淮北聯(lián)通內網信息安全月報20xx年4月(編輯修改稿)
2024-11-16 22:51 本頁面
【文章內容簡介】 、戊型肝炎病毒的基因分型(基因1型,2型,3型及4型,其中基因3型及基因4型為人畜共患)、戊型肝炎的流行病學及診斷治療、,學位論文 2012年12月 作者：石穎學位授予單位：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院摘要：自上世紀以來,人類歷史上曾四次發(fā)生流行性感冒的大流行。流感是由流感病毒引起的世界范圍的傳染性疾病,以損害呼吸系統(tǒng)為主,嚴重伴有主要并發(fā)癥,對人類的健康造成嚴重的威脅。在1918年爆發(fā)的“西班牙流感”疫情,造成近4000萬人的死亡。1957年及1968年爆發(fā)的兩次大流感,全球感染人數均高達30%,死亡人口超過30萬人。本世紀初出現(xiàn)的H5N1高致病性禽流感和2009年的甲型H1N1流感疫情,再次嚴重威脅人們的健康,其危害性日益得到人們的關注與重視。造成流感流行的主要原因是:流感病毒易發(fā)生抗原變異,且傳染性強,傳播迅速,易發(fā)生大范圍流行。接種疫苗是目前有效防治流感的手段之一?，F(xiàn)有的流感疫苗接種分為注射滅活疫苗與噴鼻活疫苗兩種,然而目前仍以注射免疫為主。但是注射疫苗接種方式繁瑣、不能產生有效的黏膜免疫和細胞免疫應答效果、對于流感各亞型之間的交叉保護作用欠佳,而且對于特殊人群、如老人和兒童的免疫保護效果更加不能達到理想效果,這對流感的防控帶來極大的挑戰(zhàn)。噴鼻疫苗的出現(xiàn)和飛速發(fā)展無疑為流感疫苗的研制及發(fā)展帶來了新的思路和發(fā)展空間。已有研究表明,呼吸道黏膜是流感病毒感染機體的部位,也是機體對外源抗原產生免疫應答、防御病原微生物感染的免疫器官。黏膜系統(tǒng)是人體抵御外界抗原入侵的第一道防線,鼻黏膜途徑的疫苗接種更接近于自然感染,且抗原用量較少,即能夠誘導黏膜免疫應答反應。噴鼻免疫能夠通過在黏膜的局部免疫引發(fā)系統(tǒng)免疫,從而加強病原體感染的免疫防御機制,提高了免疫的有效性,亦避免了注射免疫帶來的繁瑣過程。噴鼻免疫的瓶頸問題在于其量效難以把握。噴鼻免疫過程中,黏膜免疫系統(tǒng)的復雜性及處于免疫抑制占優(yōu)勢的狀態(tài)都可影響疫苗發(fā)揮作用,且疫苗進入鼻腔以后會有少量進入口腔和消化道,或流出體外。故此,噴鼻疫苗如何增效及量效關系,是噴鼻疫苗的研制中需要解決的重要問題。本研究中,以殼聚糖、殼聚糖季銨鹽、殼聚糖水凝膠和殼聚糖季銨鹽水凝膠分別作為流感噴鼻疫苗的傳遞系統(tǒng),以甲型H1N1流感裂解病毒和甲型H1N1流感滅活全病毒作為待選抗原,以IL1β、IL1IL33和可溶性ViE作為候選佐劑,制備不同噴鼻流感疫苗的組合物,通過動物實驗篩選噴鼻甲型H1N1流感疫苗的組成。結果發(fā)現(xiàn),當殼聚糖季銨鹽水凝膠作為疫苗傳遞系統(tǒng)、IL1β作為黏膜佐劑、甲型H1N1流感裂解病毒作為抗原時,所組成的組合物免疫效果最佳。進一步通過在大腸桿菌中高效表達并分離純化了重組人IL1β蛋白佐劑,并檢測其蛋白表達率、純度及生物活性。將rIL1β蛋白作為作為甲型H1N1噴鼻流感裂 解疫苗的佐劑免疫小鼠,評價其作為佐劑的有效性,由此進行噴鼻流感三價裂解疫苗的制備和免疫效果的初步研究。本研究主要包括以下三部分:噴鼻流感疫苗傳遞系統(tǒng)、佐劑和抗原的篩選與確定。其研究進展如下。(1)噴鼻流感疫苗傳遞系統(tǒng)的篩選:以殼聚糖、殼聚糖季銨鹽、殼聚糖水凝膠和殼聚糖季銨鹽水凝膠為待選疫苗載體系統(tǒng),分別以甲型H1N1流感裂解病毒為疫苗抗原(4μg)與rIL1β(2μg)制備噴鼻組合物流感疫苗,同時以單抗原無佐劑組作為對照組,PBS組為空白組,分別免疫Balb/c小鼠,共免疫兩次,間隔時間為兩周。通過檢測小鼠血清中IgG效價、血抑效價(HI)和肺、鼻沖洗液中sIgA效價,初步評價其有效性。結果表明,殼聚糖季銨鹽水凝膠作為噴鼻疫苗傳遞系統(tǒng)的作用好于殼聚糖、殼聚糖季銨鹽和殼聚糖水凝膠,可有效誘導產生機體的體液免疫和黏膜免疫。在此基礎之上,對殼聚糖季銨鹽水凝膠的用量進行篩選,制備不同濃度 3 的水凝膠抗原組合物,使水凝膠與抗原的比分別為1:1:2和1:4,從結果可看出,當水凝膠與抗原的比為1:1時,疫苗免疫效果最佳。(2)噴鼻流感疫苗抗原的篩選:以甲型H1N1流感裂解病毒和滅活全病毒作為疫苗抗原,并分別以殼聚糖季銨鹽水凝膠作為疫苗傳遞系統(tǒng)(1:1)與rIL1β(2μg)制備噴鼻組合物流感疫苗,分別免疫Balb/c小鼠,共免疫兩次,間隔時間為兩周。通過檢測小鼠血清中IgG效價、血抑效價(HI)和肺、鼻沖洗液中sIgA效價,對抗原進行初步篩選。結果表明,與甲型H1N1流感滅活全病毒相比,甲型H1N1流感裂解病毒作為噴鼻疫苗的抗原引起的免疫應答水平較好。(3)噴鼻流感疫苗黏膜佐劑的篩選:以IL1β、IL1IL3可溶性ViE為待選疫苗佐劑,各2μg劑量,分別與殼聚糖季銨鹽水凝膠傳遞載體與甲型H1N1流感裂解病毒抗原(4μg)以1:1比例充分混合,制備噴鼻流感疫苗,分別免疫Balb/c小鼠,共免疫兩次,間隔時間為兩周。通過血清檢測其IgG及其亞型抗體效價、血抑效價,鼻、肺、陰
電大資料相關推薦
鄂ICP備17016276號-1