第三節(jié)基因工程簡(jiǎn)介舊人教版(編輯修改稿)
2024-12-16 13:16 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1978 for the discovery of restriction enzymes and their application to problems of molecular geics 限制性內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)： (宿主細(xì)胞的限制和修飾作用 ) 限制： 細(xì)菌的自我保護(hù)系統(tǒng)病毒的侵染 修飾： 修飾系統(tǒng)－防止自殺 （ 1） 兩種不同來源的入 噬菌體入 K， 入 B； （ 2） 能高頻感染各自大腸桿菌宿主細(xì)胞 K株 ， B株 （ 3） 當(dāng)它們分別與其它宿主菌交叉混合培養(yǎng)時(shí) ， 感染下降數(shù)千倍 。 （ 4） 一但 入 K 噬菌體在 B株成功 ，由 B 株繁殖出 入 K 后代 ， 能感染 B 株 , 不能感染原來 K株 . 限制性內(nèi)切酶對(duì)抗外來 DNA 細(xì)菌細(xì)胞 病毒 病毒 DNA 限制性內(nèi)切酶 病毒注入 DNA分子 限制性內(nèi)切酶切割入侵的 DNA 切 割 修飾酶 EcoR I修飾酶 加甲基 特點(diǎn) 1） 識(shí)別序列： 4， 5 或 6個(gè)堿基對(duì) EcoR I識(shí)別 5’G/AATTC 3’ 序列 3’CTTAA/G 5’ 2） 180度旋轉(zhuǎn)對(duì)稱回文結(jié)構(gòu) ， 對(duì)稱軸在第三 ， 四堿基之間 。 3）任何一個(gè) DNA分子，每 9對(duì)堿基出現(xiàn)一個(gè) II類酶切口。 限制性內(nèi)切酶及其緩沖液 （ DNA ligase） DNA雙鏈分子上相鄰 3’羥基和 5’磷酸基團(tuán)共價(jià)結(jié)合，形成 3’5’磷酸二酯鍵，使原來斷開的缺口重新連接起來。 DNA片斷怎么連起來？ 載體的三大功能： 1） 為外源基因提供進(jìn)入受體細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力 。 2） 為外源基因提供在受體細(xì)胞的的復(fù)制能力或整合力 。 3）為外源基因提供在受體細(xì)胞的的擴(kuò)增和表達(dá)能力。 用什么方法將目的基因送入細(xì)胞？ 假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制將怎樣 “分子運(yùn)輸車”應(yīng)該具備什么特點(diǎn)？ 理想載體具備四個(gè)條件： 1)具有對(duì)受體細(xì)胞的可轉(zhuǎn)移性 ， 提 高 導(dǎo) 入 細(xì) 胞 的 效率 。 ——對(duì)受體細(xì)胞無害 、易分離 。 2)具有與特定受體細(xì)胞相適應(yīng)的復(fù)制位點(diǎn)或整合位點(diǎn) ，使外源基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳 。 ——能自我復(fù)制 3)具有多種單一的限制性內(nèi)切酶識(shí)別切割位點(diǎn) ， 有利于外源基因的拼接插入 ——有切割位點(diǎn) 4)具有合適的選擇標(biāo)記（報(bào)告基因），便于 DNA重組分子的檢測(cè)。 ——有遺傳標(biāo)記基因 (kb)大腸桿菌源質(zhì)粒；含復(fù)制起始位點(diǎn)，能在大腸桿菌中高拷貝復(fù)制；含氨卞青霉素抗性基因（ Ampr）和四環(huán)素抗性基因（ Tetr）選擇標(biāo)記基因，對(duì)重組子進(jìn)行篩選；含多個(gè)限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)；克隆載體； 載體有兩個(gè)抗藥性基因 ， 插入失活一個(gè)抗藥性基因 ， 而在另一個(gè)基因篩選標(biāo)記存活的是轉(zhuǎn)化子 ，在插入失活的基因篩選標(biāo)記中不存活的是轉(zhuǎn)化子 。 質(zhì)粒的構(gòu)建與改造 1)刪除不必要的 DNA區(qū)域 ， 縮小分子量 ， 提高外源DNA片段裝載量 。 2)滅活某些質(zhì)粒的編碼基因 。 3)加入易于識(shí)別的選擇標(biāo)記基因 。 4） 選擇標(biāo)記基因內(nèi)引入內(nèi)切酶的識(shí)別及
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