動物組織與胚胎工程(2)(編輯修改稿)
2025-10-08 20:41 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ，促性腺激素處理的第二天或第三天，注射 PG 同期發(fā)情與超排程序 放栓 發(fā)情鑒定 配種 0123456789 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 7:00 FSH 4ml 18:00 FSH 4 ml 7:00 FSH 18:00 FSH 7:00 FSH 2ml 14:00 PG 6ml 18:00 FSH 2ml 7:00 FSH 14:00 取栓 18:00 FSH 配種 配種 檢查黃體 沖胚移胚 ? 1）母牛發(fā)情后 9— 13天開始肌肉注射促卵泡素 (FSH)， 每次劑量為 50IU， 每天兩次，每次間隔 12h， 連續(xù)注射 4天，共 8次。在首次注射促卵泡素 (FSH)后的 48h、 60h和 72h， 分別肌肉注射氯前列烯醇 。 經(jīng)觀察，母牛在首次用氯前列烯醇后的 3060h相繼出現(xiàn)發(fā)情。 ? 2）在性周期第 16天，肌肉注射孕馬血清(PMSG) 2500IU， 在 2021天時靜脈注射絨毛膜促性腺激素 (HCG)2022IU； 或在性周期第 814天，肌肉注射孕馬血清 2022IU， 48h后用前列腺素 F2α 33mg， 一次肌肉注射。 受體同期發(fā)情處理 ? 1)前列腺素處理法：有溶黃體作用 – 在發(fā)情周期的第 9天以后 ， 注射 PG2α （ 牛 ,羊 )。 ?？稍谧⑸浜?60— 96小時內(nèi)發(fā)情 。 受體牛發(fā)情之日計為 0天 ， 6— 8天內(nèi)進行胚胎移植 。 ? 2） 孕激素處理法：抑制卵泡發(fā)育 – 牛：于處理的第一天 ， 注射雌二醇 2mg， 同時埋植孕酮或放置孕酮 （ 200mg)陰道海綿栓 ， 處理 9~12天 ， 取出埋植或陰道栓后 2~4天內(nèi)可發(fā)情 。 – 羊：每日肌注孕酮 10~20mg， 或經(jīng)陰道海綿栓給予孕酮 50~60mg， 綿羊處理 12~14天 ， 山羊處理 12~18天 ， 在處理的最后一天或撤除海綿栓的前一天 ，給予 PMSG200~250IU， 一般可在停止注射或撤除海綿栓后 2~3天內(nèi)發(fā)情 。 ? 必須用優(yōu)秀的種公畜進行多次配種，一般隔 812小時進行一次配種，直到發(fā)情結(jié)束。 ? 配種前應對種公畜的精液進行質(zhì)量檢查。 ? 優(yōu)秀種公畜不足時，可考慮首次采用本交，以后采用人工授精，也可以全部采用人工授精。 羊同期發(fā)情 —— 放栓 供體超排處理 供體配種 ? 胚胎沖洗液的配制：杜氏磷酸緩沖液 PBS， 布林斯特液 SOF合成輸卵管液 ? 手術法收集胚胎 – 輸卵管沖胚：順向沖胚、逆向沖胚 – 子宮角沖胚 ? 非手術法收集胚胎 – 二路法 – 三路法 ? 較為適用的是含滅活犢血清磷酸緩沖液(pbs)。 其成分：氯化鈉 8g， 氯化鉀 2g，磷酸氫二鈉 ， 磷酸二氫鉀 ，氯化鈣 ， 氯化鎂 ， 丙酮酸鈉32mg， 葡萄糖 1g， 牛血清白蛋白 4g， 卡那霉素 25mg， 酚紅 5mg， 三蒸餾水1000ml。 犢牛血清 20%， ， 20℃保存。 沖胚 供體羊胚胎收集 黃體 ? 收集到的沖洗液靜置，沖洗液分離。 ? 揀胚：將胚胎移至培養(yǎng)液或保存液中。 ? 胚胎鑒定：根據(jù)透明帶、胚胎細胞、發(fā)育階段及細胞在透明帶中的比例確定胚胎級別。 6天收集的胚胎（未揀） 二細胞至四細胞胚胎 ? 胚胎的降溫：使胚胎停止發(fā)育，延長其體外生存時間 ? 體外培養(yǎng)：將胚胎置于體溫條件下，在培養(yǎng)液中，使其繼續(xù)發(fā)育 ? 胚胎冷凍：通過一定的處理程序，將胚胎降溫冷凍后，保存于液氮中 ? 保存的方法可以分為 非冷凍保存 和 冷凍保存 。 ? 非冷凍保存是 1948年，由 等開創(chuàng)的，他們將兔 2細胞胚胎，在同種血清中 37℃ 保存 48小時，移植后產(chǎn)仔。 ? 非冷凍保存主要有三種方法，即 異種動物體內(nèi)保存法、卵和胚胎的 37℃ 保存法和冷藏保存法 。 異種動物體內(nèi)保存法 ? 又稱為 中間受體培養(yǎng)法 ，是指把一種動物的胚胎，移入另一種動物的輸卵管或子宮內(nèi)，短期保存后再取出的方法，但并不是所有的動物都能在另一種動物的輸卵管或子宮內(nèi)存活的。 ? 瓊脂包埋移植法 是指將胚胎移植到 1％的瓊脂液中，用口徑適宜的微吸管把胚胎連同少量瓊脂液一起吸入。當瓊脂凝結(jié)后再將其壓出，胚胎就被封入圓柱形瓊脂小柱中，每個瓊脂小柱放 3－ 5枚胚胎，再把這個瓊脂小柱封入較大的％瓊脂圓柱內(nèi)。然后，通過胚胎移植技術，將瓊脂柱移入中間受體輸卵管中。移植前，預先結(jié)扎輸卵管與子宮的接合部。 ? 直接移植法 是不經(jīng)瓊脂處理，直接移入預先結(jié)扎過的受體輸卵管中。經(jīng)過短期培養(yǎng)后，將胚胎從輸卵管內(nèi)沖出 ，觀察發(fā)育情況。對發(fā)育良好者，移植入同期發(fā)情的同種動物受體內(nèi)，使其產(chǎn)仔。 37℃ 保存法 ? 是指在 37℃ 下，短時間保存卵和
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