【文章內容簡介】 品送國家參比實驗室進行核酸序列分析，WB的敏感性一般不低于初篩實驗，但它的特異性很高，這主要是基于HIV不同抗原組分的分離以及濃縮和純化，能夠檢測針對不同抗原成分的抗體，因而能夠用WB方法鑒別初篩實驗的準確性。從WB確認試驗結果看出，初篩試驗盡管選擇質量較好的試劑，如第三代ELISA，仍會有假陽性出現(xiàn)，必須通過確認試驗才能得出準確結果。（二）免疫熒光實驗（IFA）IFA法經濟、簡便、快速，曾被FDA推薦用于WB不確定樣品的診斷。但需要昂貴的熒光顯微鏡，需要受過良好訓練的技術人員、觀察和解釋結果易受主觀因素的影響，結果不宜長期保存，IFA不宜在一般的實驗室開展和應用。2012年醫(yī)學檢驗考試臨檢基礎知識輔導：重視血常規(guī)的復檢工作目前血細胞分析儀己經普及到縣醫(yī)院或衛(wèi)生院，這對提高血細胞常規(guī)的準確性和重復性，減輕工作人員勞動強度起促進作用。但是我們應該認識到血細胞分析儀還是一個過篩工具，至今最先進的全自動血細胞分析儀還不能完全取代人工檢查，仍然有部分標本需要復檢。據(jù)我所知有的醫(yī)院有了血細胞分析儀，把人工操作的工具、試劑全丟棄，基本上不再復檢了。有的單位即使復檢，也沒有復檢標準，隨心所欲，其復檢率只有百分之幾，這顯然是不負責任的。現(xiàn)就此問題談談個人看法。一、為什么要復檢？考試用書 血細胞分析儀測定原理雖有不同，但它的各種項目的閾值是人設定的，而且是固定的，可是病人血細胞變化是千姿百態(tài)，有部分細胞難以識別或認錯干擾其它細胞計數(shù)，如有核紅細胞可影響白細胞計數(shù)；細胞碎片、血小板聚集可影響血小板計數(shù)等。尤其是白細胞形態(tài)學分類與血細胞分析儀的白細胞分類有本質上的不同，三分群僅僅是根據(jù)細胞大小來分而己，即使先進的五分類也與形態(tài)學也有很大差異，又如中性粒細胞毒性病變、變異淋巴細胞、瘧原蟲等臨床需要的指標無法顯示；有的幼稚細胞、有核紅細胞也不能區(qū)分；各參數(shù)之間有時還存在互相干擾?？傊?，血細胞分析儀的結果僅僅是屬于過篩而己，不能完全代替人工鏡檢。根據(jù)1987年我赴日本考察時，日本對三分群儀器白細胞分類是不收費的，而且每一例仍然需要涂片染色，在顯微鏡下重新分類后才能報告。1989年Coulter公司制定了復檢標準，調查了11個床位及性質不同的醫(yī)療單位，它們均使用該公司的三分群血細胞分析儀，根據(jù)該公司的復檢標準，其復檢率為15%～60%，平均為40%，使手工分類減少40～85%，平均減少了60%，也就是說用節(jié)省下來的時間好好為40%需要分類的病人服務。最近日本名古屋大學醫(yī)學部附屬醫(yī)院報告，他們用SysmexXE2100（五分類）%.再次證明當前最先進血細胞分析儀也不能完全替代人工檢查。由于沒有復檢而產生的漏檢白血病、異常淋巴細胞、瘧原蟲，還有EDTA依賴性血小板假性降低等己引起的醫(yī)療糾紛，應該引起我們深思。二、復檢內涵尚待統(tǒng)一有人認為“復檢”就是要在鏡下重新進行白細胞分類計數(shù)而己，這是偏面的。復檢內涵應包據(jù)：對血細胞分析儀測定的全部結果進行評估，必要時包括原標本重查，或重新用人工復查等。因此血常規(guī)手工操作不能丟；2012年醫(yī)學檢驗考試臨檢基礎知識輔導：精液檢查的具備條件受檢者，經歷一段經常排精過程后，禁房事5－7天（上次排精到取標本間隔時間至少不得少于100小時）；備大口有蓋清潔干燥容器一個，以手淫方式獲取精液，一次全部射入容器，蓋上蓋，記錄標本離體時間；貼身保溫，30分鐘內送到化驗室，并向檢驗員提供標本取出時間。精液常規(guī)觀察：精液總容量（毫升），精子活動情況，精子密度（個/毫升），精液液化時間（標本取出到精液液化的時間），不動精子（個/高倍視野）等。見不動精子，須染色方可區(qū)分：不活動的精子、死精子、未成熟精子等。找不到精子必須離心后檢驗，仍然找不到精子；方可報告無精。經三次取樣化驗，結果仍然找不到精子方可確認無精子癥。2012年醫(yī)學檢驗考試免疫檢驗輔導：血漿的鑒別方法血漿是血液的液體成分，血細胞懸濁于其中。人體含有27503300毫升血漿，約占血液總體積的55%.血漿的絕大部分是水（體積的90%），其中溶解的物質主要是血漿蛋白，還包括葡萄糖、無機鹽離子、激素以及二氧化碳。血漿的主要功能是運載血細胞，同時也是運輸分泌產物的主要媒介。將新鮮血液離心，使血細胞沉降，上層淡黃色清液即是血漿。血漿與血清的區(qū)別是血清中不含纖維蛋白原等凝血因子。2012年醫(yī)學檢驗考試免疫檢驗輔導：血漿的主要作用提供基本營養(yǎng)物質：氨基酸、維生素、無機物、脂類物質、核酸衍生物等，是細胞生長必須的物質。提供激素和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質激素（氫化可的松、地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。提供結合蛋白：結合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉鐵蛋白攜帶鐵。結合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用。提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷。對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用：有一些細胞，如內皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，現(xiàn)在則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經被廣泛用于貼壁細胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護細胞免受機械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時，粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子，他們在代謝解毒中起重要作用，如SeO3，硒等。2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：離心技術的工具離心機（centrifuge）是實施離心技術的裝置。離心機的種類很多，按照使用目的，可兩類，即制備型離心機和分析型離心機。前者主要用于分離生物材料，每次分離樣品的容量比較大，后者則主要用于研究純品大分子物質，包括某些顆粒體如核蛋白體等物質的性質，每次分析的樣品容量很小，根據(jù)待測物質在離心場中的行為（可用離心機中的光學系統(tǒng)連續(xù)地監(jiān)測），能推斷其純度、形狀和相對分子質量等性質。兩類離心機由于用途不同，故其主要結構也有差異。通常所使用的離心機根據(jù)轉子轉速大小的不同可分為普通離心機、高速離心機和超速離心機三類2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：離心技術的概況離心技術是利用物體高速旋轉時產生強大的離心力，使置于旋轉體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達到濃縮或與其他顆粒分離之目的。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細胞、細胞器、病毒和生物大分子等。離心機轉子高速旋轉時，當懸浮顆粒密度大于周圍介質密度時，顆粒離開軸心方向移動，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質的密度時，則顆粒朝向軸心方向移動而發(fā)生漂浮。常用的離心機有多種類型，一般低速離心機的最高轉速不超過6000rpm，高速離心機在25000rpm以下，超速離心機的最高速度達30000rpm以上。根據(jù)離心原理，可設計多種離心方法，常見下列三大類型：。通過逐步增加相對離心力，使一個非均相混合液內形狀不同的大小顆粒分步沉淀。離心前，離心管內先裝入分離介質（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質，然后加入樣品進行離心，具體又可分為：1）速度區(qū)帶離心法。離心前，離心管內先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內，達到彼此分離的目的。本法可分離各種細胞、病毒、染色體、脂蛋白、DNA和RNA等生物樣品。2）預制梯度等密度離心法。要求在離心前預先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質，常用介質有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調節(jié)樣品液密度。離心后，不同密度的樣品顆粒到達與自身密度相等的梯度層，即達到等密度的位置而獲得分離。3）自成梯度等密度離心法。某些密度介質經過離心后會自成梯度，例Percoll，可迅速形成梯度，CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經長時間離心后也可產生穩(wěn)定的梯度。需要離心分離的樣品可和梯度介質先均勻混合，離心開始后，梯度介質由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時，可以帶動原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達與其自身密度相等的梯度層里，即達到等密度的位置而獲得分離。根據(jù)被分離物質的浮力密度差別進行分離，所用的介質起始密度約等于被分離物質的密度，介質在離心過程中形成密度梯度，被分離物質沉降或上浮到達與之密度相等的介質區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：離心技術的概況離心技術是利用物體高速旋轉時產生強大的離心力，使置于旋轉體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達到濃縮或與其他顆粒分離之目的。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細胞、細胞器、病毒和生物大分子等。離心機轉子高速旋轉時，當懸浮顆粒密度大于周圍介質密度時，顆粒離開軸心方向移動，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質的密度時，則顆粒朝向軸心方向移動而發(fā)生漂浮。常用的離心機有多種類型，一般低速離心機的最高轉速不超過6000rpm，高速離心機在25000rpm以下，超速離心機的最高速度達30000rpm以上。根據(jù)離心原理，可設計多種離心方法，常見下列三大類型：。通過逐步增加相對離心力，使一個非均相混合液內形狀不同的大小顆粒分步沉淀。離心前，離心管內先裝入分離介質（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質，然后加入樣品進行離心，具體又可分為：1）速度區(qū)帶離心法。離心前，離心管內先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內，達到彼此分離的目的。本法可分離各種細胞、病毒、染色體、脂蛋白、DNA和RNA等生物樣品。2）預制梯度等密度離心法。要求在離心前預先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質，常用介質有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調節(jié)樣品液密度。離心后，不同密度的樣品顆粒到達與自身密度相等的梯度層，即達到等密度的位置而獲得分離。3）自成梯度等密度離心法。某些密度介質經過離心后會自成梯度，例Percoll，可迅速形成梯度，CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經長時間離心后也可產生穩(wěn)定的梯度。需要離心分離的樣品可和梯度介質先均勻混合，離心開始后，梯度介質由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時，可以帶動原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達與其自身密度相等的梯度層里，即達到等密度的位置而獲得分離。根據(jù)被分離物質的浮力密度差別進行分離，所用的介質起始密度約等于被分離物質的密度，介質在離心過程中形成密度梯度，被分離物質沉降或上浮到達與之密度相等的介質區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：動脈血氣標本采集方法一、抗凝劑的配制首先推薦使用市場上有售的專用采血針，愿意自己配制抗凝采血針的用戶，%NS50ml+肝素鈉針劑2支（12500U）配制成肝素稀釋液備用，并做好無菌儲藏。每抽血氣前，用2ml注射器抽取肝素稀釋液2ml，完全濕潤整個針管后棄去肝素液，殘留在針頭及針管頭部死腔內的肝素液即可起到抗凝作用?？鼓齽┥倭藭寡耗?，堵塞血氣分析儀的流路系統(tǒng)，抗凝劑多了會影響血氣和離子的檢測結果，大劑量的抗凝劑會嚴重使離子鈣偏低，誤導臨床。二、采血方法的選擇成人：用肝素化的玻璃注射器或一次性注射器穿刺，采血部位首選橈動脈，次選股動脈小兒：首選用顳淺動脈或頭皮小動脈，嚴格消毒后，用肝素化的5號頭皮針連接2ml注射器，待動脈血流至注射器乳頭時，立即用小止血鉗分別夾住頭皮針塑料軟管首尾兩端（），然后拔出針頭立即混勻送檢。用肝素化的注射器穿刺，采血部位首選小兒橈動脈，小嬰兒可用顳淺動脈取血，取完血一定要密封。因技術條件限制，不能反復動脈穿刺時，早產兒與小嬰兒可在足后跟用肝素化毛細管采取動脈化毛細血管的血亦可。動脈化毛細血管采血，用不超過42～45℃的濕巾熱敷采血部位皮膚5～15分鐘，使血液增加，血流加速，達到動脈化，然后穿刺，穿刺要深，使血流快速自動流出，棄去第一滴血，不能擠壓，用肝素化的毛細管吸?。ńㄗh采用廠家配套提供的專用毛細管），吸滿后一定要密封，混勻后立即送檢。未充分動脈化的毛細管血的PO2偏低，對PH、PCO2和HCO3—的測定結果影響不明顯。三、采血后處理采血后針尖或毛細吸血管兩端立即用橡皮帽或橡皮泥封住，防止空氣氣泡進入，并立即充分混勻達到抗凝目的，并立即送檢，從采血到送檢不宜超過20分鐘，以免血細胞代謝耗氧，使PO2和PH值下降PCO2升高。若不能立即測定，應將血氣標本保存在2～8℃容器內，但即使這樣待測時間也不宜超過2小時。2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：VC影響血糖尿糖檢測解放軍總醫(yī)院檢驗中心主任叢玉隆指出，維生素c（vc）可以還原尿糖檢測試劑中的酶，會導致尿糖檢測的結果失真，對于糖尿病患者來說，服用維生素要謹慎。第一次遇到尿糖檢測失真是在1984年，叢玉隆還是醫(yī)院檢驗科的檢驗員。一天晚上急診科一患者化驗的結果是血糖8毫克。急診醫(yī)生一看檢驗報告馬上產生疑問：怎么會是8毫克？人的正常血糖最低是80毫克，如果真是8毫克，那這個人早就死了。于是檢驗科再次對病人的血樣化驗，結果還是8毫克，叢玉隆仔細檢查了檢驗程序和檢驗設備，都沒發(fā)現(xiàn)問題，但檢驗結果確實與病人實際病情不符。叢玉隆再仔細檢查后，發(fā)現(xiàn)在抽取病人血樣時，患者正輸著vc，結果終于弄明白了，原來是患者血樣中含有的大量vc還原了檢驗試劑中的酶，干擾了病人的血糖檢驗結果。vc的影響到底有多大？叢玉隆再次做了試驗，一組人一天吃3片vc（每片100毫克），第二天檢測結果是每毫升尿含vc30毫克。一組人一天吃6片vc，第二天尿含vc90毫克。一組人一天吃了9片vc，第二天尿含vc是300毫克。叢玉隆說，假如一個糖尿病人，沒吃vc以前的尿糖是2個加號，吃了9片vc后，就可能是1個加號，甚至會出現(xiàn)陰性結果。叢玉隆進行的另一個實驗證實，給健康人靜脈推注vc2000毫克，然后在不同時間段取尿，