大型豬場豬疫病監(jiān)控(編輯修改稿)
2024-10-03 23:46 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 說明待檢血清中g(shù)E抗體的量越多。加入終止液后，用酶標(biāo)儀在650nm處進(jìn)行吸光度測定。將待檢樣品的吸光度除以陰性對照組的平均吸光度得到S/N值，待檢血清樣品gE抗體量自然也與S/N值或反比。試劑中所包括的試劑：A．PRV包被的酶標(biāo)板B．辣根過氧化物酶標(biāo)記的gE單克隆抗體C．10倍濃縮的清洗液D．樣品稀釋液（含迭氮鈉作為防腐劑）E．TMBG．對照用的陰性豬血清H．陽性對照用的gE抗體（用迭氮鈉防腐）I．終止液（%氫氟酸）檢測方法：1．待檢樣品的準(zhǔn)備 用樣品稀釋液將待檢血清稀釋2倍（如用200ml樣品稀釋液稀釋200ul的待檢樣品），必須將樣品混勻后才能加入包被好的酶標(biāo)板中。2．清洗液的準(zhǔn)備 使用前應(yīng)使?jié)饪s的清洗液達(dá)到室溫，并通過攪拌使沉淀的鹽類充分溶解，用去離子水使?jié)饪s的清洗液稀釋10倍（即30ml濃縮液加270ml水）。3．檢測步驟： 所有試劑必須在達(dá)到室溫才能使用，用前應(yīng)輕輕轉(zhuǎn)動或振蕩混勻。 ⑴取出抗原包被的酶標(biāo)板，在提供的工作表上記錄各待檢樣品欲加在的位置。 ⑵在AAA3孔中加入100ml稀釋的陰性對照(。 ⑶在AAA6孔中加入100ml稀釋的陽性對照。 ⑷在適當(dāng)?shù)目字屑尤?00ml稀釋的待檢樣品。 ⑸在室溫下作用1小時。 ⑹用清洗液將酶標(biāo)板洗3～5次。每次均應(yīng)將孔內(nèi)的清洗液吸去，但應(yīng)避免變干，最后一次清洗后，將酶標(biāo)板在吸水紙或吸水紗布上拍打，除去孔中殘留的清洗液。 ⑺在每個孔中加入100ml過氧化物酶標(biāo)記的gE抗體。 ⑻在室溫下作用20分鐘。 ⑼重復(fù)⑹。 ⑽在每孔中加入底物溶液(TMB)。 ⑾在室溫下作用15分鐘。 ⑿%氫氟酸(終止液)終止反應(yīng)。 ⒀用A650nm波長測定每個樣品和對照的光度并記錄結(jié)果。 ⒁結(jié)果計算。5．測定結(jié)果的處理 ，測定結(jié)果才有效。如測定結(jié)果無效，首先應(yīng)懷疑是操作技術(shù)不當(dāng)所致，應(yīng)在仔細(xì)閱讀產(chǎn)品說明后重新檢測。結(jié)果測定： 樣品值
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