中藥材鑒別技術-交-xxxx11(編輯修改稿)
2025-03-22 12:15 本頁面
【文章內容簡介】 定 免疫鑒定法、電泳鑒別法及DNA分子標記等 光譜檢測鑒定 如紫外、紅外、熒光、 原子吸收及質譜 等 先進儀器設備及技術 如核磁共振波譜、 掃描電鏡 、生物芯片等 一、 中藥材違法制假 情況及 檢測方法分析 二、 DNA分子技術在中藥鑒定方面的應用 DNA分子標記的類型 分 子 標 記 以 電泳技術和分子雜交 為基礎的 DNA標記技術（ RFLP標記 限制性片段長度多態(tài)性 ） 以 電泳技術和 PCR技術 為核心的 DNA標記技術 （ RAPD標記 隨機擴增的 DNA多態(tài)性 、 AFLP標記 擴增片段長度多態(tài)性 、 SSR標記、 SSLP標記、SCAR標記 、 STS標記 ） 以 測序 為基礎的新型的分子標記（ SNP標記、EST標記） 及基因芯片等 DNA分子標記的特點 標記名稱 RFLP RAPD AFLP SSR ISSR SCAR STS CAPs 主要原理 限制酶切Southern雜交 隨機 PCR擴增 限制性酶切結合 PCR擴增 PCR擴增 隨機 PCR擴增 特異PCR擴增 特異 PCR擴增 PCR擴增產物限制性酶切 多態(tài)性水平 中等 較高 非常高 高 高 中等 檢測基因組區(qū)域 單 /低拷貝區(qū) 整個基因組 整個基因組 重復序列 重復序列間隔的單拷貝區(qū) 整個基因組 單拷貝區(qū) 整個基因組 可靠性 高 中 高 高 高 高 高 高 遺傳特性 共顯性 顯性 /共顯性 共顯性 /顯性 共顯 性 顯性 /共顯性 共顯性 顯性 /共顯性 共顯性 DNA質量要求 高， 530μg 中， 10100ng 很高， 50100ng 中， 10100ng 中， 250ng 中， 510ng 高， 50100ng 實驗周期 長 短 較長 短 短 短 短 短 開發(fā)成本 高 低 高 高 低 高 高 高 二、 DNA分子技術在中藥鑒定方面的應用 二、 DNA分子技術在中藥鑒定方面的應用 應用示例 1—— 近緣種之間的鑒定 ? 對紅豆蔻及其混淆品（節(jié)鞭山姜、華山姜、假益智、多花山姜）的 nrDNA ITS區(qū)序列進行分析，成對比較時差異較大，可準確鑒定中藥紅豆蔻及其混淆品。 ? 人參與西洋參及其他混偽品的 DNA分子鑒定。 ? 如甘草藥用資源的整理與鑒定，采用 RAPD分子標記方法比較 4種甘草屬植物光果甘草、烏拉爾甘草、刺甘草和刺果甘草 的遺傳關系。通過 DNA擴增的RAPD指紋圖譜分析，結果發(fā)現(xiàn)富含甘草甜素的 光果甘草和烏拉爾甘草 之間遺傳關系非常相近。這兩者與不含甘草甜素或含量極低的 刺甘草和刺果甘草的遺傳關系則較遠，與植物分類學研究相吻合。 方法：總 DNA提取 → 構建富含 SSR的文庫 → 文庫篩選 → SSR特異性引物的設計 → PCR擴增 → 多態(tài)性分析 應用示例 2— 中藥野生品與栽培品（養(yǎng)殖）的鑒定 如利用簡單序列重復 (SSR)分子標記可以有效鑒定不同天麻居群（紅天麻、烏天麻及黃天麻）的 野生和栽培品種 ，并且利用相應引物均能很好地區(qū)分 野生天麻、無性繁殖天麻及有性繁殖天麻 ，其中有性繁殖天麻均擴增出 2條帶，為雜合子；野生天麻及無性繁殖天麻只擴增出 1條帶，為純合子。 二、 DNA分子技術在中藥鑒定方面的應用 應用示例 3—— 道地性研究 二、 DNA分子技術在中藥鑒定方面的應用 當歸為傘形科植物當歸 Angelica sinensis( Oliv.)Diels的干燥根，自古以來以甘肅崛縣一帶為道地產區(qū)，所產當歸藥材質量最佳，習稱“岷歸”。 應用 RAPD技術對不同產地的當歸樣品進行分析，通過 10個引物在每個樣品中獲得平均為 55個的 DNA片段，在此基礎上構建 18個不同產地當歸樣品的聚類樹狀圖。進一步的分析表明， 地理分布距離越小，當歸的遺傳差異越??；反之，越大； 并且生態(tài)環(huán)境特別是 小生境 對當歸遺傳差異的作用不可忽視。因此藥材的道地性不僅是一個地理意義上的概念，同時具有廣泛的生物學內涵以及豐富的遺傳特性。 應用 ISSR指紋標記技術對來自廣西、廣東、貴州、云南等省區(qū)的鐵皮石斛的8個居群進行 DNA分子鑒別研究，擴增得到 127個條帶，其中多態(tài)性條帶 115個，僅有 2個引物產生的 6個特異性條帶可作為鐵皮石斛 8個居群鑒定的分子標記，由此建立了有效鑒定對鐵皮石斛居群的 ISSR指紋技術 應用示例 4— 動物類中藥的鑒定、 名貴藥材與混偽品的鑒定 ?蘄蛇的鑒定 ： 采用聚合酶鏈式反應法（ PCR），以5′GGCAATTCACTACACAGCCAACATCAACT3′ 和5′CCATAGTCAGGTGGTTAGTGATAC3′ 為引物，供試品凝膠電泳圖譜中，在與對照藥材凝膠電泳圖譜相應的位置上，在 200~300bp應有單一 DNA條帶。 ?烏梢蛇的鑒定 ： 采用聚合酶鏈式反應法（ PCR），以5′GCGAAAGCTCGACCTAGCGAAGGGGACCACA3′ 、5′CAGGCTCCTCTAGGTTGTTATGGGG
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