丙酮溶劑中，完全溶解后加入兩勺硅膠（約 ），攪拌均勻后，蒸干丙酮溶劑。 ③ 裝柱及上樣：稱取 20g硅膠至于 250ml燒杯中，加入其兩倍體積的已配好的層析液，攪拌均勻，濕法裝柱。然后裝樣，將拌好的樣品均勻倒入層析柱中，其上 1cm出塞入脫脂棉保護，免受洗脫液沖擊。 ④ 用洗凈的收集瓶接出不同色帶的物質，編號，待測。 同樣以洗脫順序編號，依次為： 31,32,33， 34,35 四、 3,5,3’ ,4’ 四羥基 7[4(二正丙胺基 )乙氧 基 ]黃酮（ 4b）的合成及分離 1溴乙基 二正丙胺 3ml 3ml 4a 二正丙胺 3ml()與 3ml（ ）的 1,2— 二溴乙烷 溶于 10mlDMF溶液中 在 80℃油浴加熱回流條件下反應 3h， 要攪拌。反應結束后 ，向反應混合物1 點 2 點 5 點原料點 3 點 4 點 原點 槲皮素 3B 混合物 中加入適量的蒸餾水，搖勻后無不容固體，靜置分層，分液取水層，然后滴加6mol/LNaOH溶液進行堿化，調 PH9— 11，再用乙醚萃取，保留乙醚層， 加入少量蒸餾水，進行二次萃取，保留乙醚層，蒸干乙醚溶劑，得產(chǎn)物， 留樣。編號 4a. 3,5,3’ ,4’ 四羥基 7[4(二正丙胺基 )乙氧基 ]黃酮（ 4b）的合成 4b 取 2mmol()產(chǎn)物 4a，加入 10ml無水 DMF溶解，稱取 （ 1mmol）槲皮素 ,(1mmol)無水 K2CO3,分別加入 DMF溶液中，油浴 80℃下反應 2h，通冷卻水回流。 TLC點樣檢測反應程度， TLC所用展開劑為 甲苯：乙酸乙酯：甲酸 =5:2:1 由 TLC點板可知，第二步有機反應不完全，延續(xù)反應，反應 8h后，仍不完全反應，且 反應有副反應產(chǎn)物存在，需要進行產(chǎn)品分離提純。 將反應混合物蒸干，加入丙酮溶解，然后通過減壓抽濾，除去不溶物，待丙酮溶劑揮發(fā)后，得反應產(chǎn)品混合物 4B。 反應混合物分離 硅膠層析柱分離法： 層析柱規(guī)格：（內徑 外徑）Ｘ長度 （ 2025）Ｘ 500（ mm） 清洗收集瓶，即 250ml錐形瓶 6個； ① 配制洗脫液 500ml,洗脫液配置比例為 甲苯：乙酸乙酯：甲酸 =10:2:1 ； ② 拌樣：將產(chǎn)物 3B溶于 5ml丙酮溶劑中，完全溶解后加入兩勺 硅膠（約 ），攪拌均勻后，蒸干丙酮溶劑。 ③ 裝柱及上樣：稱取 20g硅膠至于 250ml燒杯中，加入其兩倍體積的已配好的層析液，攪拌均勻，濕法裝柱。然后裝樣，將拌好的樣品均勻倒入層析柱中，其上 1cm出塞入脫脂棉保護，免受洗脫液沖擊。 ④ 用洗凈的收集瓶接出不同色帶的物質，編號，待測。 同樣以洗脫順序編號，依次為： 41,42,43， 44 1 點 2 點 3 點 4 點 原料 原點 槲皮素 4B 混合物 五、 3,5,3’ ,4’ 四羥基 7[4(二正丙胺基 )丙氧基 ]黃酮（ 5b）的合成及分離 1溴三正丙胺 3ml 4ml 5a 二正丙胺 3ml()與 4ml（ ）的 1,3— 二溴丙烷 溶于 10mlDMF溶液中， 在 90℃油浴加熱回流條件下反應 3h，攪拌。反應結束后，向反應混合物中加入適量的蒸餾水，搖勻后無不容固體，靜置分層，分液取水層，然后滴加6mol/LNaOH溶液進行堿化，調 PH9— 11，再用乙醚萃取，保留乙醚層，加入少量蒸餾水，進行二次萃取，保留乙醚層，蒸干乙醚溶劑，得產(chǎn)物。留樣。編號 5a. 3,5,3’ ,4’ 四羥基 7[4(二正丙胺基 )丙 氧基 ]黃酮（ 5b）的合成 5b 取 2mmol()產(chǎn)物 5a，加入 10ml無水 DMF溶解，稱取 （ 1mmol）槲皮素 ,(1mmol)無水 K2CO3,分別加入 DMF溶液中，油浴 80℃下反應 2h，通冷凝回流。 TLC點樣檢測反應程度， TLC所用展開劑為 甲苯：乙酸乙酯：甲酸 =5:2:1 由 TLC點板可知，第二步有機反應不完全，延續(xù)反應，反應 5h后，仍不完全反應，且反應有副反應產(chǎn)物存在，需要進行產(chǎn)品分離提純。 將反應混合物蒸干，加入丙酮溶解，然后通過減壓抽濾，除去不溶物，待丙酮溶劑揮發(fā)后，得 反應產(chǎn)品混合物 5B。 反應混合物分離 硅膠層析柱分離法： 層析柱規(guī)格：（內徑 外徑）Ｘ長度 1 點 2 點 3 點 4 點 原料點 5B 混合物 槲皮素 （ 2025） Ｘ 500（ mm） 清洗收集瓶，即 250ml錐形瓶 6個； ① 配制洗脫液 500ml,洗脫液配置比例為 甲苯：乙酸乙酯：甲酸 =10:2:1 ； ② 拌樣：將產(chǎn)物 3B溶于 5ml丙酮溶劑中，完全溶解后加入兩勺硅膠（約 ），攪拌均勻后，蒸干丙酮溶劑。 ③ 裝柱及上樣：稱取 20g硅膠至于 250ml燒杯中，加入其兩倍體積的已配好的層析液，攪拌均勻，濕法裝柱。然后裝樣，將拌好的樣品均勻倒入層析 柱中，其上 1cm出塞入脫脂棉保護，免受洗脫液沖擊。 ④ 用洗凈的收集瓶接出不同色帶的物質，編號，待測。 同樣以洗脫順序編號，依次為： 51,52,53， 54 六、 3,5,3’ ,4’ 四羥基 7[4(二正丙胺基 )丁氧基 ]黃酮（ 6b）的合成及分離 1二正丙胺基 4溴丁烷 3 ml 4ml 1a 二正丙胺 3ml()與 4ml（ 34mmol）的 1,4— 二溴丁烷在 80℃油浴加熱回流條件下 ,以 10mlDMF為溶劑，攪拌 反應 3h。反應結束后，向反應混合物中加入適量的蒸餾水，搖勻后無不容固體，靜置分層，分液取水層，然后滴加6mol/LNaOH溶液進行堿化，調 PH9— 11，再用乙醚萃取，保留乙醚層，加入少量蒸餾水，進行二次萃取，保留乙醚層，蒸干乙醚溶劑，得產(chǎn)物。留樣。編號 6a. 3,5,3’ ,4’ 四羥基 7[4(二正丙胺基 )丁氧基 ]黃酮（ 6b）的合成 6b 取 5mmol產(chǎn)物 6a，加入 10ml無水 DMF溶解，稱取 （ 1mmol） 槲皮素 ,()無水 K2CO3,分別加入 DMF溶液中，油浴 80℃下反應 2h，通冷卻水回流。 TLC點樣檢測反應程度， TLC所用展開劑為 甲苯：乙酸乙酯：甲酸 =5:2:1 由 TLC點板可知，第二步有機反應不完全，延續(xù)反應，反應 5h后，仍不完全反應，且反應有副反應產(chǎn)物存在，需要進行產(chǎn)品分離提純。 將反應混合物蒸干，加入丙酮溶解，然后通過減壓抽濾，除去不溶物，待丙酮溶劑揮發(fā)后，得反應產(chǎn)品混合物 6B。 反應混合物分離 硅膠層析柱分離法： 層析柱規(guī)格：（內徑 外徑）Ｘ長度 （ 2025）Ｘ 500（ mm） 清洗收集瓶，即 250ml錐形瓶 6個； ① 配制洗脫液 500ml,洗脫液配置比例為 甲苯：乙酸乙酯：甲酸 =10:2:1 ； ② 拌樣：將產(chǎn)物 3B溶于 5ml丙酮溶劑中，完全溶解后加入兩勺硅膠（約 ），攪拌均勻后，蒸干丙酮溶劑。 ③ 裝柱及上樣：稱取 20g硅膠至于 250ml燒杯中，加入其兩倍體積的已配好的層析液，攪拌均勻，濕法裝柱。然后裝樣，將拌好的樣品均勻倒入層析柱中，其上 1cm出塞入脫脂棉保護，免受洗脫液沖擊。 ④ 用洗凈的收集瓶接出不同色帶的物質，編號，待測。 同樣以洗脫順 序編號，依次為： 61,62,63， 64 參考文獻 [1] 杜斌 , 張振中 . 現(xiàn)代色譜技術 . 鄭州：河南醫(yī)科大學出版 ,2020:116126 [2] 楊義芳 , 孔德云 . 中藥提取分離新技術 .(華夏英才學術文庫 .). 北京：化學工業(yè)出版社 ,2020,12:151153 第四節(jié) 實驗結果分析 指導老師將樣品寄到有條件的學校幫助打譜分析，經(jīng)過紅外分析，質譜分析，樣品不純，無法得出具體化合物，現(xiàn)就產(chǎn)品不純與產(chǎn)率低做一些分析： 一、 中間產(chǎn)物 脂肪胺的堿性 ：仲胺 伯胺、叔胺 氨與胺都屬于親核試劑， 能與鹵代烴發(fā)生親核性取代反應，通常是 SN2 機理反應 。伯胺與伯鹵代烴反應生成仲胺鹽，仲胺鹽與原料伯胺會發(fā)生迅速的質子轉移，釋放出 仲胺就會與鹵代烴反應，生成叔胺鹽。叔胺鹽又會重復上述過程，最終生成季銨鹽。所以，胺與鹵代烴之間的烴基化反應很難停留在生成仲胺或叔胺，通常會得到幾種胺或其鹽的混合物 ，試驗中過量的伯鹵代烴，主要產(chǎn)物可能為季銨鹽。 1 點 2 點 3 點 4 點 5 點 原料點 6B 混合物 槲皮 素 RNH2 + R’X RN+H2R’X RNHR’ + RNH3+X RNH2 RNHR’ + R’X RN+HR’2X RNH2 RNR’2 + RNH3+X RNR’2 + R’X RN+R’3X