【正文】 轉(zhuǎn)錄終止的修飾點(diǎn) 5? 5? 3? 3? 3?加尾 AAAAAAA 3? mRNA 分子內(nèi)部往往 少數(shù)腺苷酸 的腺嘌呤 第 6位氨基 發(fā)生甲基化修飾（ m6A）。這是腺嘌呤與SAM在 甲基轉(zhuǎn)移酶 作用下的結(jié)果，其意義目前不是很清楚，可能與 mRNA前體加工時(shí)的識(shí)別及 mRNA的保護(hù)有關(guān)，與翻譯無內(nèi)在聯(lián)系。 3. mRNA內(nèi)部甲基化 RNA剪接（ RNA splicing）： 從 DNA模板鏈轉(zhuǎn)錄出的最初轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中除去內(nèi)含子，并將外顯子連接起來形成一個(gè)連續(xù)的 RNA分子的過程。 剪 接點(diǎn)： 內(nèi)含子與外顯子的交界點(diǎn)。 5’剪接點(diǎn)： 位于內(nèi)含子 5’端的剪接點(diǎn)。 3’剪接點(diǎn)： 位于內(nèi)含子 3’端的剪接點(diǎn)。 內(nèi)含子的分類 ： 根據(jù)基因的類型和剪接的方式，通常把內(nèi)含子分為 4類 ： I： 存在于線粒體 、 葉綠體基因 、 某些低等真核生物的 rRNA基因中； II： 存在于真菌 、 藻類及植物的線粒體 、 葉綠體基因 、 原核基因中； III： 是常見的形成套索結(jié)構(gòu)后剪接 ， 大多數(shù)mRNA基因有此類內(nèi)含子； IV： 是 tRNA基因及其初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中的內(nèi)含子 ，剪接過程需酶及 ATP。 剪接方式： 方式二：由 剪接體 完成（核 mRNA內(nèi)含子） 可供識(shí)別的特異序列 剪接體由多種蛋白質(zhì)和核蛋白組成 。 前兩種剪接都屬于 轉(zhuǎn)酯反應(yīng)。 方式一： 自我剪接 （ Ⅰ 、 Ⅱ 型兩類內(nèi)含子） 形成特定的二級(jí)結(jié)構(gòu) RNA具有催化剪接的能力 方式三：需要 蛋白質(zhì)酶 參與的剪接（酵母 tRNA） 1） Ⅰ 型自我剪接： 依靠 核酶 自我催化實(shí)現(xiàn)剪接，不需蛋白酶及能量供給，只需 一價(jià)和二價(jià)陽離子 （核酶是金屬依賴性酶）及 鳥苷酸（或鳥苷）， 反應(yīng)是連續(xù)的磷酸酯轉(zhuǎn)移反應(yīng)。 機(jī)制： 鳥苷酸（或鳥苷） 在剪接中起輔助因子的作用，提供游離的 3’OH與 5’剪接點(diǎn)的 5’磷酸基 團(tuán)發(fā)生轉(zhuǎn)酯反應(yīng)。緊接著由 第一個(gè)外顯子產(chǎn)生的 3’OH發(fā)動(dòng)第二次類似的轉(zhuǎn)酯反應(yīng)，攻擊 3’剪接點(diǎn)的 5’磷酸基團(tuán) ，完成兩外顯子片段的連接。 pGOH (ppGOH, pppGOH) UOH GpU pGpA 第一次轉(zhuǎn)酯反應(yīng) 第二次轉(zhuǎn)酯反應(yīng) UpA GpU 外顯子 1 內(nèi)含子 外顯子 2 GOH UpU pGpA Ⅰ 型內(nèi) 含子的剪接機(jī)制 ２ ） Ⅱ 型自我 剪接： Ⅱ 類內(nèi)含子的剪接 無需鳥苷 的輔助，但 需鎂離子 的存在。 機(jī)制： ?首先是內(nèi)含子 3’端的腺苷酸的 2′OH攻擊 5′剪接點(diǎn)的 5′磷酸基， 切下外顯子 1，從而產(chǎn)生了 套索 （ lariat）結(jié)構(gòu)； ?第二步是切下的外顯子 1，其 3′OH再次攻擊 3′剪接點(diǎn)的 5’磷酸基，切下的外顯子 2′的 5′磷酸和外顯子 1的 3′OH形成磷酸二酯鍵，連接在一起，同時(shí)釋放出套索狀的內(nèi)含子 。 II型內(nèi)含子的剪接機(jī)制 套索結(jié)構(gòu) 核 mRNA結(jié)構(gòu)特點(diǎn) : ?邊界順序 :完全符合 GUAG規(guī)則 ,即：這些內(nèi)含子 5’端均為 GU， 3’端均為 AG。 ?分支點(diǎn)順序：位于內(nèi)含子 3′端上游 1540nt處，保守序列為 UACUAAC,其中 A為百分之百的保守，且具有 2′OH。 3） 核 mRNA的剪接 富含尿嘧啶的 snRNA稱為 U系列 snRNA，其中U U U U5和 U6 snRNP被認(rèn)為是參與核mRNA剪接， U3 snRNP被認(rèn)為是參與 rRNA加工。 核內(nèi)的蛋白質(zhì) 小分子核糖核蛋白體 （ snRNP） snRNA(核內(nèi)小分子 RNA) 剪接體： 是結(jié)合在被剪接 RNA上的、由五種 U系列 snRNA及一些剪接因子組成的復(fù)合物。 機(jī)制： 和 Ⅱ 類內(nèi)含子十分相似，但根本的不同點(diǎn)是核 mRNA前體的剪接本身不能形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，必需依賴于 剪接體 進(jìn)行剪接。 和 snRNA的結(jié)合是相當(dāng)復(fù)雜的，但剪接反應(yīng)的第一步 5′位點(diǎn)的剪接是由 U6催化的， 3′位點(diǎn)是由 5′外顯子 1的 3′OH對(duì)內(nèi)含子 3′端切點(diǎn)進(jìn)行轉(zhuǎn)酯反應(yīng)來完成。 圖 1329 核 mRNA剪切過程 核 mRNA剪接過程 雞卵清蛋白基因 hnRNA 首、尾修飾 hnRNA剪接 成熟的 mRNA 雞卵清蛋白基因及其轉(zhuǎn)錄 、轉(zhuǎn)錄后修飾 雞卵清蛋白成熟 mRNA與 DNA雜交電鏡圖 DNA mRNA 4)核 tRNA剪接 （以酵母為例） ? tRNA的內(nèi)含子均位于 反密碼子附近 ，其中含一段與反密碼子互補(bǔ)的序列。 ? 內(nèi)含子序列無保守性 ,剪接酶系 識(shí)別的是二級(jí)結(jié)構(gòu)。 ? 40個(gè)不連續(xù)基因／酵母 400個(gè)核 tRNA； 長(zhǎng) 14~46bp。 tRNA內(nèi)含子的特點(diǎn)： 酵母 tRNAphe 第一步：內(nèi)切酶作用 釋放一條 線狀內(nèi)含子 和兩個(gè)“ tRNA半分子 ” 剪接過程： 鏈的斷裂和連接是兩個(gè)獨(dú)立的過程。 其中 內(nèi)切酶作用后產(chǎn)生 5’OH 和 3’磷酸基 ， 3’磷酸基很快轉(zhuǎn) 變?yōu)?2’， 3’環(huán)式磷酸基 。 因此，一個(gè)“半分子”有 兩個(gè)磷酸基末端 ，另一個(gè)“半分子”有 兩個(gè) OH末端。 連接反應(yīng)前：要進(jìn)行兩個(gè)反應(yīng)： a、 左“半分子”的 3’端成為 OH （環(huán)式磷酸二酯酶） 作用后其 3’ 位為 OH， 2’ 位為磷酸基 b、 第二個(gè)“半分子”的 5’端轉(zhuǎn)變?yōu)? 磷酸基 （多聚核苷酸激酶） 連接后：還要 切除 第一個(gè)“半分子”的 2’— 磷酸。 第二步： RNA連接酶連接斷端 前體RNA 兩個(gè)半分子 進(jìn)行兩個(gè)連接反應(yīng) 成熟 tRNA a. 切除多余的核苷酸 ： RNase p切除 539。 端多余的核苷酸； Rnase D切除 339。端多余的核苷酸。 b. 剪接內(nèi)含子 ：核酸內(nèi)切酶切除內(nèi)含子 ,連接酶進(jìn)行連接。 c. 在 339。末端加 CCA:在核苷酸基轉(zhuǎn)移酶催化下完成 339。末端添加 CCA。 d. 核苷酸修飾 ： 包括甲基化 ,脫氨基 ,還原反應(yīng)等。 tRNA前體分子的加工 早轉(zhuǎn)錄本 成熟 tRNA 加工 酵母酪氨酸 tRNA前體的加工