干細(xì)胞項目組筆試題目-資料下載頁
2025-03-25 01:15本頁面
【正文】 下列混合液試劑使用量Oligo dT Primer (50μM)1μldNTP Mixture (10mM each)1μl模板RNA Total RNA：5μg以下（4μl）RNase Free dH2OUp to 10μl2. 65℃保溫5min后，冰上迅速冷卻。3. 在上述Microtube中配制下列反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，總量為20μl。試劑使用量上述變性后反應(yīng)液10μl5PrimerScriptⅡ Buffer4μlRNase Inhibitor (40U/μl) (20U)PrimerScriptⅡ RTase (200U/μl)1μl (200U)RNase Free dH2OUp to 20μl4. 緩慢混勻。5. 按下列條件進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：42℃ 3060min，95℃ 5min，冰上冷卻。三．以獲得的c DNA為模板PCR出目的基因引物設(shè)計為：以PET28a為載體表達(dá)產(chǎn)物N端帶有可以被thrombin酶切的組氨酸標(biāo)簽，上游primer：5’GGAATTCCATATGACCTGCTGCAGTCTACAC 3’ (Nde I酶切位點以及保護(hù)堿基)下游primer：5’CCGCTCGAGTTAAAATTTTAATAGCTAGTCTTCG3’(Xho I酶切位點以及終止密碼子、保護(hù)堿基)四．將擴(kuò)增出的目的基因連接到目的載體篩選，誘導(dǎo)表達(dá)用Nde I 和Xho I 酶切目的基因和PET28a載體，將目的基因連接入PET28a大腸桿菌表達(dá)載體中，轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞，圖板，挑出單菌落，篩選鑒定出目的菌落，擴(kuò)增培養(yǎng)加入IPTG誘導(dǎo)表達(dá)出目的蛋白。近年來的研究表明間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal stem cell MSC）具有免疫調(diào)節(jié)的作用，可應(yīng)用于移植排斥反應(yīng)，一些MSC產(chǎn)品已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗。請通過文獻(xiàn)搜索，簡要綜述MSC治療GVHD的機(jī)制。（至少引用3篇英文文獻(xiàn)，并注明出處）iPS細(xì)胞與胚胎干細(xì)胞都具有全能性，但也有一定的差異性。請設(shè)計實驗方案，試檢測iPS與胚胎干細(xì)胞的表達(dá)的差異性（引用請標(biāo)注）。 第三部分您對自己的未來有什么樣的夢想呢？請您設(shè)想自己40歲時的狀態(tài)，為40歲的自己寫一篇小自傳，可以包括事業(yè)、生活等方面。字?jǐn)?shù)不少于200字，不多于500字
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