【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 理（WBC Count Balance），使得白細(xì)胞計(jì)數(shù)在WBC/HGB 通道中與LMNE 雙鞘流池計(jì)數(shù)結(jié)果相聯(lián)系，如果出現(xiàn)較大差別則可進(jìn)行報(bào)警提示。最近該廠推出新一代ABX Pentra DX120 型血細(xì)胞分析儀，其測(cè)定原理仍然采用雙鞘流技術(shù)。采用新技術(shù)擴(kuò)展了散點(diǎn)圖分布范圍，形成可對(duì)血液中未成熟的粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞共20 個(gè)參數(shù)的分類或提示性報(bào)告信息，這對(duì)異常血細(xì)胞的篩檢提供了很大幫助。多角度偏振光激光散射技術(shù)美國(guó)雅培公司（ABBOTT）推出的血液分析儀，在白細(xì)胞分類中采用獨(dú)特的多角度偏振光散射（MAPSS）技術(shù)，其所生產(chǎn)的血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀從CELLDYN 3000，3200，3500，3700，4000，以及Sapphire（藍(lán)寶石），在白細(xì)胞分類上均采用了MAPSS 技術(shù)。該技術(shù)基本原理是細(xì)胞在激光束的照射下，在多個(gè)角度都產(chǎn)生散射光，儀器在四個(gè)角度的四個(gè)檢測(cè)器將接收到的相應(yīng)的散射光信號(hào)，然后經(jīng)過(guò)微處理器分析處理，將各類細(xì)胞安置在散點(diǎn)圖上的相應(yīng)位置，并計(jì)算出白細(xì)胞分類結(jié)果。多角度偏振光散射白細(xì)胞分類技術(shù)（ Multi—Angle Polatised Scatter Separation of white cell，MAPSS）其原理是一定體積的全血標(biāo)本用鞘流液按適當(dāng)比例稀釋。其白細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)近似于自然狀態(tài)，因嗜堿性粒細(xì)胞顆粒具有吸濕的特性，所以嗜堿性粒細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有輕微改變。紅細(xì)胞內(nèi)部的滲透壓高于鞘液滲透壓而發(fā)生改變，紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白從細(xì)胞內(nèi)游離出來(lái)，而鞘液內(nèi)的水分進(jìn)入紅細(xì)胞中，細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)仍然完整，但此時(shí)的紅細(xì)胞折光指數(shù)與鞘液的相同，故紅細(xì)胞不干擾白細(xì)胞檢測(cè)。在鞘流系統(tǒng)的作用下，樣本被集中為一個(gè)直徑30μm 的小股液流，該液流將稀釋的血細(xì)胞單個(gè)排列，然后通過(guò)激光束，激光照射于細(xì)胞上，在各個(gè)方向都有其散射光出現(xiàn)。0176。為前向角散射（1176。～3176。）光，可粗略地測(cè)定細(xì)胞大??；②10176。為狹角散射光（7176。～11176。），可測(cè)細(xì)胞結(jié)構(gòu)及其復(fù)雜性的相對(duì)特征；③90176。為消偏振光散射（70176。`～110176。），基于顆?？梢詫⒋怪苯嵌鹊钠窦す庀竦奶匦?，將嗜酸細(xì)胞從中性粒細(xì)胞和其它細(xì)胞中分離出來(lái)。④90176。垂直光散射（70176?！?10176。），主要對(duì)細(xì)胞內(nèi)部顆粒和細(xì)胞成分進(jìn)行測(cè)量。這四個(gè)角度同時(shí)對(duì)單個(gè)白細(xì)胞進(jìn)行測(cè)量和分析后，即可將白細(xì)胞劃分為嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞5 種。ABBOTT 的五分類法定量很有意思，不用傳統(tǒng)的體積定量，而是采用數(shù)量定量，每次計(jì)數(shù)時(shí)完成10000 個(gè)細(xì)胞測(cè)定即停止。該類型儀器除了基本的白細(xì)胞五分類外，還提供了其它異常白細(xì)胞的信息和報(bào)警，提供給檢驗(yàn)者參考，以通過(guò)人工顯微鏡檢查復(fù)核這些結(jié)果，例如異常淋巴細(xì)胞、原始細(xì)胞、未成熟粒細(xì)胞、桿狀核中性粒細(xì)胞。國(guó)內(nèi)桂林優(yōu)利特公司生產(chǎn)的URIT系列五分類血細(xì)胞分析儀，采用相同的分類技術(shù)，經(jīng)過(guò)多年的發(fā)展，在市場(chǎng)上得到了用戶的好評(píng)，并榮獲2013年國(guó)家高性能醫(yī)學(xué)診療設(shè)備重大專項(xiàng)獎(jiǎng)。激光散射技術(shù)日本光電公司是開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)五分類血細(xì)胞分析儀的廠家之一，目前所知僅有兩款類型的儀器投入市場(chǎng)，均采用相同的測(cè)定原理，型號(hào)是MEK7222K和MEK8222K。其WBC、RBC 和PLT 計(jì)數(shù)原理采用電阻法，白細(xì)胞分類測(cè)定采用鞘流技術(shù)和激光散射原理。在鞘流液中白細(xì)胞通過(guò)管路進(jìn)入鞘流池內(nèi)，激光照射白細(xì)胞后發(fā)生的各種散射光，根據(jù)血細(xì)胞的體積、血細(xì)胞的復(fù)雜性（有無(wú)顆粒、核的構(gòu)造等）的不同，散射光的強(qiáng)度和方向有所不同。激光直進(jìn)方向和同方向小角度的散射光（表示Size）、激光直進(jìn)方向和同方向大角度的散射光（表示Complexity）、與激光直進(jìn)方向相對(duì)垂直的方向的散射光（表示Granularity）為參數(shù)的作為散點(diǎn)圖，對(duì)淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞進(jìn)行分類。Size 表示血細(xì)胞的大小、Complexity 表示白細(xì)胞結(jié)構(gòu)的復(fù)雜度、Granularity 表示白細(xì)胞顆粒的程度。采用此原理可提供了三個(gè)散射圖，MAIN 散點(diǎn)圖、NEEO 散點(diǎn)圖和MOBA 散點(diǎn)圖。在MAIN 散點(diǎn)圖上（大圖部分）下面散點(diǎn)表示淋巴細(xì)胞群，右側(cè)為粒細(xì)胞群；兩個(gè)小圖，NEEO 為中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞散點(diǎn)圖，MOBA 為單核細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞細(xì)胞散點(diǎn)圖。此外儀器還能給出大的不成熟細(xì)胞（LIC）提示信息。邁瑞激光散射和細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)邁瑞（MINDRAY）公司是國(guó)內(nèi)最早有能力生產(chǎn)五分類血細(xì)胞分析儀的廠家，他們目前生產(chǎn)的五分類血細(xì)胞分析儀、BC5800 檢測(cè)速度快：全自動(dòng)進(jìn)樣90個(gè)樣本/小時(shí)，開(kāi)放進(jìn)樣80個(gè)樣本/小時(shí)型自動(dòng)五分類血液細(xì)胞分析儀，采用半導(dǎo)體激光散射技術(shù)和細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)，配合改良的流式分析裝置對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行精確的五分類分析。BC6900 檢測(cè)速度：最高125 個(gè)標(biāo)本/ 小時(shí)為目前最高配置，可選擇使用靜脈血或預(yù)稀釋末梢血，均能獲得良好的各種細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果和白細(xì)胞五分類結(jié)果。具有血液和體液檢測(cè)功能，有六個(gè)通道、九種模式。鞘流技術(shù)是所有高檔血細(xì)胞分析儀均采用的細(xì)胞進(jìn)樣技術(shù)，為了達(dá)到更高的液流速度壓力差和更穩(wěn)定的液體流動(dòng)，該公司獨(dú)創(chuàng)性地采用了二次加速鞘流技術(shù)，分級(jí)實(shí)現(xiàn)鞘液的第二次加速，增加了單位時(shí)間內(nèi)細(xì)胞的通過(guò)流量，從而能夠完成對(duì)預(yù)稀釋血液進(jìn)行白細(xì)胞五分類分析。儀器通過(guò)兩個(gè)通道完成白細(xì)胞分類測(cè)定。在DIFF 通道中增加了利用了可對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞進(jìn)行染色的特殊試劑。激光散射分析技術(shù)是五分類法常用的分析技術(shù)，由于細(xì)胞的物理特性，當(dāng)激光照射到細(xì)胞時(shí)，會(huì)有不同角度的散射光出現(xiàn)。低角度(1176。~5176。)散射光可反映細(xì)胞體積大小信息；中高角度(10176。~20176。)散射光可反映細(xì)胞顆粒的復(fù)雜性信息。綜合這兩個(gè)角度散射光的信息，結(jié)合其他特殊技術(shù)來(lái)完成白細(xì)胞的五分類測(cè)定。標(biāo)本在鞘流的帶動(dòng)下進(jìn)入儀器的檢測(cè)區(qū)域后，激光照射于細(xì)胞之上所發(fā)射出的低角度和中高角度散射光信號(hào)可表現(xiàn)出細(xì)胞大小和內(nèi)容物復(fù)雜程度（包括細(xì)胞內(nèi)顆粒等）的特性信息，經(jīng)儀器檢測(cè)分析，將其分布在一個(gè)二維空間的散點(diǎn)圖中，可區(qū)分淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞。而化學(xué)染色技術(shù)可進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞的準(zhǔn)確判定。在WBC/BASO 通道中通過(guò)強(qiáng)溶型試劑和特異性染色技術(shù)，可保留完整的嗜堿性粒細(xì)胞，并對(duì)其進(jìn)行特異性修飾，同時(shí)破壞其它四類白細(xì)胞，使之形成膜包核狀態(tài)，在激光的照射下同樣形成兩個(gè)角度的散射光，完整的嗜堿性粒細(xì)胞體積偏大，其他類別白細(xì)胞體積變小，通過(guò)激光信號(hào)的強(qiáng)弱來(lái)計(jì)數(shù)嗜堿性粒細(xì)胞并在該通道中計(jì)數(shù)白細(xì)胞總數(shù)。該方法可以有效排除難溶性紅細(xì)胞、巨大血小板、血小板聚集及其它非細(xì)胞顆粒等因素對(duì)計(jì)數(shù)的影響，保證嗜堿性粒細(xì)胞及WBC 總數(shù)的精確分類和計(jì)數(shù)。第五節(jié)核酸熒光染色技術(shù)在血液分析儀的最新應(yīng)用一、概述目前，五分類血液分析儀已經(jīng)為許多大中型醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室所使用。五分類儀器不同于三分類儀器的主要區(qū)別在于：為了精確定量地檢測(cè)白細(xì)胞的五種成份，各種五分類血液分析儀開(kāi)始采用多種物理學(xué)原理（電阻抗、光散射、高頻波技術(shù)），甚至設(shè)置專用檢測(cè)通道和化學(xué)染色方法檢測(cè)數(shù)目最少的嗜酸、嗜堿性粒細(xì)胞。而高檔次的五分類血液分析儀，除了檢測(cè)正常白細(xì)胞五項(xiàng)分類以外，還致力于高靈敏地檢測(cè)幼稚、異常成份。對(duì)于外周血中的幼稚成份，過(guò)去一般依賴于顯微鏡鏡檢。而普通血液分析儀對(duì)異常標(biāo)本報(bào)警的靈敏度有限，常常造成漏報(bào)?；蛘邽榱藴p少這種情況而提**性報(bào)警率（通過(guò)降低儀器報(bào)警的閾值），提高了復(fù)片的比例從而造成假陽(yáng)性率偏高，失去了過(guò)篩的意義。鑒于以上這些問(wèn)題， SYSMEX 近年來(lái)開(kāi)始致力于通過(guò)化學(xué)染色方法對(duì)幼稚成份的標(biāo)本進(jìn)行自動(dòng)化檢測(cè)，這相對(duì)于一般的陽(yáng)性報(bào)警（即提供一種可能性）要進(jìn)步了很多。對(duì)于紅細(xì)胞系統(tǒng)，幼稚成份主要是網(wǎng)織紅細(xì)胞和有核紅細(xì)胞檢測(cè)，提供定量的參數(shù)甚而可以對(duì)RET 成熟度作進(jìn)一步的分類。在白細(xì)胞中，幼稚成份根據(jù)形態(tài)學(xué)的不同包括原始細(xì)胞、核左移細(xì)胞、幼稚粒細(xì)胞、異常/ 異型淋巴等。能否采用特殊的方法學(xué)（如核酸染色方法）高靈敏度地測(cè)得幼稚白細(xì)胞的存在，甚至提供定量的參數(shù)，是儀器優(yōu)劣的標(biāo)志之一。除了幼稚細(xì)胞以外，其它一些異常標(biāo)本的檢出率和準(zhǔn)確性也通過(guò)技術(shù)的進(jìn)步而得到提高。對(duì)于巨大血小板、血小板凝集、小紅細(xì)胞或細(xì)胞碎片等標(biāo)本，使用傳統(tǒng)的電阻抗原理往往無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)的，而新的核酸染色技術(shù)結(jié)合光學(xué)流式原理則可以較好地解決。因此，可以靈敏、準(zhǔn)確地檢測(cè)出幼稚的紅、白細(xì)胞存在（而非提供可能性），并具有血小板的形態(tài)辨識(shí)功能，成為血液分析儀發(fā)展的最前沿的功能。二、核酸熒光染色技術(shù)a. 正常五項(xiàng)分類的分析應(yīng)用由于電阻抗原理的局限性，二分群、三分群儀器都無(wú)法準(zhǔn)確地檢測(cè)出淋巴、單核、嗜酸性、嗜堿性、嗜中性細(xì)胞。為了能夠從細(xì)胞體積大小到內(nèi)部結(jié)構(gòu)全面分析細(xì)胞并得到準(zhǔn)確的白細(xì)胞分類結(jié)果，各種型號(hào)的五分類儀器采用了各項(xiàng)技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用于血液細(xì)胞的分析，包括物理原理（電阻抗、散射光、高頻波/ 射頻等）、化學(xué)原理（特異性溶血、普通顆粒染色、酶染色、核酸染色）。在最新推出的SYSMEX XE2100 系列、XT2000i/1800i 系列五分類血液分析中，半導(dǎo)體激光作為光源將光束照射在流式細(xì)胞室內(nèi)的白細(xì)胞，通過(guò)不同角度的散射光可以反映細(xì)胞外部的體積和內(nèi)部顆粒復(fù)雜程度的信息。其中側(cè)向信號(hào)用以反映細(xì)胞內(nèi)部信息（主要是顆粒的復(fù)雜性）。試劑中增加了特異性針對(duì)DNA/RNA 染色的熒光染料Polymethine( 聚次甲基染料) 。激光照射后產(chǎn)生熒光信號(hào)，和側(cè)向散射光一道繪制成二維散點(diǎn)圖進(jìn)行白細(xì)胞分類。b. 幼稚白細(xì)胞分析的應(yīng)用白細(xì)胞中的幼稚成份在臨床上具有顯著意義。過(guò)去，此類標(biāo)本主要依靠人工鏡檢。隨著血液分析儀檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，儀器對(duì)于幼稚白細(xì)胞的報(bào)警提示越來(lái)越靈敏。通過(guò)一些特異性的化學(xué)手段，五分類儀器還可以進(jìn)行幼稚白細(xì)胞的定量檢測(cè)。SYSMEX XE/XT 系列采用核酸熒光染色后，根據(jù)細(xì)胞成熟度的不同可以體現(xiàn)在其熒光信號(hào)的強(qiáng)弱上，其白細(xì)胞分類通道出正常細(xì)胞分類外，還有兩個(gè)幼稚白細(xì)胞的定量參數(shù)： IG （幼稚粒細(xì)胞）和Other （原始細(xì)胞/ 異常淋巴）。臨床研究表明IG 可以作為感染性疾病、白血病、炎癥的有用參數(shù)，另外也提示治療的預(yù)后和療效監(jiān)測(cè)2. 在紅細(xì)胞、血小板系分析的應(yīng)用a. 光學(xué)染色法檢測(cè)PLT通過(guò)光學(xué)技術(shù)，可以在一定程度上改善電阻抗原理僅僅判斷細(xì)胞體積所帶來(lái)的局限性，提高了紅細(xì)胞和血小板的準(zhǔn)確性。而現(xiàn)代生物染色技術(shù)的發(fā)展，使更加特異性的核酸染色法與光學(xué)技術(shù)結(jié)合成為可能。在SYSMEX XE2100 、XT2000i 血液分析儀上，檢測(cè)血小板的方法增添到兩種。儀器的紅細(xì)胞和血小板檢測(cè)通道采用鞘流電阻原理，常規(guī)標(biāo)本即以此為檢測(cè)手段。當(dāng)一些特殊標(biāo)本混有大型血小板或小球性紅細(xì)胞時(shí)，二者之中會(huì)有一部分具有相同的體積使電阻法無(wú)法準(zhǔn)確區(qū)分，儀器還可以使用光學(xué)染色法檢測(cè)(633nm 波長(zhǎng)的半導(dǎo)體激光束，染料為Plymethine 和Oxazine) 。血小板由于體積較小，但顆粒中存在有少量RNA ，被染料輕微著色而激發(fā)出熒光，此時(shí)得到的血小板結(jié)果更加可信。b. 網(wǎng)織紅細(xì)胞分析網(wǎng)織紅細(xì)胞是晚幼紅細(xì)胞脫核后與成熟紅細(xì)胞之間的過(guò)渡細(xì)胞，是反映骨髓造血功能的重要指標(biāo)。目前用自動(dòng)分析儀進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞分析的技術(shù)已經(jīng)取得很大進(jìn)展。隨著五分類儀器技術(shù)日臻發(fā)展， Sysmex XE2100 、XT2000i 具備了內(nèi)置式的全自動(dòng)網(wǎng)織紅檢測(cè)功能。采用激光流式原理和細(xì)胞核酸染色。除了進(jìn)行自動(dòng)的RET 數(shù)目和百分比計(jì)數(shù)外，還可以通過(guò)核酸染色得到的熒光信號(hào)強(qiáng)度區(qū)分低、中、高熒光強(qiáng)度的網(wǎng)織紅（ LFR 、MFR 、HFR ）。由于幼稚的網(wǎng)織紅熒光信號(hào)較強(qiáng)， MFR 和HFR 之和即反映未成熟網(wǎng)織紅的一個(gè)有用參數(shù)。桂林優(yōu)利特公司研發(fā)的URIT系列五分類血細(xì)胞分析儀，全系產(chǎn)品具有網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)功能，提供網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)RET、網(wǎng)織紅細(xì)胞比率RETIC和未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞值IRF三項(xiàng)參數(shù)。c. 有核紅細(xì)胞分析有核紅細(xì)胞作為幼稚的紅細(xì)胞在治療監(jiān)測(cè)和鑒別診斷時(shí)有重要臨床意義。而且，有核紅細(xì)胞體積與淋巴細(xì)胞相仿或略小，大多數(shù)儀器對(duì)這樣的標(biāo)本往往會(huì)誤計(jì)，這樣不但漏報(bào)了病理標(biāo)本，而且造成白細(xì)胞（淋巴細(xì)胞）結(jié)果假性升高。隨著五分類儀器的出現(xiàn)，儀器報(bào)警系統(tǒng)開(kāi)始可以提示其存在的可能性，供操作人員鏡檢復(fù)核。真正采用染色手段來(lái)自動(dòng)化地定量檢測(cè)有核紅細(xì)胞的功能，出現(xiàn)在SYSMEX XE2100 和XE2100L 上。XE2100 儀器單獨(dú)設(shè)置檢測(cè)有核紅細(xì)胞的通道，特殊的溶血素將紅細(xì)胞完全破壞，有核紅細(xì)胞被裸核并收縮，而白細(xì)胞被保留。核酸熒光染色Polymethine 對(duì)標(biāo)本染色后，白細(xì)胞細(xì)胞核和胞質(zhì)內(nèi)核酸的染色總量遠(yuǎn)大于同樣被染色但被收縮的有核紅細(xì)胞，通過(guò)半導(dǎo)體激光照射后熒光信號(hào)和前向散射光信號(hào)均有區(qū)別。由此準(zhǔn)確計(jì)得有核紅細(xì)胞數(shù)目及占白細(xì)胞的比例。（作者:中國(guó)體外診斷網(wǎng)、南昌百特生物高新技術(shù)股份有限公司董事長(zhǎng): 練新廷；桂林優(yōu)利特醫(yī)療電子有限公司執(zhí)行總裁: 鄭澤輝； 南昌百特生物高新技術(shù)股份有限公司高級(jí)工程師: 彭祝憲）第七節(jié) 血液分析儀應(yīng)用現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì)一、血液分析儀市場(chǎng)分布現(xiàn)狀自從血液分析儀發(fā)明以來(lái)，隨著科技不斷發(fā)展及中國(guó)醫(yī)療科研實(shí)力的不斷增強(qiáng)，目前已經(jīng)形成了國(guó)內(nèi)外品牌充分競(jìng)爭(zhēng)的市場(chǎng)，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，截止到2015年12月31日，各品牌在不同的層次的醫(yī)療機(jī)構(gòu)占有的市場(chǎng)份額也不同，在二甲以上醫(yī)療機(jī)構(gòu)日本SYSMEX占據(jù)了中國(guó)血液分析儀約40%以上市場(chǎng)份額，在二甲以下醫(yī)療機(jī)構(gòu)中國(guó)深圳邁瑞公司占據(jù)了中國(guó)血液分析儀約40%以上市場(chǎng)份額，其中高端5分類也是由日本SYSMEX和邁瑞公司占據(jù)市場(chǎng)。三分類血液分析儀市場(chǎng)主要由中國(guó)本土血液分析儀制造廠商占據(jù)，其中深圳邁瑞公司、南昌百特公司、桂林優(yōu)利特、江西特康公司等占據(jù)了主要三分類市場(chǎng)。二、血液分析儀臨床應(yīng)用現(xiàn)狀全自動(dòng)血液分析儀目前已是國(guó)內(nèi)外臨床檢驗(yàn)最常用的篩檢儀器之一,與傳統(tǒng)方法相比,有著精度高,速度快,易操作,功能強(qiáng)的強(qiáng)勁優(yōu)勢(shì),尤其是現(xiàn)有