體外轉(zhuǎn)錄與翻譯ppt課件-資料下載頁
2025-01-14 07:15本頁面
【正文】 外轉(zhuǎn)錄與翻譯 五、基因體外翻譯的應(yīng)用 3 高通量篩選 ?篩選病毒特異翻譯抑制復(fù)合物 ?篩選分子伴侶抑制藥物 * 確定新型的孤受體（ orphan receptor） 基因體外轉(zhuǎn)錄與翻譯 五、基因體外翻譯的應(yīng)用 4 分子結(jié)構(gòu)和定位分析 * 膜蛋白研究 曾經(jīng)有實(shí)驗(yàn)證明在體外表達(dá)系統(tǒng)中加入犬類的微粒體膜可以讓跨膜蛋白 G蛋白偶連受體正確折疊。 * 加入非天然氨基酸進(jìn)行標(biāo)記 有實(shí)驗(yàn)表明經(jīng)過修飾的帶賴氨酸反密碼子的 tRNA可以將非天然的氨基酸插入到體外表達(dá)合成的多肽中。 * 蛋白折疊和分子伴侶相互作用研究 * 實(shí)時(shí)翻譯 /折疊實(shí)驗(yàn) * 高分子組裝 基因體外轉(zhuǎn)錄與翻譯 五、基因體外翻譯的應(yīng)用 5 分子診斷 * 蛋白截短實(shí)驗(yàn)（ Protein truncation test ， PTT） 這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)發(fā)明 1993年，可快速檢測出基因突變。 基因體外轉(zhuǎn)錄與翻譯 五、基因體外翻譯的應(yīng)用 6 功能基因組學(xué) ?體外表達(dá)克隆 * 核糖體展示技術(shù) Ribosomal Display，RD 基因體外轉(zhuǎn)錄與翻譯 五、基因體外翻譯的應(yīng)用 7 功能研究 * 酶活分析 有些蛋白通過體外表達(dá)方式仍然保持活性，因此可以應(yīng)用這些樣品進(jìn)行酶活測定。如果在體外表達(dá)系統(tǒng)中不含有與待測定酶相同的酶活性，那么表達(dá)產(chǎn)物無需純化就可以直接進(jìn)行測定。另外，在體外表達(dá)系統(tǒng)中可以方便加入一些外部因子，從而可能省去一些要在細(xì)胞中進(jìn)行的研究。 * 突變分析 * 翻譯后修飾分析 許多蛋白需要進(jìn)行高級修飾后才能形式功能。目前，在兔網(wǎng)織紅細(xì)胞系統(tǒng)中已經(jīng)成功進(jìn)行過磷酸化、腺苷酸化、豆蔻酰化、法呢醇化、異戊二烯化和蛋白水解活性修飾。額外的微粒體膜則可以對糖基化、甲基化和信號序列去除進(jìn)行研究。 基因體外轉(zhuǎn)錄與翻譯 五、基因體外翻譯的應(yīng)用 8 分子間相互作用檢測 * 蛋白－蛋白相互作用 這些作用包括特異結(jié)合（例如：抗原－抗體、配體－受體結(jié)合），高分子組裝（ macromolecular assembly）和轉(zhuǎn)錄功能復(fù)合物的形成。通常相互作用的蛋白分別用體內(nèi)表達(dá)系統(tǒng)和體外表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)，利用體外表達(dá)可方便的對蛋白進(jìn)行標(biāo)記，以此為探針檢測另一蛋白。利用這個(gè)方法還可以對酵母雙雜交的結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。 * 蛋白－ DNA和蛋白－ RNA相互作用 表達(dá)的蛋白可以通過電泳遷移率移位實(shí)驗(yàn)（ electrophoretic mobility shift assay, EMSA）發(fā)現(xiàn)蛋白是否能夠與核酸結(jié)合，結(jié)合后的蛋白泳動會較慢。 * DNARNA和 RNARNA相互作用 互補(bǔ)的核酸序列會抑制轉(zhuǎn)錄或翻譯的進(jìn)行。 基因體外轉(zhuǎn)錄與翻譯 課后復(fù)習(xí)重點(diǎn) 體外轉(zhuǎn)錄常用的 RNA聚合酶 體外轉(zhuǎn)錄模板 DNA來源以及要求 體外翻譯常用的翻譯系統(tǒng) 體外翻譯對于ＭＲＮＡ要求
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1