【正文】 菌3注：表中同列數(shù)據(jù)比較結(jié)果以下標(biāo)字母(小寫字母)表示，同行數(shù)據(jù)比較結(jié)果以上標(biāo)字母(大字字母)表示，字母相同表示差異不顯著(p)，字母不相同表示差異顯著(p)。 不同實(shí)驗(yàn)組亞硝酸鹽含量的變化不同實(shí)驗(yàn)組亞硝酸鹽含量的變化結(jié)果見(jiàn)圖25，并根據(jù)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行LSD多重比較，結(jié)果見(jiàn)表28。亞硝酸鹽（NO2N）是氨轉(zhuǎn)化為硝酸鹽過(guò)程中的中間產(chǎn)物，對(duì)魚苗有較強(qiáng)的毒性，是育苗水體中誘發(fā)暴發(fā)性疾病的重要因素。從測(cè)定結(jié)果得出：①不同實(shí)驗(yàn)組的NO2N含量的總變化趨勢(shì)基本上是隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的推移而增加。②在育苗的前兩周，三個(gè)組間的NO2N含量無(wú)顯著差異；從第13d開始，表現(xiàn)出菌1組顯著高于菌2組，菌3組高于菌1組，這種差異和氨氮含量變化一致，充分說(shuō)明了二者的關(guān)系，即氨氮轉(zhuǎn)化為硝酸鹽的中間產(chǎn)物是亞硝鹽氮，氨氮高時(shí)亞硝酸鹽含量也高。這個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果還說(shuō)明在溶氧充足、有EM菌的條件下，育苗水體的物質(zhì)轉(zhuǎn)換非常迅速。③在EM菌量相同的情況下，加入蝦片量較多的菌3組NO2N含量始終大于其他二組，說(shuō)明蝦片的加入使NO2N含量增加；在蝦片量相同，EM菌量比菌1組多一倍的菌2組的NO2N含量相對(duì)較低，說(shuō)明EM菌在育苗中對(duì)降低NO2N含量有顯著作用。④本次育苗實(shí)驗(yàn)中，NO2N含量第18天以后急劇上升，如第23d，菌菌,，最高值是菌3組在第27天的測(cè)定值， mg/L，但是，此時(shí)魚苗活動(dòng)良好，未見(jiàn)急性中毒現(xiàn)象。圖25 不同實(shí)驗(yàn)組亞硝酸鹽含量的變化表28 不同實(shí)驗(yàn)組亞硝酸鹽含量的比較（單位：mg/L）分組水源育苗天數(shù)（d）3813182327菌1菌2菌3注：表中同列數(shù)據(jù)比較結(jié)果以下標(biāo)字母(小寫字母)表示，同行數(shù)據(jù)比較結(jié)果以上標(biāo)字母(大字字母)表示，字母相同表示差異不顯著(p)，字母不相同表示差異顯著(p)。 不同實(shí)驗(yàn)組的活性磷含量不同實(shí)驗(yàn)組的活性磷含量見(jiàn)圖26，并根據(jù)測(cè)定結(jié)果LSD多重比較，結(jié)果見(jiàn)表29。在育苗水體中，活性磷（PO43）含量一般不會(huì)對(duì)魚苗造成直接危害，其作用主要是促進(jìn)水體中浮游植物的生長(zhǎng)，間接影響魚苗生長(zhǎng)與存活。從測(cè)定結(jié)果可知：①育苗水體中，三組的PO43含量均隨育苗時(shí)間的推移而顯著增加，第23d開始換水后得到緩解。②比較三個(gè)組的PO43含量：實(shí)驗(yàn)全程，菌3組顯著高于菌菌2組，蝦片的加入是影響PO43含量高的主要因素；加入EM多的菌2組顯著低于菌1組，說(shuō)明EM菌也有降低PO43的作用。③本實(shí)驗(yàn)中， mg/L，斜帶石斑魚苗生長(zhǎng)正常，對(duì)育苗沒(méi)有產(chǎn)生急性影響。圖26 不同實(shí)驗(yàn)組活性磷含量的變化表29 不同實(shí)驗(yàn)組活性磷含量的比較（單位：mg/L）分組水源育苗天數(shù)（d）3813182327菌1菌2菌3注：表中同列數(shù)據(jù)比較結(jié)果以下標(biāo)字母(小寫字母)表示，同行數(shù)據(jù)比較結(jié)果以上標(biāo)字母(大字字母)表示，字母相同表示差異不顯著(p)，字母不相同表示差異顯著(p)。 不同實(shí)驗(yàn)組總磷含量不同實(shí)驗(yàn)組總磷含量的測(cè)定見(jiàn)圖27，并根據(jù)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行LSD多重比較，結(jié)果見(jiàn)表210。從測(cè)定結(jié)果可知：①實(shí)驗(yàn)期間各育苗池中的總磷（TP）均保持了持續(xù)增長(zhǎng)，隨著換水后相應(yīng)下降。②育苗過(guò)程中的TP含量總體上是菌3菌2菌1，從中可以看出，菌3組因?yàn)榧尤氲奈r片多，TP含量高于其他兩組；而加入蝦片量相同，但加EM菌多的菌2組與菌1組比較，表現(xiàn)出菌2組多數(shù)情況下顯著高于菌1組，可見(jiàn)EM菌沒(méi)有降低總磷含量的作用，相反，由于EM菌液中含有P，成為增加水體總磷的因素。圖27 不同實(shí)驗(yàn)組總磷含量的變化表210 不同實(shí)驗(yàn)組總磷含量的比較（單位：mg/L）分組水源育苗天數(shù)（d）3813182327菌1菌2菌3注：表中同列數(shù)據(jù)比較結(jié)果以下標(biāo)字母(小寫字母)表示，同行數(shù)據(jù)比較結(jié)果以上標(biāo)字母(大字字母)表示，字母相同表示差異不顯著(p)，字母不相同表示差異顯著(p)。3 討論在石斑魚工廠化人工育苗中，常常因?yàn)殡S著育苗時(shí)間的推移，各類物質(zhì)在水體中積累，還因?yàn)殡S著魚苗的生長(zhǎng)，生物量增大，水體只能在一定的程度上保持穩(wěn)定。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)向育苗水體中投放三組不同量的蝦片和EM菌，在水體中構(gòu)建一條碎屑食物鏈，即有機(jī)物(蝦片、生物排泄物、生物殘?bào)w等)→細(xì)菌→浮游動(dòng)物→養(yǎng)殖動(dòng)物，這樣的人工生態(tài)系統(tǒng)中，物質(zhì)沿食物鏈轉(zhuǎn)移，保持水質(zhì)的相對(duì)穩(wěn)定；從本實(shí)驗(yàn)測(cè)定的水質(zhì)指標(biāo)看，都在石斑魚生長(zhǎng)發(fā)育充許的范圍內(nèi)，可見(jiàn)，用此方法進(jìn)行斜帶石斑魚的育苗是可行的，本課題組在多年的育苗實(shí)踐中也證明了這一點(diǎn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果綜合考慮水質(zhì)變化情況，認(rèn)為菌2組更適合育苗。本育苗方式下，EM菌和蝦片的投入在其中起到十分重要的作用。蝦片作為食物鏈的起始，為系統(tǒng)提供物質(zhì)和能量，保持系統(tǒng)的運(yùn)轉(zhuǎn)，但蝦片又致水體中的氮、磷增加，控制不當(dāng)會(huì)造成危害。EM菌的存在，由于其中含有多種有益微生物，促進(jìn)了各類物質(zhì)的轉(zhuǎn)換，又為浮游動(dòng)物提供營(yíng)養(yǎng)，本實(shí)驗(yàn)中可以看出，EM菌對(duì)水質(zhì)進(jìn)行調(diào)節(jié)起重要作用：①通過(guò)分解有機(jī)物產(chǎn)生有機(jī)酸，降低水體pH值；②促進(jìn)氮素的循環(huán)，如加速氨氮亞硝酸鹽硝酸鹽的轉(zhuǎn)換，最后又利用硝酸鹽氮轉(zhuǎn)換成原生質(zhì)，從水質(zhì)控制的角度看，有明顯降低“三氮”的作用；③EM菌可降低活性磷(PO43PO44)等作用，但在一定程度上會(huì)提高總磷含量。據(jù)高才全等[112]、侯穎等[113]、黃培鈴等[73]的研究均指出微生物對(duì)降低氨氮和亞硝酸鹽有明顯的作用，李金亮等[37]也認(rèn)為光合細(xì)菌、芽孢桿菌等都可以使養(yǎng)殖水體中亞硝酸鹽氮的濃度得到不同程度的下降，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與這些學(xué)者研究結(jié)果相一致。第三章 工廠化育苗生態(tài)系統(tǒng)中浮游細(xì)菌生產(chǎn)力的研究浮游細(xì)菌是水域生態(tài)系統(tǒng)生物群落的重要組成部分，其數(shù)量和生產(chǎn)量在水體物質(zhì)循環(huán)和能量流動(dòng)中作用重大[114]，細(xì)菌在生態(tài)碎屑食物鏈“TOC→細(xì)菌→細(xì)菌捕食者→養(yǎng)殖動(dòng)物”中既是分解者同時(shí)又是生產(chǎn)者，將來(lái)自初級(jí)生產(chǎn)者的有機(jī)碳不斷地往生物鏈的其他營(yíng)養(yǎng)層次轉(zhuǎn)移[115]。目前，關(guān)于養(yǎng)殖生態(tài)系統(tǒng)中細(xì)菌的研究已有較多的報(bào)道[29，114～119]，在石斑魚工廠化育苗系統(tǒng)中，盡管水體小、育苗時(shí)間短，但因?yàn)槭唪~育苗對(duì)環(huán)境條件的特殊要求，細(xì)菌對(duì)維持水體水質(zhì)穩(wěn)定起著關(guān)鍵作用，作者通過(guò)對(duì)石斑魚工廠化育苗水體細(xì)菌生產(chǎn)量的計(jì)算，以了解細(xì)菌生產(chǎn)力的變化規(guī)律，分析細(xì)菌生產(chǎn)力與主要相關(guān)因子之間的關(guān)系，旨在為深入了解育苗生態(tài)系的結(jié)構(gòu)和功能，為優(yōu)化育苗技術(shù)提供理論依據(jù)，也為微型人工生態(tài)系統(tǒng)的研究提供基礎(chǔ)資料。1 材料和方法 工廠化育苗的水質(zhì)管理技術(shù)要點(diǎn)(見(jiàn)第二章 ) 實(shí)驗(yàn)方法 細(xì)菌生產(chǎn)量的測(cè)定參照劉國(guó)才[119]對(duì)對(duì)蝦綜合養(yǎng)殖圍隔中浮游細(xì)菌生產(chǎn)力的研究方法。取實(shí)驗(yàn)育苗池中層()水樣，經(jīng)3微米核孔濾膜過(guò)濾(目的是排除攝食細(xì)菌的浮游動(dòng)物，并盡可能使細(xì)菌受傷害程度最小)，濾過(guò)液按50mg/L濃度加入放線菌酮?dú)⑺勒婧松铮髮V液置于事先酸洗、滅菌的150mL試劑玻瓶?jī)?nèi)，原位掛瓶培養(yǎng)24h，測(cè)定培養(yǎng)前后瓶?jī)?nèi)細(xì)菌現(xiàn)存量。細(xì)菌生產(chǎn)量由計(jì)算原位培養(yǎng)期間實(shí)驗(yàn)瓶?jī)?nèi)細(xì)菌細(xì)胞數(shù)目的增量得出。[120]。 細(xì)菌計(jì)數(shù)方法細(xì)菌計(jì)數(shù)采用吖啶澄染色熒光顯微計(jì)數(shù)法(AODC法)[121]：直徑為25mm、在2%%Irgalan black(美國(guó)CibaGeigy公司產(chǎn)品)溶液中浸泡24h，以消除濾膜的自發(fā)熒光。%吖啶澄(AO)染色3min，之后用低度真空泵（ Pa）抽濾，用鑷子輕輕取出濾膜置于載玻片上，滴1滴無(wú)菌水，蓋上蓋玻片，在熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)視野中細(xì)菌數(shù)。每個(gè)樣品至少計(jì)數(shù)10個(gè)視野。顯微鏡：研究級(jí)正置熒光顯微鏡（OLYMPUS(B51)），光源為100W汞燈。 細(xì)菌數(shù)量計(jì)算細(xì)菌數(shù)量用下式計(jì)算：細(xì)菌數(shù)量（個(gè)/ml）= X 過(guò)濾面積 / （視野面積過(guò)濾體積）[1]式中: X為各視野計(jì)數(shù)細(xì)菌數(shù)量的平均值（個(gè)）。2 結(jié)果 育苗池中細(xì)菌的生物量在育苗過(guò)程中，從育苗的第3d開始，每5d進(jìn)行一次細(xì)菌生物量的測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3圖31。從圖中可以看出，育苗前二周（前3次測(cè)定），三種不同處理的育苗水體的細(xì)菌生物量幾乎都隨著育苗時(shí)間的延續(xù)而增多，而且變化幅度明顯，經(jīng)統(tǒng)計(jì)T檢驗(yàn)后均有極顯著差異（P＜）。育苗后期（后2次測(cè)定），三種不同處理的育苗池的細(xì)菌生物量趨于穩(wěn)定，此時(shí)向水體中投喂的輪蟲、橈足類數(shù)量加大，浮游動(dòng)物的攝食對(duì)細(xì)菌的數(shù)量有一定的控制作用。從圖中還可以看出，相同時(shí)間的取樣、不同處理的育苗池的細(xì)菌生物量有較大差異，表現(xiàn)出菌1＜菌2＜菌3；取5次測(cè)定結(jié)果的平均數(shù)，菌菌dmdmdm3，表明細(xì)菌生物量與育苗操作中投入微生物制劑和蝦片的量相關(guān)，增加微生物制劑和蝦片的投入量都使育苗池中細(xì)菌生物量的增加。圖31 不同處理組掛瓶前育苗池中細(xì)菌生物量變化表31 不同處理的三個(gè)組的細(xì)菌生物量、生產(chǎn)量及日變異系數(shù)分組掛瓶前后育苗天數(shù)(d)平均值38131823菌1n1n2PP/n1菌2n1n2PP/n1菌3n1n2PP/n1n1：掛瓶培養(yǎng)前實(shí)驗(yàn)瓶中的細(xì)菌生物量（μgCdm3）；n2：掛瓶培養(yǎng)后實(shí)驗(yàn)瓶中的細(xì)菌生物量（μgCdm3）；P：細(xì)菌生產(chǎn)量（μgCdm3d1）；P/n1：細(xì)菌的日變異系數(shù)（d1）；同行數(shù)據(jù)經(jīng)LSD多重比較結(jié)果以上標(biāo)字母（大寫字母）表示，字母相同表示差異不顯著(p)，字母相鄰表示差異顯著(p)，字母相隔表示差異極顯著(p)。 育苗池的細(xì)菌生產(chǎn)量不同處理的育苗池細(xì)菌生產(chǎn)量（見(jiàn)表3圖32）。從圖32中可以看出，隨著育苗時(shí)間的推移，三個(gè)組的細(xì)菌生產(chǎn)量有相同的變化趨勢(shì)，如實(shí)驗(yàn)期間，三個(gè)組的細(xì)菌生產(chǎn)量都在育苗的第8d有最低值，在第18d有最高值；總體上，育苗后期的細(xì)菌生產(chǎn)量比前期高。比較組間的生產(chǎn)量變化可以看出，菌1組比其他二個(gè)組更穩(wěn)定，后二者在育苗前后的生產(chǎn)量變化較大。實(shí)驗(yàn)期間，菌菌dm3ddm3ddm3d1，表明菌2組和菌3組（二者加入的EM菌量比菌1組多一倍）平均細(xì)菌生產(chǎn)量均比菌1組高，表明增加微生態(tài)制劑的投入量可使細(xì)菌生產(chǎn)量的增加；菌3組加入的蝦片量為菌1和菌2組的二倍，其平均細(xì)菌生產(chǎn)量比其他二個(gè)組的要大，說(shuō)明增加蝦片量的投放能夠促使細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖，使細(xì)菌生產(chǎn)量增加。由細(xì)菌生產(chǎn)量/細(xì)菌生物量（P/n1）計(jì)算得出細(xì)菌的日變異系數(shù)（d1）[119]（見(jiàn)表3圖33）～，177。圖32 不同處理組細(xì)菌生產(chǎn)量變化圖33 不同處理組細(xì)菌的變異系數(shù) 細(xì)菌生產(chǎn)量與主要相關(guān)因子之間的關(guān)系在同一室內(nèi)育苗視各育苗池的水溫變化一致，不同育苗時(shí)間水溫的變化見(jiàn)圖34，細(xì)菌生物量、生產(chǎn)量及日變異系數(shù)見(jiàn)表31。細(xì)菌生產(chǎn)量與細(xì)菌生物量呈顯著正相關(guān)(p＜,r= ,n= 15)，而與水溫沒(méi)有表現(xiàn)出相關(guān)關(guān)系（r=，n=15）；細(xì)菌的日變異系數(shù)與水溫(p＜,r= ,n=15)呈顯著正相關(guān)。圖34 育苗期間水溫變化3 討論 育苗中蝦片、EM菌加入量與細(xì)菌生物量、生產(chǎn)量的關(guān)系工廠化育苗生態(tài)系統(tǒng)中，不斷投放的蝦片及動(dòng)物排泄積累等都會(huì)使水體溶解的營(yíng)養(yǎng)鹽含量和沉積物增多，因而，向水體中加入微生態(tài)制劑起到維持水質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定的重要作用。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，菌2組、 mg/L、 mg/L，菌1組加入的EM菌僅為后二個(gè)組的一半，可見(jiàn)加入的EM菌直接影響到水體中的細(xì)菌生物量。分析蝦片對(duì)水體細(xì)菌生物量的影響，菌3組為菌菌2組的二倍，而其細(xì)菌生物量比另二個(gè)組更高，蝦片用量的提高，有助于提高細(xì)菌生物量，可見(jiàn)蝦片在水體中作為食物鏈的起始端，成為推動(dòng)系統(tǒng)物質(zhì)循環(huán)的能源。與對(duì)蝦養(yǎng)殖池的細(xì)菌生物量相比較，劉國(guó)才測(cè)定了對(duì)蝦養(yǎng)殖池的細(xì)菌生物量，其變化范圍在122～739μgCdm3 [122]，也證明蝦片和EM菌的使用，能夠維持水體的高細(xì)菌生物量。細(xì)菌作為育苗水體中輪蟲、橈足類的餌料，保證了輪蟲、橈足類在育苗水體的繁殖與生長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，育苗池中細(xì)菌生物量較大時(shí)細(xì)菌生產(chǎn)量也較多，引起細(xì)菌生物量提高的因素，同樣也引起細(xì)菌生產(chǎn)量的提高，因此，加放蝦片、EM菌都在提高細(xì)菌生產(chǎn)量的作用。本實(shí)驗(yàn)條件下，～dm3d1，與其他水體的細(xì)菌生產(chǎn)量比較，～dm3d～dm3d1（鄭天凌等，2001）[123]，～dm3d1（焦念志等，1995）[124]，～dm3d1 （Lu Jingrang等，1997）[125]，～dm3d1（劉國(guó)才等，1997）[126]，90～909μgCdm3d1（劉國(guó)才等，2000）[119]，可見(jiàn)，石斑魚育苗水體的細(xì)菌生產(chǎn)量較自然水體高1～2個(gè)數(shù)量級(jí)，與對(duì)蝦養(yǎng)殖池相當(dāng)或高出數(shù)倍；而低于國(guó)外學(xué)者M(jìn)oriarty等采用甲基胸腺嘧啶脫氧核苷示蹤法對(duì)蝦池的測(cè)定結(jié)果為430～2100μgCdm3d1 [127]，這可能的原因是與所研究的水環(huán)境生態(tài)系統(tǒng)、外界因素以及所采用的研究方法不同有關(guān)。 細(xì)菌生產(chǎn)量與水溫的關(guān)系問(wèn)題
體量養(yǎng)殖池研究中所