【正文】 。蛙類(lèi)是害蟲(chóng)的天敵，蛙類(lèi)的生長(zhǎng)分卵、蝌蚪、幼蛙、成蛙四個(gè)發(fā)育階段，其中以蝌蚪期對(duì)農(nóng)藥的反應(yīng)最敏感。農(nóng)藥對(duì)蛙類(lèi)的毒性測(cè)定，選用澤蛙的蝌蚪為試驗(yàn)材料。供試農(nóng)藥用制劑或原藥，對(duì)難于溶于水的農(nóng)藥，可用少量?jī)?nèi)酮與吐溫80助溶，用量不得。試驗(yàn)材料取自田間自然繁殖的蝌蚪，采回后先預(yù)養(yǎng)一天，再選健壯、個(gè)體均一的蝌蚪供試驗(yàn)用；試驗(yàn)容器為直徑18cm、高9cm的玻璃缸，加入1000ml試液，每個(gè)處理投放10頭蝌蚪，重復(fù)三次。正式試驗(yàn)前先用預(yù)試。然后在最高安全濃度與最低全致死濃度范圍之間按等比級(jí)差設(shè)57個(gè)處理，并設(shè)空白對(duì)照，試驗(yàn)在自然氣溫條件下進(jìn)行。試驗(yàn)開(kāi)始后24小時(shí)、48小時(shí)觀(guān)察記錄蝌蚪的死亡率，用概率統(tǒng)計(jì)法求出LC50值與95%的可信限值。農(nóng)藥對(duì)蛙類(lèi)的毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，可參照魚(yú)類(lèi)的毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。蚯蚓毒性試驗(yàn)國(guó)外做農(nóng)藥毒性試驗(yàn)的蚯蚓品種，多數(shù)用日本的赤子愛(ài)勝蚯蚓（Eiseniafoelide），該品種在我國(guó)已普遍養(yǎng)殖，是目前理想的試驗(yàn)品種。農(nóng)藥對(duì)蚯蚓的致害途徑，主要是土壤中的殘留農(nóng)藥與蝗蚓的接觸或被蚯蚓吞食所致。供試土壤種類(lèi)的不同，導(dǎo)致至蚯蚓毒性的程度也有差別。為了使試驗(yàn)結(jié)果具有可比性，采用人工配制的標(biāo)準(zhǔn)土壤作為試驗(yàn)材料，將農(nóng)藥按一定的級(jí)差，配成57個(gè)等級(jí)，分別均勻地加入1公斤土壤中，調(diào)節(jié)到一定的濕度后，裝于2升的培養(yǎng)缸中。每個(gè)處理養(yǎng)入個(gè)體大小相近的健壯蚯蚓10條，在20177。2℃和有適量光照條件下進(jìn)行試驗(yàn)。供試農(nóng)藥用制劑或純品，對(duì)難溶于水的農(nóng)藥，可用丙酮助溶。拌入土壤后先將丙酮揮發(fā)掉后再做試驗(yàn)。蚯蚓的毒性試驗(yàn)需連續(xù)進(jìn)行14天，于第7與14天時(shí)測(cè)定蚯蚓的死亡率，用概率法求半致死濃度LC50與95%的可信限值。上述方法得到的試驗(yàn)結(jié)果，建議按照LC50值的大小將農(nóng)藥對(duì)蚯蚓的毒性劃分為三個(gè)等級(jí)：1ppm的為高毒農(nóng)藥，110ppm的為中毒農(nóng)藥，10ppm的為低毒農(nóng)藥。土壤微生物毒性試驗(yàn)本試驗(yàn)用測(cè)定土壤微生物呼吸強(qiáng)度的方法，評(píng)價(jià)施用農(nóng)藥后對(duì)土壤微生物總活性影響的指標(biāo)。供試土壤要用兩種有代表性的新鮮土壤，并要提供pH值、有機(jī)質(zhì)、代換量、土壤質(zhì)地等數(shù)據(jù)。供試農(nóng)藥最好用制劑，也可用原藥或純品。每種土壤設(shè)1ppm、10ppm、100ppm三組不同濃度處理，并設(shè)空白對(duì)照，每組重復(fù)三次。難溶于水的農(nóng)藥，可用丙酮助溶。將藥液先與少量土混勻，待丙酮發(fā)凈后，再均勻拌入到處理的土壤中。每個(gè)處理用土50克，將土壤含水量調(diào)節(jié)成田間持水量的60%，裝于100ml小燒杯中，與另一個(gè)裝有標(biāo)準(zhǔn)堿液的小燒杯一起置于2升容積的密閉瓶中，于25177。1℃的恒溫箱中培養(yǎng)。試驗(yàn)開(kāi)始后的第15天時(shí)更換出密閉瓶中的堿液測(cè)定吸收的CO2含量。當(dāng)打開(kāi)密閉瓶更換堿液時(shí)，同時(shí)更換了密閉瓶中的空氣，以保證密閉瓶中的氧壓維持在一定水平。用土壤中CO2釋放量的變化，反映土壤微生物受農(nóng)藥抑制的程度，并以此為依據(jù)，建議將農(nóng)藥對(duì)土壤微生物的毒性劃分成以下三個(gè)等級(jí)：用1ppm處理土壤，在15天內(nèi)抑制值50%的為高毒農(nóng)藥；用10ppm處理的土壤，抑制值50%的為中毒的農(nóng)藥；抑制值50%的為低毒農(nóng)藥。魚(yú)類(lèi)毒性試驗(yàn)國(guó)際上常用試驗(yàn)魚(yú)種有斑馬魚(yú)、鯉魚(yú)、夏裨魚(yú)、黑頭軟口鰷、翻車(chē)魚(yú)、底鳉、虹鱒；鯉魚(yú)是我國(guó)主要魚(yú)種之一，各地都有養(yǎng)殖材料易得，是理想的試驗(yàn)魚(yú)種。試驗(yàn)魚(yú)應(yīng)用同時(shí)孵化，體長(zhǎng)約23cm，健康無(wú)病的魚(yú)苗先在室內(nèi)馴化飼養(yǎng)714天，待魚(yú)苗死亡率穩(wěn)定在10%時(shí)開(kāi)始試驗(yàn)。試驗(yàn)期間對(duì)照組的死亡率也應(yīng)控制在10%以下。魚(yú)的急性毒性測(cè)定方法，有靜態(tài)法、半靜態(tài)法和流動(dòng)式法三種，在我國(guó)目前條件下，一般采用半靜態(tài)法為宜（易水解與易揮發(fā)的農(nóng)藥不宜使用）。試驗(yàn)容器的大小，一般應(yīng)控制在1克/升魚(yú)水的范圍內(nèi)。試驗(yàn)期間定期更換藥液，以保證水中藥液濃度不低于加入量的80%，水中溶解氧不得低于飽和點(diǎn)的60%，之間。正式試驗(yàn)前先做預(yù)試。然后在最高安全濃度與最低全致死濃度范圍之間，按級(jí)差設(shè)57個(gè)組，每組養(yǎng)10尾，并設(shè)空白對(duì)照。供試水用曝氣去氯后的自來(lái)水，標(biāo)明水質(zhì)指標(biāo)；供試農(nóng)藥用純品，必要時(shí)也可用工業(yè)品或制劑；難溶于水的農(nóng)藥，可用超聲波加以分散，或用低毒的丙酮與吐溫80助溶，用量要，并要作對(duì)比試驗(yàn)。試驗(yàn)前24小時(shí)停止給試驗(yàn)魚(yú)喂食，在整個(gè)試驗(yàn)期間不喂食，試驗(yàn)在22177。2℃，適度光照（1216小時(shí)/天）條件下連續(xù)96小時(shí)，記錄最初8小時(shí)，以及24796小時(shí)時(shí)魚(yú)的死亡率與中毒癥狀，及時(shí)撈出死魚(yú)，最后對(duì)魚(yú)類(lèi)的毒性一般按LC50的大小劃分為三個(gè)等級(jí)：10ppm為低毒農(nóng)藥。水蚤毒性試驗(yàn)試驗(yàn)用的蚤種選用常用的大型蚤（Daphniamagna），蚤齡624小時(shí)，試驗(yàn)水用脫氯后的自來(lái)水，標(biāo)明水質(zhì)指標(biāo)，以綠藻（小球藻、柵列藻）為飼料，用靜態(tài)方法培養(yǎng)。試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)水中溶解氧不得低于飽和點(diǎn)的70%，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)溶解氧不得低于2mg/L試驗(yàn)用的農(nóng)藥用純品，也可用制劑。難溶于水的農(nóng)藥，可用少量低毒的丙酮與吐溫80助溶，加入量不得，試驗(yàn)液的濃度按級(jí)差設(shè)57個(gè)組。另設(shè)一對(duì)照組，每組用水蚤20只，分4槽，每槽5只。槽中藥液用量不得2ml/只蚤。試驗(yàn)期不投食，對(duì)照組中水蚤的死亡率應(yīng)控制在10%，試驗(yàn)在22177。2℃的條件下觀(guān)察48小時(shí)。判斷水蚤死亡的標(biāo)準(zhǔn)，在顯微鏡下觀(guān)察，心臟停止跳動(dòng)為依據(jù)，記錄24小時(shí)與48小時(shí)的死亡數(shù)，用概率統(tǒng)計(jì)法求出LC50與95%的可信限值。農(nóng)藥對(duì)水蚤的毒性等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)，可參照魚(yú)類(lèi)的等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。藻類(lèi)毒性試驗(yàn)國(guó)際上供農(nóng)藥毒性試驗(yàn)用的藻種有月牙藻、柵列藻、小球藻等，這些藻種在我國(guó)都有廣泛分布。為了使試驗(yàn)數(shù)據(jù)可比起見(jiàn)，建議統(tǒng)一用柵列藻作為試驗(yàn)材料。試驗(yàn)用的玻璃容器均需高溫滅菌，選擇合適的培養(yǎng)液作為試驗(yàn)用水（如水生6號(hào)培養(yǎng)液）。供試的農(nóng)藥用純品，必要時(shí)也可用制劑。難溶于水的農(nóng)藥可用丙酮與吐濕80助溶，用量不得。試驗(yàn)用的農(nóng)藥溶液按級(jí)差設(shè)57個(gè)組，另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照。開(kāi)始時(shí)試驗(yàn)液中的藻量控制在105個(gè)細(xì)胞/ml左右，pH177。，水溫22177。2℃，連續(xù)光照（光強(qiáng)4000勒克斯），采用振搖或間歇振搖下培養(yǎng)96小時(shí)，于24796小時(shí)時(shí)取出少量培養(yǎng)液，測(cè)定藻數(shù)變化，用概率統(tǒng)計(jì)法求出相應(yīng)時(shí)間內(nèi)的半抑制濃度EC50與95%的可信限值